临床基因扩增检验的质量保证

临床基因扩增检验的

质量保证

定义质量保证(QualityAssurance,QA)为一产品或服务满足特定质量要求提供充分可信性所必要的有计划的和系统的措施。

室内质量控制（InternalQualityControl,IQC)由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。

定义室间质量评价（ExternalQualityAssessment,EQA）为客观比较一实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位机构，采取一定的办法，连续、客观地评价实验室的结果，发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性。这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用来决定在实时的测定结果的可接受性。当EQA用来为执业许可或实验室认证的目的而评价实验室操作时，常描述为实验室能力比对检验（Proficiencytesting,PT）。在以前的文献中，EQA常描述室间质量控制。定义

准确度(Accuracy)

待测物的测定值与其真值的一致性程度。准确度不能直接以数值表示，通常以不准确度来间接衡量。对一分析物重复多次测定，所得均值与其真值或参考靶值之间的差异亦即偏差即为测定的不准确度。

偏差(Bias)

待测物的测定值与一可接受参考值之间的差异。定义精密度(Precision)在一定条件下所获得的独立的测定结果之间的一致性程度。与准确度一样，精密度同样也是以不精密度来间接表示。测定不精密度的主要来源是随机误差，以标准差（SD）和/或变异系数（CV）具体表示。SD或CV越大，表示重复测定的离散度越大，精密度越差，反之则越好。

定义批(Run)在相同条件下所获得的一组测定。

均值（Mean）

标准差（Standarddeviation,SD或s）

变异系数（Coefficientofvariation,CV）

定义正态分布(Gaussiandistribution)当一质控物用同一方法在不同的时间重复多次测定，当测定数据足够多时，如以横轴表示测定值，纵轴表示在大量测定中相应测定值的个数，则可得到一个两头低，中间高，中为所有测定值的均值，左右对称的“钟形”曲线，亦即正态分布，又称高斯分布。

