非洲猪瘟荧光定量PCR专项测试卷含答案

非洲猪瘟荧光定量PCR专项测试卷含答案一.单项选择题（每题有且只有一个最优选项，每小题3分或5分，共52分）1.配制荧光定量PCR体系最合理的加样顺序是（）A.ASFV-反应液→DNA酶混合液→ASFV-内标(正确答案)B.ASFV-内标→DNA酶混合液→ASFV-反应液C.DNA酶混合液→ASFV-内标→ASFV-反应液D.DNA酶混合液→ASFV-反应液→ASFV-内标2.下列应注意事项表述不正确是（）A.对于人员采样，主要用湿润的棉签分别采集人员的头皮、鼻腔、手掌以及所穿鞋的鞋底B.收到样品后，首先要检查样品数量、包装以及类型，核对样品信息C.同一批次的试剂可以混合使用，不同批次的试剂不能混合使用D.样本前处理和PCR检测可以在同一个房间内进行(正确答案)3.下列实验操作过程表述不正确是（）A.对于用10mL离心管装的2支棉签擦拭物样品，首先要加入适量的生理盐水，充分振荡后，倒入新1.5mL离心管中B.取新的八联管，加入核酸裂解液与待检样品，再直接加入Mix混合液，盖紧八联管盖，充分混匀，离心后即可上机检测(正确答案)C.吸取Mix混合液时，不小心碰到1.5mL离心管外壁，此时应换新的枪头D.配制混合体系前，需充分振荡试剂，随后瞬时离心4.下表为试剂配制体系一览表（部分），现需要配制体系数为6的混合液。已吸取228μLASFV-反应液于离心管中，现需要再吸取12μLDNA酶混合液，该如何操作（）

A.选用规格为1000μL的单道移液器，调节刻度至12μL，吸取DNA酶混合液一次B.选用规格为200μL的单道移液器，调节刻度至12μL，吸取DNA酶混合液一次C.选用规格为10μL的单道移液器，调节刻度至6μL，吸取DNA酶混合液两次(正确答案)D.选用规格为10μL的单道移液器，调节刻度至10μL，吸取DNA酶混合液一次，再调节刻度至2μL，再吸取DNA酶混合液一次5.未开封的检测试剂盒应储存在；已开封的检测试剂盒可短期存放在（）A.-20℃；4℃(正确答案)B.-20℃；常温C.常温；常温D.4℃；常温6.用完移液器后应当调到（）量程A.最大量程，扭旋至最大刻度B.额定最大量程，扭旋至额定最大刻度(正确答案)C.最小量程，扭旋至额定最小刻度D.不需要调动，方便下次使用7.现有四支装有液体的离心管①②③④（如下图）需要12000rpm/min离心5min，下列选项中离心管位置摆放正确的是（）

A

B(正确答案)

C

D8.实验结束后，需要用酒精擦拭移液器，最佳擦拭顺序为（）A.95%，阴性对照专用10μL移液器→阳性对照专用10μL移液器→200μL移液器B.75%，阴性对照专用10μL移液器→阳性对照专用10μL移液器→200μL移液器C.95%，阴性对照专用10μL移液器→200μL移液器→阳性对照专用10μL移液器D.75%，阴性对照专用10μL移液器→200μL移液器→阳性对照专用10μL移液器(正确答案)9.下面实验操作正确的是（）

A

B

C

D(正确答案)10.实验台面上各类耗材、移液器等摆放最合理的是（）

A

B(正确答案)

C

D11.若实验出现PCR反应阴性质控失败（出现阳性或可疑结果），以下哪个不是原因（）A.错加样品，把其他样品错误地加入阴性反应孔B.操作不严谨，导致阴性反应孔被污染C.样品前处理过程中注射器污染(正确答案)D.八联管盖没盖紧12.猪警2000仪器每次最多可以检测（）个样品。A.24个B.23个C.22个D.21个(正确答案)13.以下哪项不是PCR实验室设计的一般原则（）。A.各区合并(正确答案)B.标志明显C.分区合理D.单向流动14.使用国测生物BTG一步法病原检测，核酸裂解后，需要离心（）A.1-5minB.5-10min(正确答案)C.10-15minD.15-20min二.判断是非题（填“是”或者“否”，每小题2分，共28分）1.ASFV是DNA病毒。（）是(正确答案)否2.检测试剂盒反复冻融的次数最多不能超过8次。（）是否(正确答案)3.阴阳性对照质控失败，但检测样本全部为阴性，可以直接判定检测样本全部为阴性。（）是否(正确答案)4.核酸裂解前，应当充分混匀，瞬时离心，不能有气泡产生。（）是否(正确答案)5.标有阳性对照的10μL移液器均可用于加样品核酸。（）是否(正确答案)6.实验结束后，PCR产物可以直接丢进垃圾桶，不需要做其它处理。（）是否(正确答案)7.荧光定量PCR检测前，八联管内的液体应当确保完全没有气泡。（）是(正确答案)否8.处理擦拭物样品时可随意加入生理盐水，只需要保证最后能取出1mL左右液体至1.5mL离心管中。（）是否(正确答案)9.实验结束后整理台面，酒精棉球可先擦桌面再擦拭移液器。（）是否(正确答案)10.每天工作结束后需要把实验垃圾都带离实验区域。（）是(正确答案)否11.开八连管盖的正确方式是用左手压住八联管下部，右手从一端直接扯起。（）是否(正确答案)12.主机在运行时禁止覆盖任何东西，不准在机器运行期间打开热盖。（）是(正确答案)否13.实验结束后不要立即关闭电源，保持待机状态10min后再关闭。（）是(正确答案)否14.实验出现阴性对照质控失败，FAM通道CT值为38.5，而样本FAM通道无CT值，此时可通过调节阈值使质控合格，不需要重新检测。（）是(正确答案)否三.分析简答题1.在实际检测过程中，出现如下图所示的检测结果时，分析出现这样检测结果的可能原因并提出下一步的解决措施。（8分）

检测结果如下表所示，

所检样品背景信息如下：

()答案解析：原因：唾液中可能含有未消化的饲料（大量的脂肪、蛋白）抑制PCR反应，导致内参无法正常扩增进而导致HEX通道无CT值，样本检测结果无效；

措施：将样本离心后取上清液做5倍、10倍稀释，混匀后离心，按常规步骤再次检测。2.实验中出现提取阴性对照和反应阴性对照均质控失败，阳性对照质控合格，样本FAM通道有CT值，请分析是何原因，并给出解决方案。（12分