科研项目标书写作讲座幻灯片副本

国家自然科学基金（NSFC）申请讲座肿瘤免疫治疗新技术研究中心一.NSFC资助的项目二.面上项目三.申请注意事项四.申请书的写作要求五.申请书的撰写六.申请书各部分之间的关系七.基金申报相关规定及要求报告提纲第一部分NSFC资助的项目研究项目板块人才资助体系面上项目重点项目重大项目国际合作与交流项目国家杰出青年科学基金项目海外及港澳学者合作研究基金项目创新研究群体项目优秀青年科学基金项目青年科学基金

自由申请项目青年科学基金项目

地区科学基金

重大研究计划项目国家自然科学基金NSFC资助的项目面上项目的类型自由申请项目(A类)：允许申请人的学术思想自由，选题自由；青年科学基金(C类)：申请人的年龄需在35周岁以下（指申请当年1月1日未满36周岁）；地区基金(D类)：面向老、边、少地区的研究单位。在同等水平的情况下，老、边、少地区的项目有可能优先送审。第二部分面上项目面上项目面上项目也叫一般项目，照顾的面比较大是国家自然科学基金研究项目系列中的主要部分支持从事基础研究的科学技术人员在国家自然科学基金资助范围内自主选题开展创新性的科学研究，促进各学科均衡、协调和可持续发展。面上项目是科学基金最基本的资助项目类别，其经费额约占科学基金总额的60%。面上项目包括自由申请项目、青年科学基金项目和地区科学基金项目。2016年面上项目资助情况面上项目申请人的条件面上项目的要求生命命科科学学部部生命命科科学学一一处处：：微微生生物物学学、、植植物物学学生命命科科学学二二处处：：生生态态学学、、林林学学生命命科科学学三三处处：：生生物物物物理理和和生生物物化化学学与与分分子子生生物物学学、、免免疫疫学学、、生生物物力力学学与与组组织织工工程程学学生命命科科学学四四处处：：神神经经学学、、生生理理学学与与整整合合生生物物学学、、心心理理学学生命命科科学学五五处处：：遗遗传传学学与与生生物物信信息息学学、、细细胞胞生生物物学学、、发发育育生生物物学学与与生生殖殖生生物物学学生命命科科学学六六处处：：农农学学基基础础与与作作物物学学、、食食品品科科学学生命命科科学学七七处处：：植植物物保保护护学学、、园园艺艺学学与与植植物物营营养养学学生命命科科学学八八处处：：动动物物学学、、畜畜牧牧学学与与草草地地科科学学、、兽兽医医学学、、水水产产科科学学生命命科科学学一一处处：：微微生生物物学学科科生命命科科学学三三处处：：生生物物物物理理、、生生物物化化学学与与分分子子生生物物学学生命命科科学学三三处处：：免免疫疫学学生命命科科学学三三处处：：生生物物力力学学与与组组织织工工程程学学生命命科科学学四四处处：：神神经经学学生命命科科学学四四处处：：生生理理学学与与整整合合生生物物学学生命命科科学学四四处处：：心心理理学学生命命科科学学五五处处：：遗遗传传学学与与生生物物信信息息学学生命命科科学学五五处处：：细细胞胞生生物物学学生命科科学五五处：：发育育生物物学与与生殖殖生物物学生命科学八八处：动物物学生命科学八八处：兽医医学医学科学学部（基础和和临床研研究）医学科学一处处：呼吸系统统、循环系统统、血液系统统医学科学二处处：消化系统统、泌尿系统统、内分泌系系统、眼科学学、耳鼻咽喉喉头颈科学、、口腔颅额面面科学医学科学三处处：神经系统统疾病、精神神疾病、老年年医学医学科学四处处：生殖系统统、围生医学学和新生儿、、医学免疫学学医学科学五处处：影像医学学与生物医学学工程、特种种医学、法医医学医学科学六处处：运动系统统、急危重症症-创伤-烧伤-整形、康复医医学、医学病病原生物与感感染、检验医医学医学科学七处处：肿瘤学医学科学八处处：皮肤及其其附属器、放放射医学、地地方病学、职职业病学、预预防医学医学科学九处处：药物学、、药理学医学科学十处处：中医学、、中药学、中中西医结合领领域第三部分申请注意事项项（1）申请请者不不具备备申请请资格格或违违反了了自然然科学学基金金委的的有关关规定定（2）申请请手续续不完完备或或申请请书不不符合合要求求（3）申请请项目目主要要研究究内容容不属属于申申报学学科的的资助助范围围（4）申请请书纸纸质与与电子子版内内容不不一致致（5）其它它面上项项目(自由由、青青年、、地区区）形式审审查不合格格原因因A、纸质质申请请书上上没有有项目目组成成员签签名B、纸质质申请请书缺缺页C、单位位盖章章为非非注册册章D、合作作单位位未盖盖章或或盖的的不是是注册册（法法人））章E、中级级无博博士学学位人人员无无专家家推荐荐（初级级无博博士学学位不不得做做负责责人申申请））F、在在职职研研究究生生申申报报项项目目需需导导师师同同意意函函G、项项目目被被查查重重（（已已获获得得青青年年基基金金的的再再申申请请青青年年））H、申申请请金金额额过过高高（（平平均均强强度度四四倍倍））较容容易易犯犯的的错错误误有有：：生命命科科学学五五处处面面上上项项目目初初筛筛不不合合格格原原因因初筛原因具体原因项数比例%超项（58项，占37.9%）参加人超项5032.7申请人超项85.2签字或盖章（52项，占34.0%）申请人未签字42.6参加人未签名10.7合作单位未盖公章2415.7合作单位非法人公章1912.4申请人单位公章不符42.6导师同意函（32项，占20.9%）在读博士/硕士无导师同意函3221.0其它（八项，占7.2%）非本学科项目53.3申请人为初级职称21.3超龄申请青年基金10.7申请人为中级职称，但缺专家推荐信10.7申请人简历不祥10.7申请书电子版与纸质版不符10.7第四四部部分分申请请书书写写作作要要求求一、、申申请请书书中中的的注注意意事事项项基金金项项目目的的评评审审只只是是评评价价一一份份申申请请书书的的质质量量，，而而不不完完全全是是评评价价申申请请项项目目的的实实际际水水平平和和学学术术水水平平。。