定义正态分布的基本统计学含义可用均数（）、标准差（s）和概率来说明。临床基因扩增检验实验室

常规测定步骤标本收集：选择测定项目、标本收集和保存。实验室测定：标本接收、贴标签、样本处理、核酸扩增、产物检测、测定的有效性和临床诊疗价值。报告和解释：结果发出、结果解释和临床管理。质量保证、室内质控和室间质评之间的关系临床基因扩扩增检验实实验室管管理暂行办办法总则实验室规划划、设置和和审批实验室管理理监督管理附则临床基因扩扩增检验实验室的设设置临床标本的的接收基因扩增检检验实验室室设置的一一般要求基因扩增检检验实验室室工作流程程临床标本的的接收通常的工作作流程：标标本采集血血清分分离编号保保存或检检测应在四个测测定区域之之外的地方方或区域内内接收接收的标本本应收集在在原始容器器中在核酸提取取时带入至至标本制备备区临床基因扩扩增实验室室设置的一一般原则各区独立注意风向因地制宜方便工作“十六字方方针”基因扩增检检验实验室室工作流程程进入各个工工作区必须须遵循严格格的单一方方向顺序。。临床标本收收集、运送送、保存及及其质量量控制标本收集标本保存标本运送标本收集标本采集时时间对扩增增检测结果果的影响标本采集部部位的准备备标本的类型型和采集量量采样质量的的评价采样及运输输容器标本采集中中的防污染染标本采集时时间对扩增增检测结果果的影响在疾病发展展过程中，，标本采集集过早或过过晚都可能能会给出假假阴性结果果。标本采集部部位的准备备标本采集部部位的清洁洁消毒可去去掉污染的的微生物或或其它杂物物,但应适适度,过度度清洁消毒毒有可能会会去掉或破破坏靶微生生物,故标标本采集部部位的准备备应由训练练有素的人人员进行。标本的类型型和采集量量标本的类型型和采集量量应根据所所测病原体体而定。一一般来说，，如果标本本的量对病病原体培养养够用的话话，则其量量亦足以用用于核酸提提取及其后后的扩增检检测。对于定量测测定来说，，对标本的的收集要求求更为精确确。采样质量的的评价血清(浆)标本:溶溶血、脂血血等；分泌物、痰痰：评价内内容包括细细胞组成，，所需类型型细胞的数数量和核酸酸总量。评价方法：：包括肉眼眼观察,显显微镜下观观察和化学学分析等。。采样及运输输容器标本的采集集材料如棉棉签应为一一次性使用用；运输容器亦亦应为密闭闭的一次性性装置；采样所用的的防腐剂、、抗凝剂及及相关试剂剂材料不应应对核酸扩扩增及检测测过程造成成干扰。标本采集中中的防污染染采集中要特特别注意污污染，防止止混入操作作者的头发发、表皮细细胞、痰液液等；如使用玻璃璃器皿，必必须经高压压灭菌，以以使可能存存在的RNAase失活。标本保存靶核酸(尤尤其是RNA)易受受核酸酶的的作用而迅迅速降解，，因此标本本的保存对对于核酸扩扩增测定的的有效性极极为重要。。使用GITC作为稳稳定剂保存存标本，标标本可在室室温下稳定定约7天。。标本保存临床体液标标本长期保保存应在-70℃下下。如为提取核核酸后用于于DNA扩扩增分析的的样本，可可于10mmol/LTris,1mmol/LEDTA(pH7.5～8.0)缓缓冲液中4℃下保保存。用于RNA扩增分析析的样本，，则应于上上述缓冲液液中-80℃或液氮氮下保存。。核酸的乙醇醇沉淀物则则可于-20℃下保保存。标本运送样本一经采采集，则应应尽可能快快的送至检检测实验室室。样本中如加加入了适当当的稳定剂剂,如用于于RNA测测定加入GITC的的血清(浆浆)样本和和用于DNA测定的的EDTA抗凝血等等,则可在在室温下运运送或邮寄寄。实验室应根根据待测靶靶核酸的特特性，对各各种临床样样本的运送送条件作出出相应的规规定。临床基因扩扩增检验的的室内质量量控制测定前的质质量控制核酸样本的的制备及其其质量控制制统计学质量量控制质量控制的的评价测定前质量量控制实验室设施施、仪器设设备及管理理理想的试剂剂和操作方方法人员培训实验室室设施施、仪仪器设设备及及管理理临床基基因扩扩增检检验实实验室室应有有充分分合理理的空空间、、良好好的照照明和和空调调设备备；实验室室仪器器设备备应保保养良良好，，实验验用品品要达达到相相应的的要求求。加样基因扩扩增仪仪器设设备的的质控控带滤塞塞吸头头的使使用及及质检检首先制制备一一个含含1～～2%甘油油及色色素（（如甲甲基橙橙）的的水溶溶液，，如果果吸头头的最最大体体积为为100μμl，，则将将加样带滤塞塞吸头头的使使用及及质检检用实验验来检检验带带滤塞塞吸头头的质质量：：先纯纯化制制备数数份强强阳性性和数数份阴阴性核核酸标标本，，然后后将加加样器器吸取取量设设至扩扩增加加样所所需的的体积积，使使用扩增仪仪孔间间温度度的重重复性性和均均一性性的检测方方法一是使使用一一种热热电偶偶探针针、微微伏转转换器器和自自动图图示记记录仪仪组成成扩增增加热热模块块孔内内温度度监测测记录录系统统，当当孔间间温度度变异异超出出1℃时时，具体做法是将装有TE缓冲液并上加石蜡油的扩增反应管放置于扩增仪各孔中，热电偶探针透过扩增反应管盖插至缓冲液中，然后按程序进行一个常规的PCR扩增，加热模块如为96孔，则至少要测定12孔不同位置孔内的温度，在整个扩增过程中，可移动热电偶探针至上述不同孔中监测温度，但每一孔内温度监测至少要有一个扩增周期。

