第十讲猪链球菌病诊断优质课件

第十讲猪链球菌病诊断第十讲猪链球菌病诊断1优选第十讲猪链球菌病诊断优选第十讲猪链球菌病诊断2一、病原分离1采样活猪：采样用灭菌棉拭子擦拭扁桃体病死猪：扁桃体、肺、肝、血液，有脑炎症状取脑组织，关节炎可取关节囊液一、病原分离1采样32分离培养（1）培养基：THB培养基、绵羊血或马血平板（2）培养条件：需氧兼性厌氧、37℃、pH7.2

猪链球菌2性营养要求比马链球菌兽疫亚种低，后者需加3-5%的犊牛血清2分离培养4二、临床诊断

主要表现为败血症、化脓性淋巴结炎、脑膜炎、心内膜炎、关节炎等。但不同链球菌病原引起的症状类似，故该诊断不能用于确诊。二、临床诊断主要表现为败血症、化脓性淋巴结炎、脑5关节炎症状关节炎症状6败血症败血症71染色镜检猪链球菌2型：革兰氏染色阳性、菌体呈圆形或椭圆形，直径小于2.0μm，一般呈短链或成双排列，革兰氏染色阳性，菌体表面能形成荚膜。

二、微生物学诊断1染色镜检二、微生物学诊断8ef，mrp，gdh，orf2ZY05719(cps2)马链球菌兽疫亚种：用类M蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观察gdh(688bp)mrp、ef、cps2、orf2以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测图2猪链球菌2型(ZY05719)5~1um，液体培养基中呈长链，菌体表面能形成荚膜。HA9801(cps2)原理：不同种或亚种链球菌基因不同，因而用限制性内切酶酶切后，其电泳图谱不同。用多对随机引物进行PCR扩增，可得到不同的产物，且产物具有多态性。mrp、ef、cps2、orf2以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测马链球菌兽疫亚种猪链球菌2型菌（α溶血）图2猪链球菌2型(ZY05719)马链球菌兽疫亚种只能用于定群gdh(688bp)0μm，一般呈短链或成双排列，革兰氏染色阳性，菌体表面能形成荚膜。V-P试验阴性，不产生靛基质，不还原硝酸盐，不液化明胶。革兰氏阳性球菌，直径0.马链球菌兽疫亚种：

革兰氏阳性球菌，直径0.5~1um，液体培养基中呈长链，菌体表面能形成荚膜。营养要求较高，在5%犊牛血清生长良好。根据类M蛋白抗原性的差异，该菌至少有15个血清型。ef，mrp，gdh，orf2马链球菌兽疫亚种：9马链球菌兽疫亚种猪链球菌2型菌（α溶血）马链球菌兽疫亚种10图2猪链球菌2型

(ZY05719)

第十讲猪链球菌病诊断优质课件11ATCC35246株ATCC35246株122培养特性猪链球菌2型：

菌落形态血平板上呈灰白色小菌落，粘稠，2型在绵羊血平板上呈α溶血，马血平板则呈β溶血。2培养特性13马链球菌兽疫亚种：在血清肉汤培养基中培养该菌，开始时有轻度混浊，继而变清，于管底形成沉淀。于5％绵羊血琼脂（THA）培养基上培养24h，大部分菌株形成3～4mm的粘液样大菌落，产生明显的β溶血。小部分呈非粘液样菌落，大小约1mm左右。马链球菌兽疫亚种：143生化鉴定猪链球菌2型：

发酵乳糖、海藻糖、水扬苷，部分菌株发酵棉实糖、菊糖；不发酵甘露醇、山梨醇3生化鉴定15ATCC35246株orf2(858bp).在血清肉汤培养基中培养该菌，开始时有轻度混浊，继而变清，于管底形成沉淀。ATCC35246株随机扩增多态DNA分析（RAPD）1:HA9801;mrp、ef、cps2、orf2以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测革兰氏阳性球菌，直径0.用多对随机引物进行PCR扩增，可得到不同的产物，且产物具有多态性。革兰氏染色阳性、菌体呈圆形或椭圆形，直径小于2.状取脑组织，关节炎可取关节囊液小部分呈非粘液样菌落，大小约1mm左右。HA9801(cps2)M1234用于猪链球菌2型快速定型，但要求抗体效价高；马链球菌兽疫亚种：用类M蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观察gdh(688bp)原理：不同种或亚种链球菌基因不同，因而用限制性内切酶酶切后，其电泳图谱不同。HA9801(cps2)用于猪链球菌2型快速定型，但要求抗体效价高；马链球菌兽疫亚种：能水解精氨酸，发酵乳糖、水扬苷、山梨醇产酸。不能发酵菊糖、甘露醇、棉子糖和海藻糖。V-P试验阴性，不产生靛基质，不还原硝酸盐，不液化明胶。ATCC35246株马链球菌兽疫亚种：16三、免疫学诊断1玻板凝集实验用于猪链球菌2型快速定型，但要求抗体效价高；马链球菌兽疫亚种只能用于定群