二、项项目的的写作作要求求1、表达达能力力：告告诉评评议人人您是是如何何思考考问题题的2、归纳纳总结结能力力：从从新的的角度度和高高度对对所研研究的的问题题提出出新的的观点点3、区分分问题题主次次的能能力4、对研研究中中所需需技术术的掌掌握能能力5、对申申请书书研究究内容容准确确而又又令人人信服服的安安排能能力所有这这些方方面便便反映映出申申请人人的科科研能能力三、四四个重重要方方面的的信息息你为什什么要要做？？即研研究意意义和和立论论依据据你想做做什么么？即即研究究内容容、研研究目目标你如何去做做？即研究究方案你以前做过过什么（为为什么你能能做）？即即研究基础础四、立项依依据的要求求立项目的要要明确，申申请理由要要充分，立立项依据既既不要太科科普，又要要把关键问问题交待清清楚，能引引起评审人人的兴趣，，愿意继续续读完您的的申请。初审专家关关注问题关键推断不不成立：例例如：本项目立项项依据不充充分，且对对信号转导导通路的概概念尚不十十分清楚，，仅分析未未磷酸化的的信号通路路蛋白不能能判断通路路运行状态态关键推断缺缺乏依据：：例如：立论依据中中对××诱导××的效应与其其特异的××现象的关系系未阐述清清楚。××在××中的作用意意义的论据据也欠充分分四、立项依依据写作（（1）（l）既要介绍绍国外动态态，也要介介绍国内研研究情况，，避免评议议人会认为为申请人对对国内研究究情况不了了解，就以以“不了解解国内情况况”为由，，不同意资资助该项目目的申请。。（2）国内情况况应包括申申请者自己己的意见、、工作，以以使评议人人比较顺畅畅地了解申申请人的思思路。（3）必须阐明明申请人要要从事本项项研究的理理由究竟是您在在前期工作作中发现什什么问题，，还是别人人的工作中中存在什么么问题，或或者您对哪哪个科学问问题有什么么特殊想法法等等（4）坚持“有有所为，有有所不为””的基本国国策，填补补空白不是是立项依据据科学基金是是要使我国的的基础研究究在世界上上占有一席席之地，而不是跟跟踪或填补补空白。（5）主要参考考文献，包包括国内、、外的关键键性研究工工作都要有有所显示，，注意时间间性和篇数数。四、立项依依据写作（（2）五、研究方方案研究目标、、内容和拟拟解决的关关键问题研究目标不是简单地地去做一件件具体的事事，而是要要研究和解解决其中的的科学问题题和学术性性问题。泛泛地讲探探索什么规规律，而不不能很好地地论证要了了解某个规规律意义，，那就难以以得到支持持。要从学术角角度提出可可行性分析析突出申请人人学术思路路方面的好好想法，阐阐明你的设设计方案、、研究方法法、技术路路线能否实实现预期的的研究目标标。研究队伍、、研究条件件和学术思思想方面的的综合优势势研究内容过过大或过小小：研究内容充充实，设计计细致，但但主攻重点点不突出该研究计划划过于庞大大研究内容不不属于资助助范围：申请侧重于于技术和应应用研究，，科学意义义不明确。。研究内容安安全性有疑疑问：在上海这样样人口高度度密集的地地区进行饲饲养繁殖（（该类昆虫虫），本身身就有很大大风险。研究究内内容容但本本课课题题将将研研究究内内容容、、研研究究目目标标及及拟拟解解决决的的关关键键问问题题混混淆淆项目目执执行行期期内内无无法法完完成成任任务务：：但是是，，ⅹⅹⅹ质量量的的正正向向演演变变和和ⅹⅹⅹ响应应是是一一个个十十分分缓缓慢慢的的过过程程研究究内内容容无无法法实实现现研研究究目目标标：：通过过标标书书的的阅阅读读，，难难以以判判断断通通过过本本研研究究能能达达到到"作用机制的研研究"；题目与研究究目标、拟解解决关键问题题不完全一致致研究方案部分分表述不清：：关注实验重现现性：但实验设计欠欠合理，很难难实现预期目目标，试验的的重现性难以以保证取材可能性太太小：从自愿患者取取10ml骨髓，很困难难对所用方法了了解不够：也说明申请人人没有芯片研研究的经历，，没有理解和和掌握该技术术。本项目科科学性不强初审专家关注注的问题－－－研究方法与与技术路线六、本项目的的创新之处(1)创新之处：指申请人要要开展的研究究项目的特色色和新颖的学学术思想，而而不是泛指的的一个新领域域的特色；研究条件的特特色并不能完完全表明申请请人的研究特特色和学术思思想新颖性。。学术思想可以以有一点新颖颖性，或者可可以把其它领领域的好思想想借鉴到你的的研究课题里里。创新性不明显显约占异议比比例的50%(2)不要泛泛地谈谈学科交叉基金委鼓励学学科交叉，但但不等于说，，申请项目属属多学科交叉叉，就算有特特色、有创新新，就该给予予资助。“学科交叉必必须对相关学学科的发展都都有促进作用用”如果你的申请请项目属于学学科交叉项目目，必须阐明明交叉点在哪哪儿？(3)填补国内外空空白不是创新新和特色目前，基础研研究可以有所所为的，首先先应该关注的的是国家国民民经济急需领领域的基础研研究和国内已已经有一定研研究基础，有有可能在世界界上占领一席席之地的研究究领域的基础础研究两方面面。专利正确理解专利利的地位专利是不是成成果？