扩增仪仪孔间间温度度的重重复性性和均均一性性的检测方方法第二种种方法法并非非直接接测定定孔内内温度度，而而是通通过扩扩增功功能来来间接接获知知孔间间的均均一性性，即即将加加有一一已知知的含含一定定浓度度的阳阳性质质控样样本的的扩增增反应应管置置于扩扩增仪仪各孔孔中按按常规规进行行扩增增检测测，观观察结结果的的一致致性程程度，，如果果有某某一个个或几几个孔孔结实验室室的日日常工工作管管理工作作项项目目核核查查点点水浴箱箱、微微量恒恒温器器（加加热模模块））□□校准准及记记录温温度10%次氯氯酸钠钠溶液液□□新新鲜配配制生物安安全柜柜□□先起起动运运行30分分钟后后再开开始工工作室内质质控弱阳性性质控控（定定性））□□有低、中中、高高浓度度质控控（定定量））□□有阴性质质控：：原样样本□□有有经历提提取过过程的的空管管□□有有仅含扩扩增反反应混混合液液管□□有实验台台面□□使使用后后用10%次氯氯酸钠钠溶液液消毒毒，再用70%乙醇醇清洁洁□紫外外照射射加样器器、离离心机机□□使使用后后用10%次氯氯酸钠钠溶液液消毒毒，再用70%乙醇醇清洁洁实验室室各区区□□遵遵循单单一工工作流流向□紫外外照射射理想的的试剂剂和操操作方方法试剂盒盒的质质检定量测测定的的精密密度是是测定定组成成步骤骤的变变异和和的平平方根根(SD)=上式中中SDa、SDb、SDc是步骤骤a、、b、、c等等（例例如试试剂准准备、、标本本采集集、核核酸提提取、、扩增增和产产物检检测等等）的的标准准差；理想的的试剂剂和操操作方方法改善测测定精精密度度的实验室室质量量管理理体系系的建建立质量手手册质量体体系程程序文文件标准操操作程程序质量管管理的的内涵涵写你所所做的的做你所所写的的记录你你已做做的怎样编编写SOP？人员培培训临床基基因扩扩增检检验的的操作作主要要是标标本处处理中中的核核酸提提取步步骤，，这其中所所涉及的又主要要是加样样器的使使用，尽尽管操作作简单，，但由于均均为微量量操作，，要获得得稳定可可靠的测测定结果果，操作作人员需需要一定定的专业业技术知知识和经经验，要要尽可能能做到知知其然又知其所所以然。。核酸样本本的制备备、扩增增检测及及其质质量控制制一般核酸酸提取试试剂促使使靶核酸酸从细胞胞内释出出的原理理核酸的分分离纯化化靶核酸提提取的质质量临床标本本及核酸酸提取中中可能存存在的抑抑制和干干扰物质质核酸样本本制备及及扩增检检测的质质控产物检测测的质控控一般核酸酸提取试试剂促使使靶核酸酸从细胞胞内释出出的原理理靶核酸可可以与宿宿主细胞胞整合，，核内游游离及胞胞浆内各各种构形形存在于于细胞内内，如测测定的是是病原微微生物,则靶核核酸存在在于细菌菌、病毒毒、原虫虫或真菌菌细胞内内，如果果上述细细胞破裂裂,则靶靶核酸亦亦可存在在于细胞胞外。一般均使使用去垢垢剂(如如Triton-100)裂裂解细胞胞，用一一种蛋白白裂解酶酶(如蛋蛋白酶K)消化化结合于于核酸的的蛋白质质，从而而将靶核核酸从细细胞内释释放出来来。核酸的分分离纯化化核酸的分分离纯化化就是要要将蛋白白、脂类类等干扰扰核酸扩扩增的物物质去除除。经典方法法硅吸附法法对于商品品核酸提提取试剂剂盒，临临床实验验室在使使用前，，必须对对其核酸酸提取纯纯度和效效率进行行评价。。临床标本本及核酸酸提取中中可能存存在的抑抑制和干干扰物质质临床标本本中：血清或血血浆中的的血红素素及其代代谢产物物、痰中中酸性多多糖和糖糖蛋白成成份、降解靶核核酸的核核酸酶等。核酸提取取中：许多试剂剂如乙二二胺四乙乙酸(EDTA)、去去垢剂如如十二烷烷基硫酸酸盐(SDS)和chaotrope试剂剂如异硫硫氰酸胍胍和盐酸酸胍等、、酚、氯氯仿、乙乙醇等有有机溶剂剂。对临床标标本中可可能存在在的抑抑制/干干扰物的的质控措措施质控措施施：采用内质质控（internalcontrol,IC）（（通常称称为内标标）的方方法内标有两两种,即竞争性性的和非非竞争性性的内标标。