2乳胶凝集实验敏感性较高，结果容易判断，但有非特异性三、免疫学诊断1玻板凝集实验173免疫荧光猪链球菌2型：用MRP特异抗体可用于菌体表面其分布的观察，但需用激光共聚焦显微镜。马链球菌兽疫亚种：用类M蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观察3免疫荧光18MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像

MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像19

SS2多抗介导FITC标记的SS2的激光共聚焦图像

SS2多抗介导FITC标记的SS2的激光共聚焦图像20ELISA

常用链球菌多克隆抗体包被，以MRP或类M蛋白的单克隆抗体夹心，敏感性高，特异性较强。ELISA21四、分子诊断1多酶电泳法：原理：不同型猪链球菌，胞内酶分子的氨基酸有差异，因而电荷有差异，在电场中，其迁移率有差异。用于不同型链球菌的分析四、分子诊断1多酶电泳法：222限制性酶切图谱分析

原理：不同种或亚种链球菌基因不同，因而用限制性内切酶酶切后，其电泳图谱不同。用于分离株变异分析，亦可用于不同种或型的鉴定2限制性酶切图谱分析23随机扩增多态DNA分析（RAPD）用多对随机引物进行PCR扩增，可得到不同的产物，且产物具有多态性。可用于种或型的鉴定或分离株变异分析随机扩增多态DNA分析（RAPD）24PCR猪链球菌2型：

mrp、ef、cps2、orf2以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测

cps2具有型特异性PCR25bp970744622557mrp,ef,sly,CPS2123451:HA9801;2:ZY05719;3:Marker;4,5:阴性对照bp970744622557mrp,ef,sly26250bp500bp750bpM122000bp1000bpMaker1.HA9801(cps2)2.ZY05719(cps2)cps2250bp500bp750bpM127250bp500bp750bp2000bpM1234ef，mrp，gdh，orf2Maker1.ef(626bp)2.mrp(316bp)3.gdh(688bp)4.orf2(858bp).250bp500bp750bp2000bpM128马链球菌兽疫亚种：用类M蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观察原理：不同型猪链球菌，胞内酶分子的氨基酸有差异，因而电荷有差异，在电场中，其迁移率有差异。随机扩增多态DNA分析（RAPD）革兰氏染色阳性、菌体呈圆形或椭圆形，直径小于2.0μm，一般呈短链或成双排列，革兰氏染色阳性，菌体表面能形成荚膜。ef(626bp)发酵乳糖、海藻糖、水扬苷，部分菌株发酵mrp、ef、cps2、orf2以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测orf2(858bp).原理：不同种或亚种链球菌基因不同，因而用限制性内切酶酶切后，其电泳图谱不同。3:Marker;用多对随机引物进行PCR扩增，可得到不同的产物，且产物具有多态性。V-P试验阴性，不产生靛基质，不还原硝酸盐，不液化明胶。图2猪链球菌2型(ZY05719)ATCC35246株用多对随机引物进行PCR扩增，可得到不同的产物，且产物具有多态性。随机扩增多态DNA分析（RAPD）1:HA9801;敏感性较高，结果容易判断，但有非特异性图2猪链球菌2型(ZY05719)gdh(688bp)cps2具有型特异性原理：不同种或亚种链球菌基因不同，因而用限制性内切酶酶切后，其电泳图谱不同。ATCC35246株V-P试验阴性，不产生靛基质，不还原硝酸盐，不液化明胶。革兰氏染色阳性、菌体呈圆形或椭圆形，直径小于2.用于分离株变异分析，亦可用于不同种或型的鉴定V-P试验阴性，不产生靛基质，不还原硝酸盐，不液化明胶。革兰氏阳性球菌，直径0.ATCC35246株用于猪链球菌2型快速定型，但要求抗体效价高；mrp、ef、cps2、orf2以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测原理：不同型猪链球菌，胞内酶分子的氨基酸有差异，因而电荷有差异，在电场中，其迁移率有差异。用于猪链球菌2型快速定型，但要求抗体效价高；随机扩增多态DNA分析（RAPD）在血清肉汤培养基中培养该菌，开始时有轻度混浊，继而变清，于管底形成沉淀。用多对随机引物进行PCR扩增，可得到不同的产物，且产物具有多态性。0μm，一般呈短链或成双排列，革兰氏染色阳性，菌体表面能形成荚膜。HA9801(cps2)250bp500bp750bp1000bp2000bp250bp500bp750bp1000bp2000bp1099bp1310bpM1M1slyfbpsMaker1.slyMaker1.fbps马链球菌兽疫亚种：用类M蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观29第十讲猪链球菌病诊断第十讲猪链球菌病诊断30优选第十讲猪链球菌病诊断优选第十讲猪链球菌病诊断31一、病原分离1采样活猪：采样用灭菌棉拭子擦拭扁桃体病死猪：扁桃体、肺、肝、血液，有脑炎症状取脑组织，关节炎可取关节囊液一、病原分离1采样322分离培养（1）培养基：THB培养基、绵羊血或马血平板（2）培养条件：需氧兼性厌氧、37℃、pH7.2