当然，，你的基础研研究成果推广广应用了，申申请若干项专专利，基金委委还是承认你你的，但不能能把专利作为为基金的主要要成果。专利只只是一一种知知识产产权保保护方方法，，难以以判断断基金金项目目的研研究水水平，，可以以作为为结题题时的的辅助助成果果，申申请时时不必必过分分强调调。创新性性部分分-初审专专家关关注的的问题题：无明显显的创创新性性，评评议人人认为为"填补国国内空空白"不能作作为创创新。。本项目目的创创新性性不强强，仅仅为动动物模模型的的一些些指标标的观观察，，评议议人认认为难难以达达到研研究目目的。。国内外外对于于××××方面已已经有有比较较多的的报道道第二个个问题题已被被××××研究组组解答答（评审审人均均为专专家））该研究究的创创新性性仅在在于在在此材材料中中尚无无此方方面的的研究究。七、研研究基基础（1）与本本项目目有关关的工工作积积累和和成绩绩应该是是申请请人以以及合合作者者的，，而不不是你你所在在的单单位、、研究究集体体或者者导师师的工工作和和成绩绩。对于刚毕毕业的研研究生，，作为基基金委和和评审专专家不会会强求他他们在新新的研究究领域有有很多积积累，但但必须详详尽地介介绍他们们自己过过去的工工作，让让评审专专家能够够判断他他们的研研究能力力。研究基础础（3）申请人人和主要要成员的的研究背背景情况况都要介介绍不少申请请中只介介绍申请请者的情情况，不不符合申申请书的的要求。。申请人和和主要成成员的背背景情况况介绍要要具体，，必须符符合申请请书的要要求，有有关论著著应注明明作者位位置、论论文题目目、发表表的刊物物以及发发表时间间，获得得学术奖奖励应注注明获奖奖人的名名次等等等。有一半人人没有按按项目指指南要求求填写。。原因可可能有两两种，不不是没有有读过项项目指南南，就是是没有相相应的业业绩来填填写。从推论做做推论：：第一步工工作就可可能达不不到预期期目标，，使后续续的实验验无法进进行。建建议不予予资助。。在关键步步骤或方方法中无无工作经经验：特别是申申请者及及课题组组成员均均没有细细胞诱导导分化研研究的工工作基础础未准备好好解决关关键问题题的方法法：对整个项项目的限限速步骤骤，并没没有令人人信服的的研究设设计和检检测指标标，使得得整个项项目看起起来可行行性不够够初审专家家关注的的问题－－－研究究基础八、申请请者承担担国家自自然科学学基金资资助项目目情况其中进展展或完成成情况一一栏，应应填写详详细一些些不要简单单地填写写“已完完成”、、“顺利利进行””。最好好能注明明获得什什么奖励励，发表表多少论论文，引引用情况况如何，，培养了了几名研研究生等等等。让让评议人人能一目目了然。。前一结题题项目完完成情况况；三篇主要要论文首首页必须须反映是是基金资资助项目目，否则则，应附附上能反反映基金金资助的的那一页页，如：：致谢或或英文刊刊物中的的Acknowledgment。用途项目类型型比例面上<=15%重大、重重点<=10%国际合作作与交流费外国专家家来访和和项目组成成员出访访杰出青年年<=20%面上<=15%（不封顶顶）重大、重重点<=10%劳务费参加项目目的研究究生、博士士后杰出青年年<=20%面上重大、重重点管理费依托单位位为组织织和支持项目而而支出的的费用杰出青年年5%九、经费费预算间接费用用自2015年起，各各类项目目申请经经费分为为直接费费用和间间接费用用两部分分。直接费用包括设备费费、材料费费、测试化化验加工费费、燃料动动力费、差差旅费、会会议费、国国际合作与与交流费、、出版/文献/信息传播/知识产权事事务费、劳劳务费、专专家咨询费费、其他支支出。间接费用是指依托单单位在组织织实施项目目过程中发发生的无法法在直接费费用中列支支的相关费费用，主要要包括依托托单位为项项目研究提提供的现有有仪器设备备及房屋，，水、电、、气、暖消消耗，有关关管理费用用的补助支支出，以及及绩效（按照直接费费用扣除设设备购置费费后的5%核定）支出等。间接费用计计算：项目直接费费用扣除设设备购置费费后，金额额在500万元及以下下部分为20%，金额为500万元以上至至1000万元的部分分为13%，金额超过过1000万元的部分分为10%。十、结语申请书是写写给别人看看的，不仅仅要你自己己认为清楚楚、满意，，而且要让让小同行、、大同行、、基金管理理人员和有有关领导都都能认可。。“外行看了了有兴趣，，内行看了了有水平””。申请书是否否满足以下下要求1、立论依据据是否充分分，提出的的问题是否否属该研究究领域的重重要问题；；2、研究目的的是否明确确，研究内内容是否合合适，二者者间是否一一致；3、有关的文文献资料是是否已经全全面掌握，，是否真正正明白其中中的问题，，是否熟悉悉该领域的的研究进展展，您提出出的问题是是否属于还还未解决的的问题，是是否能为本本研究领域域增加新的的内容和新新的结论；；4、前期的工工作是否能能说明你熟熟悉项目中中所采用的的研究方法法，是否能能使评议人人相信你胜胜任此项目目的工作；；5、研究方案案是否可行行，是否创创新，是否否清晰，是是否能说服服评议人，，是否组织织合理；6、研究方法法是否合适适，是否创创新，是否否可能遇到到困难，有有何补救措措施，方法法有何优点点和不足；；7、经费预算算是否合理理。