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文档简介

酶联免疫吸附测定法

免疫学实验基本原理它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）②酶标记的抗原或抗体（标记物）③酶作用的底物（显色剂）实验器材和药品固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器。最常用的是聚苯乙烯和聚氯乙烯。它们有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性。

微量滴定板，量滴定板为8×12的96孔式。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性增加。

酶结合物是酶与抗体或抗原联结的产物。具有酶促反应，显示出生物放大作用。在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)和碱性磷

酸酶(alkalinephosohatase,AP)。阳性对照品(positivecontrol)和阴性对照品(negativecontrol)阴性对照品须先行检测，确定其中不含待测物质。阳性对照品在含蛋白保护剂的缓冲液中加入一定量的待检物质，含量约为最低检测敏感度的10~20倍。实验方法:

1.加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

2.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

3.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

4.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

5.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅。也可测O·D值：在ELISA检测仪

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