内标设置置的必要要性？统计学质质量控制制理想的室室内质控控样本的的条件测定中质质控样本本的设置置、数量量及排列列顺序统计学质质控的特特点统计质控控方法理想的室室内质控控样本的的条件基质与待待测样本本一致；；所含待测测物浓度度接近试试验的决决定性水水平；稳定；靶值或预预期结果果已定；；无已知的的生物传传染危险险性；单批可大大量获得得；价廉测定中质质控样本本的设置置、数量量及排列列顺序每次检测测究竟使使用几个个质控样样本并排排在临床床标本中中的哪个个位置最最为适宜宜？从理理论上说说，为最最大可能能地检出出实验的的随机和和系统误误差，应应每隔几几份临床床标本插插入1份质控样样本，但但考虑国国内目前前的实际际情况及及成本效效益，一一般来说说，如果果临床基基因扩增增检验的的标本量量不是特特别大，，定性测测定有一一份接近近cut-off的弱阳性性和一份份阴性质质控样本本应可以以满足要要求。而而定量测测定则要要根据试试验的测测定范围围，采用用高、中中、低三三种浓度度的质控控样本。。至于在在测定中中的排列列顺序，，可排于于标准品品或校准准品之后后，临床床样本之之前。临床基因因扩增检检验室内内质控的的独特性性即监测污污染发生生的阴性性质控的的设置。。应该包括括1份阴性原血血清样本本、1份在标本本核酸提提取过程程中带入入的一个空管管和仅含扩增增反应混混合液的的管。阴性原血血清质控控样本的的功能监测实验验室的以以前扩增增产物的的污染；；由实验操操作所致致的标本本间的交交叉污染染；扩增反应应试剂的的污染。。在标本核核酸提取取过程中中带入的的一个空空管的功能基本功能能与阴性性原血清清质控样样本相同同，但不不同的是是，其基基质为水水，不含含阴性原原血清质质控样本本中可能能有的扩扩增抑制制物，因因而对污污染的反反映更为为灵敏；不能取代代原血清清阴性样样本。仅含扩增增反应混混合液的的管的功能监测扩增增试剂是是否发生生污染，，具有较较强的污污染鉴别别性。如想鉴别别实验室室是否发发生污染染，可将将一个或或多个空空管打开开静置于于标本制制备区30～60分钟，然然后加入入扩增反反应混合合液同时时以水替替代核酸酸样本扩扩增，如如为阳性性，而上上述仅含含扩增反反应混合合液的管管为阴性性，则说说明实验验室以前前扩增产产物的存存在。统计学质质控的特特点检验误差差有两类类，一是是系统误误差，一一是随机机误差。。系统误差差通常表表现为质质控物测测定均值值的漂移移，是由由操作者者所使用用的仪器器设备、、试剂、、标准品品或校准准物出现现问题而而造成的的，这种种误差可可以通过过前述的的措施方方法加以以控制，，是可以以排除的的。随机误差差则表现现为测定定SD的增大，，主要是是由实验验操作人人员的操操作等随随机因素素所致，，其出现现难以完完全避免免和控制制。统计学质质控的功功能统计学质质控的功功能就是是发现误误差的产产生及分分析误差差产生的的原因，，采取措措施予以以避免。。开展统计计质量控控制前，，应将可可以控制制的误差差产生因因素尽可可能地加加以控制制，这不不但是做做好室内内质控的的前提，，也是保保证常规规检验工工作质量量的先决决条件。。统计质控控方法基线测定定质控规则则的表达达方式及及定义Levey-Jennings质控控图方法法Levey-Jennings质控控图结合合Westgard多多规则质质控方法法累积和(CUSUM)质质控方法法“即刻法”质控方法法基线测定定最佳条件件下的变变异（Optimalconditionsvariance,OCV）和和常规条条件下的的变异（（Routineconditionsvariance,RCV））；当RCV与与OCV接接近，或小小于2OCV时，，则RCV是可以接接受的。以以上为批间变异。批内变异的测定；室内质控物物的测定准确度度的评价。临床基因扩扩增检验IQC统计计