A、标书书写写不规范标书撰写不不太认真，，存在关键键字错误，，如摘要中中的“斑快”（斑块）,水稻（小麦）文中有多处处错字，说说明申请人人在书写和和校对时缺缺乏严肃认认真的态度度此外，项目目申请书的的科技写作作不够规范范，如立项项依据部分分文中的文文献引用没没有标注、、文中有的的文献引用用在参考文文献目录中中没有等问问题其他问题（1）B、论文造假假申请者自我我介绍中的的论文11(p26)应为会议摘摘要，并有有页码错误误。p2论文2,3应为会议摘摘要而不是是论文C、项目组成成员工作时时间问题（（不初筛））主要成员已已有2－3项国家自然然科学重点点、杰出、、面上或973、863项目在研D、同室操戈戈本申报材料料与其所在在科室另一一申报书内内容雷同，，工作人员员重复，本本课题组与与之相比,没有良好的的研究基础础其他问题（（2）其他问题（（3）-报送学科报送学科要要准确，但但别把学科科代码当指指南代码1表示投送学学科，代码码2表示相关学学科，准确填写相相关学科代代码，将会会便于学科科寻找合适适的同行评评议专家。。如果投送学学科完全错错了，就相相当于考大大学时报错错了志愿，，白白申请请了。尽管NSFC的指南还不不十分理想想，但它终终究反映了了学科的资资助动向，，有一定的的导向作用用。申请内容涉涉及多个学学科，就要要比较各相相关学科的的项目指南南，看一看看研究重点点与哪个学学科更接近近？第五部分申请书的撰撰写一、摘要要（限400字）包括：研究究方法、内内容、目标标、科学意意义。如：采用……方法，进行行……研究，阐明……机制或揭示示……规律，为……奠定基础／／提供……思路。作用：画龙点睛效果：引发评议专专家的兴趣趣，使其产产生探个究究竟的好奇奇心——“他到底是怎怎么做的？？”采用改良的的消减杂交交技术建立老年性性白内障晶晶状体上皮皮细胞差异异表达基因因文库并制制备基因芯芯片，利用用此芯片筛筛选出白内内障相关基基因。通过基因转转染在体和和培养的晶晶状体上皮皮细胞，观察细胞的形形态、增殖和和凋亡、骨架架蛋白及晶状状体蛋白的变变化，研究基基因的功能。。从晶状体上皮皮细胞的角度度阐明老年性性白内障发生生的分子生物物学机制，为防治白内障障提供新思路路和理论依据据。摘要举例对基础研究，，着重结合国际际科学发展趋趋势，论述科学意义对应用基础研研究，着重结合学科科前沿，围绕国民经济和和社会发展中中的重要科技技问题论述应用前景二、立论依据据在立论依据的的阐述中，对对研究领域、、研究方向、、具具体科学问问题的理解研究领域：白内障的研究究，包括发病病机制、预防防、诊断、治治疗措施等研研究研究方向：白内障发病机机制的研究，，包括环境因因素、致病靶靶点、细细胞水平、分分子水平研究究等科学问题：白内障发病过过程中的相关关基因研究，，包括致病基基因筛选选、功能研究究、调控机制制、信号转导导等在研究领域层层面从研究方向展展开围绕某一具体体科学问题（本项目研究究目标）进行归纳分析析提出研究设想从研究领域切切入研究意义国内外现状分分析1、项目的研究究意义存在问题：对科学意义的的阐述不足或或夸大撰写方法：从领域入手，，提出主要问问题，引出热热点研究方向向。围绕热点研究究方向进行简简要分析，找找出目前尚未未解决的具体体科学问题，，以此为切入入点提出假设设，阐述如果果解决了该问问题（研究目目标），对该该领域甚至相相关领域的科科学贡献（理理论意义或应应用前景）。。老年性白内障障是与年龄相关关的疾病，随随着年龄的增增加，其发病比比率也不断升升高。特别是是人类趋向老老龄化，白内障的患病病人数还将持持续增加。目目前，它已是人类第一位的致盲盲疾病。迄今为止,治疗白内障唯唯一有效的方法是通过手手术摘除混浊浊的晶状体并并植入人工晶晶状体。虽然手术后患患者可以恢复复良好的视力力，但是不可可避免的术后并发症以以及手术设备备、材料耗资资巨大，治疗疗白内障所花费的资金金已成为世界界各国包括富富裕的发达国国家严重的医疗负担。。最近的调查查表明，如果果把老年性白白内障的发病时间延缓缓10年，白内障手手术的数量就就会减少45%[1]。所以，一些学学者认为通过过预防白内障发生或延缓其其发展的途径征服白白内障已成为一项全全球性的社会会和社会经济济问题[2]。但是目前我们们对老年性白白内障发病机理的认识还不十分清楚楚。多年以来许多多学者的研究究结果证实晶晶状体上皮细细胞在老年性性白内障发生生中起重要的的作用，但对对其中进一步步的基因调控控知之甚少。。如果从参与与老年性白内内障晶状体上皮细细胞变化的相相关基因入手，研究基基因的生物学学功能，有可可能抓住引起起白内障发生生、发展的主主要环节。据据此，本研究究拟利用改良良的消减杂交交技术和基因因芯片技术准准确、全面、、快速的特点点，以晶状体体上皮细胞为为研究对象，，一次性筛选选出老年性白白内障全部有有差异表达的的基因，从中中再筛选出与与白内障相关关基因，并着着重对其功能能进行研究，，从基因水平平阐明白内障障的发病机制制，为防治白白内障提供新新思路和理论论依据。2、国内外现状状分析（与综综述的区别））存在问题：A、低水平重复复：不了解最新进进展，对国内内外现状缺乏真正了了解，提出的的问题别人已已解决。B、文献献复习习不全全：检索文文献方方法不不当、、选择择关键键词不妥，，甚至至人为为缩小小检索索范围围。C、总结结表达达不够够：对国内内外现现状缺缺乏归归纳分分析，，只是简简单罗罗列，，缺乏乏逻辑辑性和和针对对性。。D、对方法法原理理理解解不够够：对研究究方法法不熟熟悉，，简单移植植或夸夸大其其作用用，缺缺乏实实际应应用的的可行行性。。撰写方方法：：要紧紧围围绕本次申申请项项目的的主题题。