无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证

无菌区与设备清洗消毒灭菌的设计及验证钱应璞2010年5月20日济南2023/1/71无菌药品工艺再验证的主要内容验证类型验证内容再验证周期药监部门或法规要求的强制性无菌操作的培养基灌装试验至少二次/年计量器具的强制检定一次/年设备的清洗验证，高效过滤器检漏一次/年发生变更时的“改变”性工艺参数的改变或工艺路线的变更原料、包装材料质量标准的改变或产品包装形式设备的改变生产处方的修改或批量级的改变常规检测表时系统存在着影响质量的变迁迹象每隔一段时间进行的“定期”关键洁净区的空调净化系统与工艺用水系统二次/年无菌药品生产过程中使用的灭菌设备二次/年2023/1/72设备、器具清洗消毒灭菌目的确立可靠的清洁方法和程序，以防止药品在生产过程中受到污染和交叉污染。原则设备的设计、选型、安装、改造和维护必须符合预定用途，应尽可能降低发生污染、交叉污染、混淆和差错，便于操作、清洁、维护，以及必要时进行的消毒或灭菌。要求规定具体而完整的清洁方法、清洁用设备或工具、清洁剂的名称和配制方法、保护已清洁设备在使用前免受污染的方法、已清洁设备最长的保存时限、使操作者能以可重现的、有效的方式对各类设备进行清洁。2023/1/73设备、器具清洗消毒灭菌对设备消毒或灭菌，应规定消毒或灭菌的具体方法、消毒剂的名称和配制方法；设备生产结束至清洁前所允许的最长间隔时限；范围通常只有接触产品设备表面的清洁规程需要验证。非接触产品部分也应考虑；验证的阶段选定清洁方法，制定清洁规程（开发阶段）；制定验证方案（参照物、取样点、合格标准、取样方法和检验方法）；实施验证，获取数据，评价并提出结论；监控及再验证。2023/1/74欧洲清洁与清洁验证的有关法规介绍生产设备的设计应使其能被易于并彻底清洁，其清洁应该根据详细与书面化的程序进行，并只能储藏在清洁与干燥的环境中。清洗与清洁设备的选择与使用不应使其成为污染的来源；应进行清洁验证，以确认清洁程序的有效性。在设定产物残余物，清洁剂与微生物污染的限定值时，其合理性应科学地基于所涉及的各种材料的特性；使用对于检测残余物或污染物具有敏感性的，经验证的分析方法，每一分析方法的检测范围应足以每感地检测到达到一定水平的残余物或污染。2023/1/75设备、器具清洗清洁从设备表面去除可见及不可见物质的过程：活性成份及活性物质的衍生物；清洁剂（来自清洁过程）；微生物（来自物料污染、清洁污染）；消毒剂；润滑剂；环境污染物质；设备运行过程中释放出的异物；冲洗水中残留的异物。清洁验证去除上述污染物，防止可能发生的污染和交叉污染（混淆）2023/1/76设备、器具清洗清洁方法分类手工清洗由操作人员拆、擦洗或用高压水枪清洗；机械磨擦，效果较好，但重现性差；自动清洗由自动控制进行冲洗的清洗，有的带干燥功能；溶解、冲击法去污，有些部位不容易清洁，但重现性好；半自动清洗以上两种方式相结合的清洗过程；2023/1/77设备、器具清洗清洗原理的基础溶剂移动到表面扩散与对流溶剂和尘垢“反应”反应产物通过扩散与对流进行远离表面的移动；清洗的程序拆卸方法预洗/检查要求清洗（清洁剂、方法、时间、温度范围）淋洗（用符合药典标准的水、固定的方法和固定的时间）装配：按说明书、示意图要求装配）2023/1/78设备、器具清洗干燥：明确方式和参数检查；符合设定标准，包括目检贮存：保持设备及系统完好状态的方法，如倒置、放在层流罩下、在线灭菌、规定存放时间；在线清洗系统的设计必须满足特定工艺的清洁要求；在线清洗溶液与所有被污染的表面接触并持续补充溶关键变量的自动控制。