计算问问题可使用质控控样本扩增增后的拷贝数/ml或IU/ml来进行统统计计算，，也可用其其对数值进行。由于基因扩扩增结果的的原始数据据通常很大大，故使用用其对数值来进行质控控统计分析析可能要更更为方便一一些。质控规则的的表达方式式及定义质控规则的的表达方式式质控规则的的功能常用质控规规则的符号号及定义质控规则的的表达方式式通常质控规规则以符号号AL来表示，其其中A为质质控测定中中超出质量量控制限的的测定值的的个数，L为控制限限，通常用用均值或均均值±1～～3SD来来表示。当质控测定定值超出控控制限L时时，即可将将该批测定定判为失控控。常用的13S质控规则，，其中1为为原式中的的A，3s为原式中中的L，表表示均值±±3s，其其确切的含含义为：在在质控测定定值中，如如果有一个个测定值超超出均值±±3s范围围，即可将将该批测定定判为失控控。质控规则的的功能简单地说就就是用于判判断测定批批的失控还还是在控。当整个质控控过程中使使用同一个个质控物时时，可用来来判断单个个或多个测测定批内该该质控物的的测定值是是否失控；；当整个质控控过程中使使用两个或或两个以上上的不同的的质控物时时，可用来来判断同一一或多个测测定批内的的两个或两两个以上的的质控物的的测定值是是否失控。。常用质控规规则的符号号及定义符号定定义义12S一个质控测测定值超出出±2s控控制限。13S一个质控测测定值超出出±3s控控制限。22S两个连续的的质控测定定值同时超超出+2s或－2s控制限。。R4S同一批测定定中，两个个不同浓度度质控物的的测定值之之间的差值超出4s控制限限。31S三个连续的的质控测定定值同时超超出+1s或－1s控制限。。41S四个连续的的质控测定定值同时超超出+1s或－1s控制限。。7X七个连续的的质控测定定值同时处处于均值（（）的同一一侧。7T七个连续的的质控测定定值呈现一一个向上或或向下的趋趋势变化。。8X八个连续的的质控测定定值同时处处于均值（（）的同一一侧。9X九个连续的的质控测定定值同时处处于均值（（）的同一一侧。10X十个连续的的质控测定定值同时处处于均值（（）的同一一侧。Levey-Jennings质控图图方法也称Shewhart质控图图，是由美美国的Shewhart于1924年年首先提出出，并用于于工业产品品的质量控控制。后来来（二十世世纪五十年年代初），，Levey-Jennings将其其引入临床床检验的质质量控制。经Henry和Segalove的改良，即即为目前常常用的Levey-Jennings质控图图。质控图质控图Levey-Jennings质控图基基本的统计计学含义稳定条件下下，在20个IQC结果中不不应有多于于1个结果果超过2SD（95.5%可信限）限度；在1000个个测定结果果中超过3SD（99.7%可信限）的结果不多多于3个。。如以±3s为失控限限，假失控控的概率为为0.3%。质控图的记记录的其它它方面IQC数据据是用来控控制实际过过程的，因因此其表达达应清楚和和直接，在在质控图上上记录结果果时，应同同时记录测测定的详细细情况，如如日期、试试剂、质控控物批号和和含量及测测定者姓名名等。Levey-Jennings质控图图方法的特特点优点是简单单明了；缺点：以±2s为为失控限，，假失控的的概率太高高，通常不不能接受；；以±3s为为失控限，，假失控的的概率低，，但误差检检出能力不不强。