A、从领领域切切入，，简要论论述国内外外研究究成果，并引引出当前前的热热点研研究方方向。。B、从研研究方方向展展开，，较详细细地分分析国内外外的研研究进展，阐明明在该该方向向上存存在的的问题题。C、围绕绕存在在的问问题，，结合合国内内外以以往的的研究究结果、、当前前的的现状状及今今后后的的发展展趋趋势势，详细细论论述述和和分分析这些些问问题题产产生生的的原原因因，，提出出该该方方面面的的空空白白点点、、未知数、、以及研研究的难难点、焦焦点，从而为自自己申请项目目确立研研究目标标奠定充充分的立立论基础础。D、对拟采采用的技技术方法法进行介介绍和分分析。成熟的方方法重点介绍绍可以应应用于本本研究的的理论依依据和实实验依据据。新方法在在详细介介绍其原原理的基基础上，阐明可可以应用用于本研研究的理理论依据据和实验验依据。。需特别注注意的问问题：必须对所所运用的的技术方方法的原原理、流流程尤其其是在实实际运用用中可能能出现的的问题要要十分清清楚，绝不能是是一种简简单的移移植。E、提出本本项目的的研究设设想。防治白内内障必须须针对其其发病的的主要环环节。多多年以来来，国内内外学者者从不同同的角度度探讨白白内障的的发生机机理。就致病的的环境因因素讲，，氧化因子子、紫外外线辐射射、晶状状体周围围环境中中离子浓浓度改变变及一些些生长因因子、细细胞因子子的改变变均与老老年性白白内障的的发生有有关。就研究的的部位分分，晶状体中中皮质与与核的蛋蛋白质改改变及晶晶状体纤纤维的改改变与白白内障的的形成有有关，而而位于晶晶状体前前囊膜下下单层的的晶状体上上皮细胞胞在白内障障的形成成中的变变化更引引人关注注。因为晶状体上上皮细胞胞是晶状体体中唯一一有分裂裂活性、、数量相相对稳定定的细胞胞，它们们分裂、、分化出出晶状体体纤维细细胞、产产生晶体体蛋白，，终生不不停息，，形成了了晶状体体均一、、对称的的结构，，对维持持晶状体体的透明明起重要要作用。。不仅如如此，晶状体上上皮细胞胞还是晶状状体中受外来刺刺激影响响较早的部部位，已已有研究究证实老老年性白白内障的的晶状体体上皮细细胞还发发生退行性变变、细胞胞膜通透透性增加加、细胞胞内酶活活性改变变、细胞胞数量减减少、凋凋亡细胞胞增多等等改变，，与单纯老老化的晶晶状体之之间存在在差异[3-5]。体外实验也证证实多种因素(H2O2、UV-B、晶状体蛋白白的自身抗体体)诱发的白内障障模型中晶状体上皮的的损伤是晶状状体混浊的主主要环节[6-8]。因此，从晶晶状体上皮皮细胞的变变化入手探探讨白内障障的成因，，有可能抓抓住揭示白白内障发病病机理的主主要环节。。而晶状状体体上上皮皮细细胞胞变变化化的的基基因因调调控控机机制制是问问题题的的关关键键所所在在，，也也是是有有待待我我们们深深入入研研究究的的问问题题。。白内内障障的的形形成成与与晶状状体体的的老老化化密不不可可分分，，是是晶晶状状体体老老化化的的极极端端表表现现。。晶晶状状体体的的老老化化是是多多种种因因素素相相互互作作用用的的结结果果，，包括括基基因因的的和和非非基基因因的的随随机机变变化化的的不不断断积积累累，，也有有程程序序性性的的、、非非随随机机性性的的组组织织特特异异性性多种基因表达达的改变。目前，国内外外对白内障相相关基因的研研究主要以下下三方面：一是对体外培培养的晶状体体白内障模型型及上皮细胞胞的研究。UV-B辐射作用诱导导的白内障中中晶状体上皮皮细胞是主要要的靶细胞，，其Na-K-ATP酶的活性增加加，蛋白质的的合成和分泌泌增加；上皮皮细胞的凋亡亡增加，其中中有c-fos基因的表达增增加；还有组组蛋白H4、H3的低表达`和蛋白酶C、β-肌动蛋白、γ-肌动蛋白基因因的高表达[9-12]。Carper等[13]利用RT-PCR-DD(reversetranscription-polymerasechainreactiondifferentialdisplay)技术研究H2O2诱导的晶体上上皮细胞的基基因差异性表表达结果显示示NADH脱氢酶4亚基、细胞色色素b、谷氨酰胺转转移酶基因表表达减少以及及细胞因子的的核蛋白、替替代拼接因子子2（alternativesplicingfactor）、β-三羟基异丁酰酰辅酶A水解酶基因表表达的增加。。二是利用转基基因动物的研研究。波形纤维蛋白白基因（vimentin）、杂交的Ⅲ型中间纤维蛋蛋白基因的转转基因小鼠表表现出白内障障，而且有随随小鼠年龄增增加白内障加加重的趋势。。晶状体改变变的共同特点点是晶状体纤纤维细胞分化化受抑制[14,15]。Gong等[16]报告晶状体的的细胞膜蛋白白连接蛋白α3（α3Connexin）基因敲除小小鼠（knockoutmouse）在晶状体形形成的早期及及纤维细胞分分化早期不受受影响，其后后出现与晶状状体蛋白溶解解有关的核性性白内障。虽然体外实验验和白内障转转基因小鼠都都提示我们一一些基因的变变化与白内障障有关，但是是，这些变化化的基因是否否与老年性白白内障形成有有关，目前尚尚缺乏进一步步的报告。三是对人老年年性白内障晶晶体上皮的研研究。Lee[17]利用RT-PCR技术研研究显显示前前极性性白内内障与与核性性白内内障上上皮细细胞中中纤维维连接接蛋白白、I型胶原原纤维维、α-平滑肌肌蛋白白、TGF-ββ1、TGF-ββ2、TGF-ββⅡ型受体体、结结缔组组织生生长因因子的的基因因表达达有差差异。。