浓度（在线清洗溶液的）；温度；时间（在线清洗溶液暴露的）；压力；2023/1/79器具清清洗与与灭菌菌工艺艺的设设计思思路器具清清洗的的关键键是应应具有有“可可重复复性””，为为得到到可重重现的的和一一致的的结果果和清清洗结结果方方便列列入文文件，，GMP要求求在在生生产产过过程程中中所所有有接接触触药药品品的的部部件件，，如如玻玻璃璃器器皿皿，，容容器器，，桶桶，，管管道道，，灌灌装装部部件件等等，，都都必必须须采采用用““可可重重复复””，，““能能被被记记录录””的的清清洁洁方方式式来来去去除除残残留留杂杂质质。。人工工清清洗洗无无法法验验证证和和重重复复，，所所有有直直接接或或间间接接接接触触药药液液的的容容器器具具均均采采用用CIP或器器具具清清洗洗机机清清洗洗，，以以避避免免难难以以验验证证的的手手动动清清洗洗；；经过过初初步步手手工工清清洗洗后后，，放放入入器器具具清清洗洗机机进进行行清清洗洗。。之之后后进进行行装装配配，，所所有有器器具具有有灭灭菌菌前前，，都都应应使使用用适适用用于于蒸蒸汽汽和和环环氧氧乙乙烷烷两两种种方方法法灭灭菌菌的的呼呼吸吸材材料料进进行行适适当当无无菌菌包包装装。。再再进进入入湿湿热热灭灭菌菌柜柜灭灭菌菌。。对对需需要要传传入入A/B级使用用器具具也必必须进进行双双层包包装。。2022/12/2910典型工工艺系系统的的清洗洗清洁方方法在线清清洗（（CIP）-设备处处于原原位，，通常常可自自动控控制也也可半半自动动，例例如多多个容容器的的洗涤涤采用用洗涤涤CIP机组清清洗；；离线清清洗-小型型设备备和工工器具具适合合。取清洗洗残余余水样样确认认参考清清洗验验证标标准残留物小于于等于10ppmpH值：与原来来注射用水水一致；杂菌小于25cfn/ml;内毒素小于于0.25EU/ml；2022/12/2911工艺艺系系统统清清洗洗确确认认清洁洁验验证证中中常常见见参参考考方方法法加参参考考品品法法加入入容容易易测测试试（（化化合合物物））成成分分的的方方法法，，经经清清洁洁后后测测残残留留；；限度度试试验验法法在注注射射用用水水中中加加入入理理论论计计算算量量的的组组分分，，使使之之刚刚好好是是残残留留控控制制标标准准，，然然后后将将淋淋洗洗水水样样用用同同一一方方法法进进行行比比较较；；参照物物增量量法将某个个要控控制组组分的的量加加大，，解决决量小小无法法测试试的问问题，，再测测清洁洁后的的残留留；浓缩法法将样品品浓缩缩，测测试后后计算算。2022/12/2912工艺系统统清洗确确认最难清洗洗产品活性物质质的溶解解度（水水/清洗洗剂）；；剂型；活性物质质在产品品中的浓浓度；辅料的物物理及化化学性质质；一些特殊殊的工艺艺过程（（加热、、匀化、、混合等等）；清洗工的的经验。。2022/12/2913工艺系统统清洗确确认确定最难难清洁部部位和取取样点死角清洁剂不不易接触触到的部部位；压力小、、流速很很低的部部位；容易吸附附残留物物的部位位；残留物限限度的确确定最小批量量；最具有活活性的产产品；最大日服服用剂量量。2022/12/2914工艺系统统清洗确确认清洗程度度的检测测清洁后设设备的目目检化学检验验棉签擦拭拭取样，，确定残残留在设设备表面面活性物物质的浓浓度；冲洗溶剂剂取样，，确定残残留在设设备表面面活性物物质的浓浓度，适适用于棉棉签无法法取样的的部件；；最终冲洗洗水取样样，确定定残留在在设备表表面所有有水溶性性物质及及清洁剂剂的残留留量。微生物检检验棉签取样样检验最终冲洗洗水取样样检验总有机碳碳（TOC））测试测量擦洗洗或冲洗洗后的水水样中总总有机碳碳的量。。2022/12/2915工艺系统统清洗确确认分析方法法确认分析析方法：：能够检检测出残残留物或或污染物物。