Levey-Jennings质控图图结合Westgard多规规则质控方方法Westgard多多规则质控控方法即是是将前述的的多个质控控规则同时时应用进行行质控判断断的方法。。最初常用用的有六个个质控规则则，即12S、13S、22S、R4S、41S和10X，其中12S规则作为告告警规则，，当出现质质控测定值值违反12S规则时，则则起动其它它规则进行行判断。只只有当使用用所有质控控规则判断断确定某测测定批在控控时才说明明该测定批批在控，只只要上述质质控规则之之一判断测测定批失控控则即认为为该测定批批失控。通通常上述规规则中，13S和R4S规则反映映的是随随机误差差，而22S、41S和10X反映的是是系统误误差，系系统误差差超出一一定的程程度，也也可从13S和R4S规则反映映出来。。Westgard多规规则质控控方法的的特点其是在Levey-Jennings质控控图方法法的基础础上产生生的，自自然也就就具有Levey-Jennings质控控图方法法的优点点，可通通过相似似的质控控图来进进行分析析；假失控和和假告警警概率低低；误差检出出能力增增强。累积和(CUSUM)质质控方法法累积和(CUSUM)质质控方法法于1977年年由Westgard等提出出,对系系统误差差有较好好的测出出能力。。常用的累累积和(CUSUM)质质控规则则质控规则则起动累积积和计算算的阈值值（k）质控限（（h）±1.0s±±2.7s±1.0s±±3.0s±0.5s±±5.1s累积和(CUSUM)质质控具体体步骤与上述其其它质控控方法一一样,首先得到到测定均均值和标准差差(s);确定起动累积积和计算算的阈值值（k）和质控控限（h）;确定质控控规则;绘制质控控图;累积和(CUSUM)计算;如有失控控，则采采取措施施予以纠纠正，再开始上上述累积积和计算算。累积和(CUSUM)质质控图“即刻法”质控方法法“即刻法”质控方法法的实质质是一种种统计学学方法,即Crubs异常值取取舍法；只要有3个以上的的数据即即可决定定是否有有异常值值的存在在。“即刻法”质控方法法具体步步骤将连续的的质控测测定值按按从小到到大排列列，即x1、x2、x3、x4、x5、x6、……xn（x1为最小值值，xn为最大值值）；计算均值值()和标标准差(s);按下述公公式计算算SI上限和SI下限值；SI上限=（x最大值－均值值）/sSI下限=（均值－x最大值）/s将SI上限和SI下限值与SI值表中中的数值值比较。。质控结果果的判断断SI上限限和SI下限限值均均<表表7中中n2s对应应的的值值时时，，说说明明测测定定质质控控测测定定值值的的变变化化在在2s之之内内，，是是可可以以接接受受的的。。如SI上限限和SI下限限值中中之之一一处处于于n2s和n3s对应应的的值值之之间间时时，，说说明明该该质质控控测测定定值值的的变变化化在在2s～～3s之之间间，，处处于于““告告警警””状状态态。。当SI上限限和SI下限限值之之一一>n3s对应应的的值值时时，，说说明明该该质质控控测测定定值值的的变变化化已已超超出出3s，，属属““失失控控””。。室内内质质控控数数据据的的评评价价IQC为一一集集体体活活动动，，除除实实际际测测定定者者外外，，还还应应有有另另外外一一人人对对测测定定数数据据进进行行质质检检。。不能能将将IQC作作为为一一个个监监察察方方法法，，当当发发现现一一次次测测定定未未达达到到质质量量标标准准时时，，应应以以建建设设性性的的而而非非批批评评的的方方式式去去探探查查失失控控的的原原因因。。