Kantorow等[18]利用RT-PCR-DD研究老老年性性白内内障与与正常常晶状状体上上皮的的基因因差异异性表表达的的初步步结果果是老老年性性白内内障有有三个个高表表达基基因和和12个低表达达的基因因。但就DD-PCR技术来讲讲，在实实验中难难以解决决假阴性性、假阳阳性以及及克隆全全长cDNA的问题。。上述三方方面的研研究均取取得了不不同程度度的研究究结果，，但由于当当时技术术条件的的限制都都未能全全面阐明明与白内内障相关关的基因因及其功功能。寻找白内内障时晶晶状体上上皮细胞胞与正常常晶状体体上皮细细胞间差异表达的基基因有可能揭示白白内障的发病病机理。寻找差异表达达基因的经典典方法是消减减杂交技术（subtractivehybridization,SH），它是……，但是实验操操作复杂。经过改进后的的抑制性消减减杂交（suppressionsubtractivehybridization,SSH是Diatchenko等1996年建立的方法法）……简化了实验操操作，但仍然然问题很多。。我校生化教研研室建立了改良消消减杂交技术术[19，20]，其特点是：简便易行，能能够获得目的的细胞特异表表达的全长基基因，对低丰丰度基因也能能有效分离。。该方法的建立立者已利用这这一技术从脂脂多糖刺激前前后的人牙髓髓细胞的差异异表达的基因因中克隆到脂脂多糖刺激后后特异表达的的基因，其中中5个为新基因。。同理，利用用此方法也能能快速、有效效地获得白内内障晶状体上上皮细胞与正正常晶状体上上皮细胞间差差异表达的基基因，并克隆隆到全长cDNA，为进一步的的结构和功能能研究打下基基础。基因芯片技术术的出现，使使检测差异表表达基因和未未知DNA分子变得更快快捷、准确、、高效。基因芯片是在在1996年被提出并开开始研制的，，该技术是将将成千上万的的DNA探针集集中到到1厘米见见方的的基片片上，，利用用碱基基互补补原理理，DNA探针中中的已已知碱碱基序序列与与被测测定的的未知知DNA分子杂杂交后后由标标记分分子标标记杂杂交体体，经经自动动阅读读设备备分析析杂交交结果果，从从而对检测测基因因进行行定性性、定定量和和结构构分析析，确确定未未知DNA分子。。由于目目前尚尚没有有针对对白内内障研研究的的现成成基因因芯片片，根根据本本研究究的需需要，，我们们将筛筛选到到的差差异表表达的的所有有基因因建立立cDNA文库，，再利利用基基因芯芯片技技术制备成成基因因芯片片，以此此检测多多个样样本中中白内内障晶晶状体体上皮皮细胞胞与正正常晶晶状体体上皮皮细胞胞间差差异表表达的的基因因，从中进一步步筛选选出白白内障障特异异的基基因，它们们中可可能有有已知知基因因，也也可能能有未未知基基因。。通过过以上上两种种技术术的有有机结结合，，我们们能更更快捷捷、有有效、、准确确地得得到白白内障障相关关基因因。综上所所述，，分子子生物物学技技术的的发展展为研研究白白内障障发生生过程程中的的功能能基因因及特特异调调控基基因提提供了了有利利武器器。本项目目从晶晶状体体上皮皮细胞胞入手手，利利用改改良的的消减减杂交交技术术和基基因芯芯片技技术系系统研研究与与白内内障相相关的的基因因，并并采用用对体体外培培养细细胞和和在体体晶状状体上上皮细细胞的的基因因转染染，探探讨它它们在在晶状状体上上皮细细胞变变化和和白内内障形形成中中的作作用，，可望望阐明明白内内障晶晶状体体上皮皮细胞胞变化化的分分子生生物学学机制制，为为防治治白内内障提提供新新的思思路和和理论论依据据。3、参考考文献献A、文献献类别别要全全：以英英文文文献为为主，，同时时也要要引用用中中文文文献献---国内同同行中中知名名专家家的文文献。。B、引文文信息息要全全：文章章题目目、作作者姓姓名、、具体体出处处（（包包括期期刊名名、年年份、、卷期期、页页码等等）。。C、文文献献年年代代要要新新：主主要要是是近近五五年年的的文文献献，，最最好好能能有有2017年的的最最新新文文献献。。三、、研研究究方方案案1、研研究究目目标标撰写写要要求求：：有有限限目目标标，，与与研研究究内内容容相相呼呼应应如：：明明确确………关系系，，揭揭示示………规律律，，阐明明………原理理（（机机制制）），，建建立立………方法法等等举例例：筛筛选选出出与与老老年年性性白白内内障障相相关关的的基基因因，，明明确确部部分分基基因因在在白白内内障障形形成成中中的的作作用用，，从从晶晶状状体体上上皮皮变变化化的的角角度度阐阐明明白白内内障障的的发发生生机机理理，，为为防防治治白白内内障障提提供供线线索索。。2、研究究内容容：存在问问题：：内容过过多，，一个个研究究周期期难以以完成成内容分分散，，不能能集中中阐明明研究究目标标撰写要求求：内容要适适当—确保研究究周期内内完成为目标服服务—与目标相相辅相成成要重点阐阐述—注意与技技术路线线区别举例：（1）筛选白白内障相相关基因因：采用改良良的消减减杂交技技术，获获得人老老年性白白内障晶晶状体上上皮细胞胞和正常常晶状体体上皮细细胞差异异表达的的基因片片段，建建立cDNA文库。制制备差异异表达基基因的基基因芯片片，利用用基因芯芯片技术术从多个个标本的的老年性性白内障障晶状体体上皮细细胞中筛筛选出白白内障相相关基因因。