特定的物物质可以以检出；；在允许的的清洁限限度内可可以检出出（灵敏敏度）灵敏度和和特殊性性HPLC、GC、光谱法、、TOC；；验证分析析方法应应该包括括：精密度、、线性和和选择性性；回收率；；再现性；；检测限能够检测测出已确确定限度度的残留留物/污污染物。。2022/12/2916消毒灭菌菌方法的的设计与与确认2022/12/2917药品无菌性性的形成原原理无菌相关的的术语无菌保证值值（SAL）：：指经灭菌后后非无菌品品的概率。。最终灭菌产产品非无菌菌吕的概率率不超过百百万分之一一，即SAL≤10-6；非最终灭灭菌产品非非无菌品的的概率不超超过千分之之一，即SAL≤10-3Z值：当某种种微生物的的D值下降（或或上升）一一个对数单单位时，其其温度应升升高（或降降低）度数数。FT：指T摄氏度下的的灭菌时间间；F0：指标准灭菌菌时间。将将121℃作为标准灭灭菌温度，，当Z设定为10℃时，灭菌程程序赋予被被灭菌品121℃下的等效灭灭菌时间；；2022/12/2918药品无菌性性的形成原原理D值-微生物物耐热参数数在特定灭菌菌条件下，，使微生物物杀灭90%（下降降一个对数数单位）所所需的分钟钟数。影响D值的因素：：使用的微生生物；微生物贮存存条件；复苏和培养养条件；灭菌柜工作作时间；起始温度；；培养基悬置置及复苏类类型；灭菌后段持持续时间及及温度；蒸汽饱和度；；包装情况。2022/12/2919注射剂无菌性性的形成原理理注射剂无菌性性的形成的三三种主要工艺艺湿热灭菌工艺艺；干热灭菌工艺艺；除菌过滤工艺艺。2022/12/2920注射剂的无菌菌标准最终灭菌产品品普遍接受的的无菌标准灭菌后，最终终灭菌注射剂剂或其它关键键设备微生物物存活的概率率达到10-6，即一百万个个已灭菌物品品或制剂中存存活的微生物物低于一个。。非最终灭菌产产品的无菌标标准产品中微生物物存活的概率率达到10-3，即保证1000个制剂剂中存活的微微生物数低于于一个。2022/12/2921湿热灭灭菌工工艺湿热灭灭菌工工艺的的用途途药品小容量量注射射剂玻璃瓶瓶；塑塑料瓶瓶；软软包装装材料料。器材：：过滤器器；胶塞；；工器具具；配料罐罐、接接收罐罐；药液、、工艺艺用水水管道道；灌装用用具；；无菌工工作服服、口口罩、、手套套。2022/12/2922干热灭灭菌工工艺干热灭灭菌工工艺的的用途途金属属、、玻玻璃璃制制品品/工工具具和和干干粉粉的的灭灭菌菌与与除除热热原原干热热灭灭菌菌参参照照温温度度干热热灭灭菌菌中中孢孢子子的的D值是是变变化化的的；；干热热灭灭菌菌温温度度分分布布均均一一性性及及穿穿透透性性均均不不如如湿湿热热灭灭菌菌；；国际际上上以以121℃为标标准准灭灭菌菌温温度度，，相相应应灭灭菌菌时时间间以以F0表示示；；干热热灭灭菌菌一一般般取取170℃为标标准准参参照照温温度度，，相相应应灭灭菌菌时时间间以以FH表示示；；中国国药药典典中中规规定定的的是是：：160-170℃2小小时时以以上上；；170-180℃1小小时时以以上上；；250℃45分分钟钟以以上上。。2022/12/2923干热灭菌菌工艺干热灭菌菌与去热热原的关关系去热原工工艺条件件比孢子子杀灭程程序要苛苛刻得多多，通常常相当于于标准干干热灭菌菌进行FH的数十倍倍；如果干热热法去热热原工艺艺能使细细菌内毒毒素下降降3个对对数单位位，就不不必再进进行微生生物的生生物指示示剂挑战战性试验验。2022/12/2924洁净/无菌环环境的消毒灭灭菌2022/12/2925洁净/无菌环环境的消毒灭灭菌与微生物物监控无菌药品中污污染菌的来源源生产环境；操作人员；原料及内包装装材料；工艺用水、氮氮气、压缩空空气；生产设备：药药液（粉）接接收罐、灌药药机、工器具具；生产区域使用用的清洁工具具及消毒剂等等。