除了了将将IQC数数据据作作为为日日常常质质控控外外，，还还应应定定期期评评价价累累积积数数据据以以监监测测在在测测定定操操作作中中的的长长期期变变化化趋趋势势。。评价价应应定定期期进进行行。。弱阳阳性性质质控控样样本本常常见见的的失失控控原原因因核酸酸提提取取中中的的随随机机误误差差。。如如核核酸酸提提取取中中的的丢丢失失、、有有机机溶溶剂剂的的去去除除不不彻彻底底、、标标本本中中扩扩增增抑抑制制物物的的残残留留等等。。仪器器的的问问题题。。如如扩扩增增仪仪孔孔间间温温度度的的不不均均一一性性、、孔孔内内温温度度与与所所示示温温度度的的不不一一致致性性等等。。试剂剂的的问问题题。。如如Taq酶酶和和/或或逆逆转转录录酶酶的的失失活活、、探探针针的的纯纯度度及及标标记记效效率率和和核核酸酸提提取取试试剂剂的的效效率率等等。。阴性性质质控控样样本本的的失失控控原原因因主要要为为扩扩增增产产物物的的“污染染”和/或或临临床床标标本本的的核核酸酸提提取取过过程程中中发发生生的的标标本本间间的的交交叉叉“污染染”.室内内质质控控的的局局限限性性IQC可确保保每次次测定定与确确定的的质量量标准准一致致，但但不能能保证证在单单个的的测定定样本本中不不出现现误差差。比比如样样本鉴鉴别错错误、、样本本吸取取错误误、结结果记记录错错误等等。此此类误误差的的发生生率在在不同同的实实验室室有所所不同同，一一般要要求小小于0.1%，，且应应均匀匀地分分布于于测定定前、、测定定中和和测定定后的的不同同阶段段。影响临临床基基因扩扩增检检验结结果的的最最关键键因素素产物““污染染”（（Carry-over)测定人人员的的操作作：标本混混淆；试剂避免基基因扩扩增检检验假假阳性性结果果的措措施严格的的实验验室分分区；；使用带带“滤滤心””的吸吸头；；设立““阴性性”质质控（（与标标本同同时处处理））；使用防防“污污染””（含含UNG））的PCR试剂剂；临床““假阳阳性””问题题：病病原微微生物物如结结核杆杆菌经经药物物治疗疗后已已死亡亡，但但PCR仍仍可为为阳性性，故故治疗疗结束束后至至少两两周内内不宜宜做PCR检测测。避免基基因扩扩增检检验假假阴性性结果果的措措施避免由由于来来自于于标本本的血血红蛋蛋白、、肝素素、某某些激激素或或来自自标本本处理理中的的去垢垢剂、、有机机溶剂剂的抑抑制作作用的的措施施：纯纯化核核酸；；标本本重复复双份份测定定；稀稀释标标本。。使用““内质质控””（InternalControl,IC)以以避免免由于于试剂剂、扩扩增仪仪或标标本处处理不不当所所致的的假阴阴性；；须注注意的的是，，如果果靶浓浓度很很高，，可致致在靶靶核酸酸和IC之之间产产生竞竞争，，而使使IC受抑抑制，，此时时IC可为为阴性性。室间质质量评评价（（EQA））IQC确保实实验室室室内内测定定质量量的一一致性性，而而EQA则则提供供将实实验室室测定定情况况与一一室间间和客客观标标准进进行回回顾性性比较较的数数据。。EQA在质质量保保证中中对IQC有一一补充充作用用。EQA的的程序序设计计确定质质评方方案,定期期发放放质评评样本；要求参参加质质评实实验室室报告告结果果的单单位要要一致致，以以便于于统计计；报告要要清楚楚、简简洁；；要求参参评实实验室室在测测定EQA样本本时，，要以