（2）研究白白内障相相关基因因的结构构：……（3）研究白白内障相相关基因因在晶状状体上皮皮细胞变变化中的的作用：……观察指标标如下：：①存活细细胞数；②光镜、、透射电电镜下细细胞形态态的变化化；③细胞凋凋亡检测测：用原位位末端标标记和连连接酶介介导PCR方法，从从形态和和DNA水平分析析细胞凋凋亡；④细胞增增殖的检检测：……；⑤细胞骨骨架蛋白白的检测测：……；⑥晶状体体蛋白的的检测：3、拟解决决的关键键问题：：存在问题题：抓不住关关键问题题或抓得得不准。。什么是关关键问题题？--研究过程程中对达达预期目目标有重重要影响响的某些些研究内容或因因素。--为达预期期目标所所必须掌掌握的关关键技术术或研究究手段。。撰写要求求：找出关键键问题，，提出解解决办法法。举例：（1）建立差异表表达的cDNA文库：建立差异cDNA文库是筛选老老年性白内障障相关基因的的前提。为使使差异cDNA文库具有代表表性，我们采采取以下解决决方案：①选择各种类类型老年性白白内障晶状体体的前囊膜、、取足够大量量的标本（拟拟取50例标本）作为为建库的mRNA的来源。②利用改良的的消减杂交技技术可快速、、有效地获得得差异表达的的完整cDNA片段。此技术术是本课题组组成员主要的的研究成果，，在应用此项项技术中已积积累了较丰富富的实验经验验。（2）制备基因芯芯片：制备用于本研研究的芯片是是筛选老年性性白内障相关关基因的关键键环节。制备备基因芯片的的关键是在1平方厘米的基基片上放上成成百上千的不不同基因探针针而不使它们们发生任何混混淆。在制作作基因芯片时时做到：①严严格按操作程程序进行；②②在标本的处处理及RNA提取时避免污污染，否则即即会造成严重重的损失。只只要严格按操操作程序进行行操作就可以以避免发生差差错。（3）在体基因转转染：在体基因转染染是进行白内内障相关基因因功能研究的的关键。在体体的晶状体上上皮细胞大部部分处在静息息状态，只有有位于赤道前前区的少量细细胞具有分裂裂活性，而且且晶状体表面面有一层胶原原性质的囊膜膜包裹。在体晶状体的的基因转染的的关键是如何何使大量分裂裂后细胞转染染，如何使病病毒穿过晶状状体的囊膜，，针对以上问题题我们拟采取取下列方法解解决：①选用用反转录病毒毒的慢病毒载载体（lentiviralvector），它克服了了一般反转录录病毒只能转转染有分裂能能力细胞的局局限性，对分分裂后细胞也也能有效的转转染。这对在在体晶状体的的基因转染有有很大的优越越性。②采用用直径1-2μm玻璃微管在显显微镜下将病病毒载体注入入晶状体的前前囊膜下，既既不破坏晶状状体的完整性性，又可使病病毒接触到囊囊膜下的上皮皮细胞。4、研究方法存在问题：过于简单：在在方案中只有有方法名称而而无具体步骤骤。过于繁杂：大大量罗列一些些常规的实验验方法。撰写要求：以研究项目的的需求为前提提，尽量采用用最适合的方方法和手段，，并将其操作作步骤和关键键环节体现在在技术路线当当中。5、技术路线线存在问题：：不清楚，不不详细，不不可行。撰写要求：：清晰、详细细、注意逻逻辑性。撰写方法：：—以时间顺序序为主线设设计技术路路线—以研究内容容为主线设设计技术路路线—分大小标题题，突出逻逻辑关系。。—详细地写清清楚每个具具体步骤。。（1）人晶状体体上皮细胞胞的获得：：老年性白内内障晶状体体上皮细胞胞取自白内内障患者手手术中取出出的前囊膜膜（晶状体体上皮细胞胞紧贴于前前囊膜），，直径约5mm。正常晶状状体上皮细细胞取自角角膜移植供供体眼的晶晶状体，在在显微镜下下撕下前囊囊膜，直径径约8mm。按文献提提供的方法法去除晶状状体纤维细细胞，仔细细清洗以去去除血细胞胞污染。（2）建立差异异cDNA文库：从50例白内障手手术患者的的前囊膜上上取下的晶晶状体上皮皮细胞作为为实验组，，从25例正常晶状状体前囊膜膜上取下的的晶状体上上皮细胞作作为对照组组，利用改改良的消减减杂交技术术[19，20]，获获得得差差异异表表达达的的cDNA，并并建建立立文文库库。。主要要的的实实验验流流程程如如下下：：正常常晶晶状状体体上上皮皮细细胞胞白白内内障障晶晶状状体体上上皮皮细细胞胞PromegaPolyATtract®®System1000mRNA分离离mRNA分离离oligo-dT18反转转录录ntechCap-finder方法法反反转转录录cDNABiotin-21-dUTPpending-cDNA随机引物物PCR杂交SephacrylS-400柱除盐及小小片段链亲和素素-生物素磁磁性分离离除去杂交交体及过过量正常常晶状体体上皮细细胞cDNA“长距离””PCR目的cDNA的特异扩扩增克隆、鉴鉴定、转转化建立差异异基因文文库（3）制备基基因芯片片筛选白白内障相相关基因因：①基因因芯片的的制备：：………②白内障相相关基因因的筛选选：……（4）白内障障相关基基因的结结构分析析：①序列列测定：：......②序列的计计算机分分析：......③获得全长长基因：：......（5）基因转转染：①培培养人人晶状状体上上皮细细胞的的转染染：……②在体晶晶状体体的转转染：：……6、可行行性分分析对实验验方案案设计计的分分析理论分分析研究手手段方方法分分析预实验验结果果分析析对相关关条件件的分分析所用特特殊实实验材材料（（试剂剂）的的分析析对所具具备的的实验验条件件进行行分析析对项目目组成成员搭搭配及及其运运用技技术方方法的的能力力分析析(1)关于建立差差异cDNA文库：老年性白内内障晶状体体上皮细胞胞与正常晶晶状体上皮皮细胞是处处在不同状状态下的细细胞，细胞胞基因表达达的改变是细胞蛋白白功能等改改变的基础础。