以微生物鉴别别系统为调查查手段API系统（AnalyticalProfileIndex);FDA对菌的种属比比细菌的数量量更重视；要求：希望能够最大大限度的把被被污染的药品品检查出来；；要尽量克服无无菌检查的局局限性。2022/12/2926洁净/无菌环环境的消毒灭灭菌与微生物物监控洁净室内人员员管理与微生生物监控人员行为的污污染和控制措措施人眼可见最小小颗粒为30微米；坐着不动能产产生100000个颗粒粒；行走能产生5000000个颗粒；；跑动能产生15000000个颗粒粒；微生物在空气气和体内外表表面；包括细菌、病病毒、霉菌和和酵母菌；人体携带的微微生物数量惊惊人，且根据据个人卫生习习惯的不同因因人而异。2022/12/2927洁净/无菌菌环境的消消毒灭菌与与微生物监监控管理人员应应具有能务务，资格和和经验；组织机构完完善、关键键岗位人员员配备合理理；生产，工程程，维护，，保洁等部部门所有员员工的培训训；洁净厂房；；卫生学；微生物学；；洁净/无菌菌区域内行行为的培训训。制订健康规规定，行为为规范，服服装规则；；控制人员到到最小量，，出入控制制。2022/12/2928洁净/无菌菌环境的消消毒灭菌与与微生物监监控洁净/无菌菌区域消毒毒灭菌消毒对付微生物物的一种手手段；其目的是消消除其活性性或者破坏坏微生物；；在地上、墙墙上、玻璃璃上、固定定管路的外外部、贮罐罐外部、盥盥洗盆、人人员的手表表面喷洒消消毒剂；注意：消毒毒可以使孢孢子、微生生物产生耐耐受性；灭菌：以完全杀灭灭微生物（（包括芽孢孢和顽固的的有机体））为目的；；消灭一切有有机体以及及完全铲除除其恢复活活性能力的的手段。2022/12/2929洁净/无菌菌环境的消消毒灭菌消毒剂定义义能消除以细细胞繁殖形形态出现微微生物污染染的化学物物质。理想的消毒毒剂抗菌谱广；；低毒或无毒毒；无腐蚀性，，无污染；；有洗洗涤涤作作用用；；稳定定性性好好；；作用用迅迅速速；；作用用持持久久；；价格格低低廉廉；；2022/12/2930洁净净/无无菌菌环环境境的的消消毒毒灭灭菌菌消毒毒剂剂验验证证通过过特特定定的的微微生生物物与与某某消消毒毒剂剂在在规规定定的的使使用用浓浓度度下下，，接接触触规规定定的的时时间间后后，，对对微微生生物物进进行行培培养养、、计计数数，，考考察察消消毒毒剂剂的的消消毒毒/杀杀菌菌效效果果。。2022/12/2931洁净/无菌环环境的消毒灭灭菌消毒剂的使用用无菌区域使用用的消毒剂须须通过0.22微米的无无菌过滤；为克服耐药性性，应轮流使使用不同种类类的消毒剂；；使用消毒剂消消毒后，只能能用消毒或灭灭菌的清洁工工具；使用消毒剂的的人员要接受受相关的培训训；消毒剂应有专专门的进入各各生产区域的的途径；异常情况的处处理方案；带菌实验器具具和耗材要灭灭菌处理。2022/12/2932洁净/无菌环环境的消毒灭灭菌影响消毒剂使使用的因素菌种；培养基组分；；接触时间；中和剂的种类类；表面张力；样品量；测试/验证方方法；接种；培养时间/温温度；pH值；渗透压；回收率；培养基性质。。2022/12/2933洁净/无菌环环境的消毒灭灭菌与微生物物监控洁净室常用消消毒剂醇类：醇类消消毒剂使微生生物的蛋白质质变性，在没没有水的情形形下，蛋白质质不易被变性性，在乙醇中中加入一些水水会使杀菌效效力更佳。酚类化合物：：广谱抑菌，，对革兰氏阳阳笥细菌和革革兰氏阴性细细菌以及真菌菌均有杀伤作作用。酚类消消毒剂适宜用用水溶液或含含乙醇的水溶溶液配制。有有效浓度为400ppm到1300ppm之间。季铵盐类化合合物：季铵盐盐类化合物在在酸性或碱性性环境均能杀杀死细菌或真真菌，在碱性性环境中的杀杀菌效力稍强强一些。如新新洁尔灭溶液液（0.05%-0.1%的苯扎溴溴铵溶液）。。