猪链球菌2性营养要求比马链球菌兽疫亚种低，后者需加3-5%的犊牛血清2分离培养33二、临床诊断

主要表现为败血症、化脓性淋巴结炎、脑膜炎、心内膜炎、关节炎等。但不同链球菌病原引起的症状类似，故该诊断不能用于确诊。二、临床诊断主要表现为败血症、化脓性淋巴结炎、脑34关节炎症状关节炎症状35败血症败血症361染色镜检猪链球菌2型：革兰氏染色阳性、菌体呈圆形或椭圆形，直径小于2.0μm，一般呈短链或成双排列，革兰氏染色阳性，菌体表面能形成荚膜。

二、微生物学诊断1染色镜检二、微生物学诊断37ef，mrp，gdh，orf2ZY05719(cps2)马链球菌兽疫亚种：用类M蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观察gdh(688bp)mrp、ef、cps2、orf2以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测图2猪链球菌2型(ZY05719)5~1um，液体培养基中呈长链，菌体表面能形成荚膜。HA9801(cps2)原理：不同种或亚种链球菌基因不同，因而用限制性内切酶酶切后，其电泳图谱不同。用多对随机引物进行PCR扩增，可得到不同的产物，且产物具有多态性。mrp、ef、cps2、orf2以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测马链球菌兽疫亚种猪链球菌2型菌（α溶血）图2猪链球菌2型(ZY05719)马链球菌兽疫亚种只能用于定群gdh(688bp)0μm，一般呈短链或成双排列，革兰氏染色阳性，菌体表面能形成荚膜。V-P试验阴性，不产生靛基质，不还原硝酸盐，不液化明胶。革兰氏阳性球菌，直径0.马链球菌兽疫亚种：

革兰氏阳性球菌，直径0.5~1um，液体培养基中呈长链，菌体表面能形成荚膜。营养要求较高，在5%犊牛血清生长良好。根据类M蛋白抗原性的差异，该菌至少有15个血清型。ef，mrp，gdh，orf2马链球菌兽疫亚种：38马链球菌兽疫亚种猪链球菌2型菌（α溶血）马链球菌兽疫亚种39图2猪链球菌2型

(ZY05719)

第十讲猪链球菌病诊断优质课件40ATCC35246株ATCC35246株412培养特性猪链球菌2型：

菌落形态血平板上呈灰白色小菌落，粘稠，2型在绵羊血平板上呈α溶血，马血平板则呈β溶血。2培养特性42马链球菌兽疫亚种：在血清肉汤培养基中培养该菌，开始时有轻度混浊，继而变清，于管底形成沉淀。于5％绵羊血琼脂（THA）培养基上培养24h，大部分菌株形成3～4mm的粘液样大菌落，产生明显的β溶血。小部分呈非粘液样菌落，大小约1mm左右。马链球菌兽疫亚种：433生化鉴定猪链球菌2型：