寻找这这些有差异异的基因是探索细细胞功能、、状态变化化原因的突突破口。利利用的消减杂交技技术是筛选选差异表达达基因的有有效方法。。改良的消减杂交交技术是我我们研究组组成员建立立的方法，，应用此方法已经经从脂多糖糖刺激前后后的人牙髓髓细胞的差差异表达的基因中中克隆到脂脂多糖刺激激后特异表表达的基因因，其中5个为新基因因，这一研研究成果进进一步证实实了该方法法的可操作性性，而且我我们在运用用此方法过过程中也积积累了较丰富的经经验，因此此，本研究究利用这一一方法从两两种状态的晶状体体上皮细胞胞中筛选差差异表达的的基因并建建立cDNA文库是可可行的。。7、创新性性存在问题题：对创创新点提提炼不够够把运用新新技术、、新方法法理解为为创新与研究目目标、研研究内容容相混淆淆对创新的的理解：原始创新新：填补补空白或或修改传传统的理理论发明创造造新技术术、新方方法跟踪创新新：补充充、完善善现有理理论修改、完完善现有有技术方方法（1＋1＞2）提炼方法法：用逆向思思维方法法提炼创创新点（1）基因筛筛选方法法上的创创新：首次采用用改良的的消减杂杂交技术术建立白内内障晶状状体上皮皮细胞差差异表达达基因文文库，并并制备相相应的基基因芯片片，利用此此基因芯芯片筛选出老老年性白白内障相相关基因因。上述两两种方法法的有机机结合使使我们能能快速、准确、、定性、定量量地获得多个个白内障相关关基因。通过分析这这些基因的结结构、研究它它们的功能，，揭示老年性性白内障晶状状体上皮细胞胞变化的分子子生物学机制制，为防治白白内障提供新新的思路。（2）基因功能研研究上的创新新：......年度研究计划划：按年度列出研研究内容及其其阶段目标拟组织的重要要学术交流活活动、国际合合作与交流计计划预期研究结果果：理论成果：建建立/丰富/补充/填补......技术方法：建建立/完善…...专利利：可可望获得……论文文：国国际、国内人才培养：青青年科技骨干干、博硕研究究生8、年年度研研究计计划及及预期期研究究结果果1、研究究工作作积累累存在问问题：：内容过过简；；与与申请请项目目无关关。撰写要要求：：介绍与与申请请项目目直接接相关关的预预实验验研究究结果果；提供相相关的的研究究论文文、成成果及及专利利等材材料；；以往应应用与与申请请项目目有关关的技技术方方法的的经历历；工作积积累也也要包包括项项目组组成员员的所所有信信息。。四、研研究基基础（1）有关关消减减杂交交技术术和基基因芯芯片技技术的的工作作基础础:本研究究所用用的基基因筛筛选技技术主主要是是改良良的消消减杂杂交技技术，，此技技术是是我们们研究究组成成员主主要参参与建建立的的，并并利用用此技技术从从脂多多糖刺刺激前前后的的人牙牙髓细细胞的的差异异表达达的基基因中中克隆隆到脂脂多糖糖刺激激后特特异表表达的的基因因，其其中5个为新基基因，有有关此技技术的研研究论文文有：......（2）有关基基因转染染方面的的研究工工作基础础：......（3）有关老老年性白白内障相相关基因因的研究究基础：：......2、工作条条件实验室整整体实力力和规模模（地位位、课题题、成果果等）实验室所所具备的的与申请请项目相相关的主主要仪器器设备实实验室所所在单位位具备的的申请项项目所需需的实验验条件3、项目组组人员简简历所有人员员均需介介绍（重重点是项项目负责责人）介介绍内容容根据在在项目中中的分工工有所侧侧重列列出出与申请请项目相相关的研研究论文文及成果果第六部分分申请书各各部分之之间的关关系立论依据据：阐述背背景和理理由，回回答“为为什么””实验方案案：是申请请书的核核心，回回答“怎怎么做””研究基础础：展示积积累和实实力，回回答“做做了啥””1、对立立论依据据、实验验方案、、研究基基础应阐阐述的内内容以及及三者关关系的理理解2、对研究究目标的的确定国内外现现状分析析中提出出的具体体科学问问题就是是项目的的研究目目标，研研究目标标具体到到什么程程度，要要根据研究究周期、、资助强强度来确确定。3、研究目目标、研研究内容容、研究究方法的的关系依据目标确定定研究内内容根根据内容容选择研研究方法法4、研究内内容与技技术路线线的区别别研究内容容：根据总总体目标标分若干干分题，，重点回回答做做什么么—观察指标标、阶段段目标技术路线线：重点回回答怎么么做—在具体步步骤中体体现研研究内内容和研研究方法法5、对拟解解决的关关键问题题与可行行性分析析撰写时时的区别别二者相同同之处：：拟解决的的关键问问题在可可行性分分析时也也要提及及二者不同同之处：：撰写拟解解决关键键问题，，重点回答答如何解决决。解决办法法包括：：通过研研究思路路的设计计巧妙运用最新新出现的的研究方方法通过不同同方法各各自优点点的有机机结合在进行可可行性分分析时，，重点回答答能够解决决。分析问题题角度：：通过对对现有理理论分析析提供理理论依据据通过对预预研结果果分析提提供实验验依据通过对他他人研究究成果描描述提供供佐证6、创新点点、研究究目标和和预期研研究结果果的区别别三者的共共同点：都包含含一个““新”字字。三者的不不同点：概念的的外延不不同。创新新点点：①形态学证证实在脑脑下垂体体中确有神经纤维维存在②进一步实实验证实实是肽能神经经研究目标标：通过各种种形态学学研究充充分证明明在脑下下垂体中中确有肽能神经经支配预期研究究结果：：提出脑下下垂体肽能神经经和体液液双重调调节假说，对对原有理理论提出出挑战。。1、在项目目设计过过程中要要树立整整体观念