液体灭菌剂和和杀孢子剂：：次氯酸钠、、二氧化氯、、过氧化氢、、戊二醛、甲甲醛和过氧乙乙酸等；消毒剂定期交交替使用不同同消毒剂是为为了防止环境境中微生物对对同一种消毒毒剂产生抗性性影响实际的的消毒效果。。2022/12/2934洁净/无菌菌环境境的消消毒灭灭菌无菌生生产场场地常常用化化学熏熏蒸对对区域域进行行灭菌菌，亦亦称大大消毒毒；灭菌介介质甲醛气气体/戊二二醛；；石碳酸酸与乳乳酸混混合气气体（（1：：1））气化双双氧水水；臭氧、、紫外外线；；灭菌方方法对对室内内换气气速度度的影影响气体熏熏蒸的的废气气排除除速度度与熏熏蒸方方法有有关；；气体熏熏蒸的的废气气排除除与中中和处处理与与否有有关；；与HVAC系统中中的排排风与与新风风系统统设计计有关关，通通常希希望新新风在在排废废气时时的进进风量量与回回风量量相等等。与自动动控制制水平平有关关。通过化化学气气体残残留测测试确确认系系统是是否满满足工工艺要要求的的灭菌菌周期期。甲甲醛消消毒与与排气气至人人员可可以进进入周周期为为24小时时。2022/12/2935洁净/无菌菌环境境的消消毒灭灭菌气体灭灭菌的的细菌菌挑战战试验验方法：：每个试试验位位置的的配养养皿内内有含含107个枯草草杆菌菌的试试纸2张；；设定灭灭菌程程序熏熏蒸后后取一一张试试纸作作菌检检（普普通肉肉汤配配养基基37℃，72小时时），，如果果无菌菌则试试验完完成，，但属属实验验不成成功。。须减减少药药量重重新熏熏蒸直直至为为阳性性，即即有菌菌有各各另一一张试试纸作作含菌菌数试试验；；合格标准：：灭菌后枯草草杆菌残留留104为合格（即即下降3个个对数单位位）；熏蒸无菌后后室内残留留量的测试试。应有残余浓浓度小于1-2ppm。2022/12/2936洁净/无菌菌环境的消消毒灭菌甲醛或杀孢孢子空间灭灭菌效果验验证实例通过用生物物指示剂进进行细菌挑挑战性试验验，消毒剂剂灭菌前后后表面微生生物检测，，来检查其其的灭菌效效果；接受标准：：生产指示剂剂挑战性试试验接受标标准：含菌菌量为105-106和103的菌条消毒毒后，无菌菌条件下放放入配套增增菌液中于于37℃培养72小小时，阳性性对照为加加入未消毒毒菌条的增增菌液，阴阴性对照为为未加指未未剂的增菌菌液；空间熏蒸消消毒的方法法：在无菌区有有一套独立立的熏蒸消消毒系统，，使消毒剂剂在各房间间内形式雾雾状水气渗渗透到洁净净区的每一一角落，通通过验证确确定消毒的的剂量、空空间的温湿湿度、熏蒸蒸时间和雾雾化程序。。2022/12/2937洁净/无菌菌环境的消消毒灭菌消毒剂用量量：37-40%甲醛：：12-15ml/m3，中和用25-28%氨水（12-15ml/m3）；杀孢子剂为为22%的的过氧化氢氢及4.5%的过氧氧乙酸，60ml/m3，5%的稀释液（（也可根据据洁净厂房房设施及地地面抗氧化化的能力适适当提高浓浓度）；空间熏蒸蒸消毒的的条件：：调整万级级无菌区区域空调调为消毒毒状态；；甲醛：：设定无无菌区域域温度为为35-40℃，湿度为为65-75%；熏蒸蒸4小时时；杀孢孢子剂：：设定无无菌区域域温度为为20-25℃，湿度为为40-50%，熏蒸蒸2小时时。2022/12/2938洁净/无无菌环境境的消毒毒灭菌测试方法法生物指示示剂挑战战性试验验：确定定生物指指示剂的的摆放位位置，放放在生产产重点区区域，及及污染高高风险区区域，避避免回风风口。消消毒前将将生物指指示剂放放入洁净净区的各各个测试试点，使使菌条暴暴露在空空气下，，消毒结结束后待待洁净区区无刺激激性气味味后进入入洁净区区收回菌菌条，无无菌条件件下依次次将菌条条放入配配套增菌菌液中，，在37培养24小时时、48小时、、72小小时，记记录结果果。同时时做阳性性对照和和阴性对对照；表面微生生物测试试：检测测人员分分别在消消毒前后后进入洁洁净区，，对地面面、墙面面、窗台台设备等等进行表表面微生生物检测测，比较较结果，，验证甲甲醛或杀杀孢子剂剂的灭菌菌效果。。