发酵乳糖、海藻糖、水扬苷，部分菌株发酵棉实糖、菊糖；不发酵甘露醇、山梨醇3生化鉴定44ATCC35246株orf2(858bp).在血清肉汤培养基中培养该菌，开始时有轻度混浊，继而变清，于管底形成沉淀。ATCC35246株随机扩增多态DNA分析（RAPD）1:HA9801;mrp、ef、cps2、orf2以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测革兰氏阳性球菌，直径0.用多对随机引物进行PCR扩增，可得到不同的产物，且产物具有多态性。革兰氏染色阳性、菌体呈圆形或椭圆形，直径小于2.状取脑组织，关节炎可取关节囊液小部分呈非粘液样菌落，大小约1mm左右。HA9801(cps2)M1234用于猪链球菌2型快速定型，但要求抗体效价高；马链球菌兽疫亚种：用类M蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观察gdh(688bp)原理：不同种或亚种链球菌基因不同，因而用限制性内切酶酶切后，其电泳图谱不同。HA9801(cps2)用于猪链球菌2型快速定型，但要求抗体效价高；马链球菌兽疫亚种：能水解精氨酸，发酵乳糖、水扬苷、山梨醇产酸。不能发酵菊糖、甘露醇、棉子糖和海藻糖。V-P试验阴性，不产生靛基质，不还原硝酸盐，不液化明胶。ATCC35246株马链球菌兽疫亚种：45三、免疫学诊断1玻板凝集实验用于猪链球菌2型快速定型，但要求抗体效价高；马链球菌兽疫亚种只能用于定群

2乳胶凝集实验敏感性较高，结果容易判断，但有非特异性三、免疫学诊断1玻板凝集实验463免疫荧光猪链球菌2型：用MRP特异抗体可用于菌体表面其分布的观察，但需用激光共聚焦显微镜。马链球菌兽疫亚种：用类M蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观察3免疫荧光47MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像

MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像48

SS2多抗介导FITC标记的SS2的激光共聚焦图像

SS2多抗介导FITC标记的SS2的激光共聚焦图像49ELISA

常用链球菌多克隆抗体包被，以MRP或类M蛋白的单克隆抗体夹心，敏感性高，特异性较强。ELISA50四、分子诊断1多酶电泳法：原理：不同型猪链球菌，胞内酶分子的氨基酸有差异，因而电荷有差异，在电场中，其迁移率有差异。用于不同型链球菌的分析四、分子诊断1多酶电泳法：512限制性酶切图谱分析

原理：不同种或亚种链球菌基因不同，因而用限制性内切酶酶切后，其电泳图谱不同。用于分离株变异分析，亦可用于不同种或型的鉴定2限制性酶切图谱分析52随机扩增多态DNA分析（RAPD）用多对随机引物进行PCR扩增，可得到不同的产物，且产物具有多态性。可用于种或型的鉴定或分离株变异分析随机扩增多态DNA分析（RAPD）53PCR猪链球菌2型：

mrp、ef、cps2、orf2以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测

cps2具有型特异性PCR54bp970744622557mrp,ef,sly,CPS2123451:HA9801;2:ZY05719;3:Marker;4,5:阴性对照bp970744622557mrp,ef,sly55250bp500bp750bpM122000bp1000bpMaker1.HA9801(cps2)2.ZY05719(cps2)cps2250bp500bp750bpM156250bp500bp750bp2000bpM1234ef，mrp，gdh，orf2Maker1.ef(626bp)2.mrp(316bp)3.gdh(688bp)4.orf2(858bp).250bp500bp750bp2000bpM157马链球菌兽疫亚种：用类M蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观察原理：不同型猪链球菌，胞内酶分子的氨基酸有差异，因而电荷有差异，在电场中，其迁移率有差异。随机扩增多态DNA分析（RAPD）革兰氏染色阳性、菌体呈圆形或椭圆形，直径小于2.0μm，一般呈短链或成双排列，革兰氏染色阳性，菌体表面能形成荚膜。ef(626bp)发酵乳糖、海藻糖、水扬苷，部分菌株发酵mrp、ef、cps2、orf2以及溶血素基因均