2022/12/2939洁净/无无菌环境境的微生生物监控控2022/12/2940洁净/无无菌环境境的微生生物监控控无菌设施施环境监监控程序序悬浮粒子子监测浮游菌监监测表面活菌菌监测人员携带带的活菌菌监测温度和湿湿度监控控压差监控控环境监测测的样品品表面样品品：从关关键环境境内部和和外部通通过擦拭拭和/或或接触皿皿收集取取得。活菌/粒粒子：在在关键区区域内部部和外部部空气中中，通过过被动或或主动方方法收集集取得。。人员监测测：从操操作员头头部、肩肩膀、胸胸部和手手部表面面取得的的样品。。2022/12/2941洁净/无无菌环境境的微生生物监控控洁净/无无菌环境境的微生生物控制制，主要要使用传传统的沉沉降菌测测试法和和浮游菌菌采样检检测法来来判断。。浮游菌采采样仪工工作原理理抽真空，，空气进进入；微生物与与培养基基撞击后后粘在培培养基上上面；取样培养养基，送送检；特点：采样速度度快，待待机时间间长；减少菌落落的重叠叠；无需对结结果进行行校正；；微生物还还原率高高；可根据需需要设定定取样体体积和延延时时间间。2022/12/2942洁净/无无菌环境境的微生生物监控控灌装关键键控制点点要求连连续检测测的空气气质量洁净度浮游菌沉降菌2022/12/2943洁净/无菌环环境的微生物物监控监控报警限度度表示和纠偏偏限度标准对于微生物测测试的取样频频次，如果出出现下列情况况应考虑修改改，在评估以以下情况后，，也应确定其其它项目的测测试频次：连续超过报警警限度和纠偏偏限度；停工时间比预预计延长；关键区域内发发现有传染的的试剂；在生产期间，，空气净化系系统进行任何何重大的维修修；环境设施的限限制引起工艺艺的改变；日常操作记录录反映出倾向向性的数据；；净化和消毒规规程的改变；；引起生物污染染的事故等。。2022/12/2944谢谢！2022/12/29459、静夜夜四无无邻，，荒居居旧业业贫。。。12月月-2212月月-22Thursday,December29,202210、雨中黄黄叶树，，灯下白白头人。。。14:05:1514:05:1514:0512/29/20222:05:15PM11、以我独沈沈久，愧君君相见频。。。12月-2214:05:1514:05Dec-2229-Dec-2212、故人江海别别，几度隔山山川。。14:05:1514:05:1514:05Thursday,December29,202213、乍见见翻疑疑梦，，相悲悲各问问年。。。12月月-2212月月-2214:05:1514:05:15December29,202214、他乡生白发发，旧国见青青山。。29十二月月20222:05:15下午14:05:1512月-2215、比不了得得就不比，，得不到的的就不要。。。。十二月222:05下下午12月-2214:05December29,202216、行动出成成果，工作作出财富。。。2022/12/2914:05:1514:05:1529December202217、做前前，能能够环环视四四周；；做时时，你你只能能或者者最好好沿着着以脚脚为起起点的的射线线向前前。。。2:05:15下下午2:05下下午午14:05:1512月月-229、没有失失败，只只有暂时时停止成成功！。。12月-2212月-22Thursday,December29,202210、很多事事情努力力了未必必有结果果，但是是不努力力却什么么改变也也没有。。。14:05:1514:05:1514:0512/29/20222:05:15PM11、成成功功就就是是日日复复一一日日那那一一点点点点小小小小努努力力的的积积累累。。。。12月月-2214:05:1514:05D