第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件

第五章

药物定量分析与分析方法验证药物分析教研室第五章

药物定量分析与分析方法验证药物分析教研室Contents定量分析样品的前处理方法1定量分析方法的特点2药物分析方法的验证3Contents定量分析样品的前处理方法1定量分析方法的特点第一节药品分析方法的验证一.目的：证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求二.用途（一）药品质量标准起草时，分析方法需要经过验证。（二）药物合成方法变更、制剂组分变更、原分析方法进行修订时。第一节药品分析方法的验证一.目的：二.用途需验证的分析项目1.鉴别试验2.杂质定量或限度检查3.原料或制剂中有效成分含量测定4.制剂中其他成分（降解产物、防腐剂）的测定5.溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。需验证的分析项目四.验证内容精密度,准确度,检测限,专属性，定量限，线性、范围和耐用性四.验证内容（一）、准确度（accuracy）

系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。回收率(Recovery)回收试验法加样回收试验3×3，至少9个测定结果（一）、准确度（accuracy）系指用该方回收试验：空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为MR=M（平均）/A*100%

回收试验：空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值加样回收试验：已准确测定药物含量P的真是样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M加样回收试验：已准确测定药物含量P的真是样品+已知量A的对照数据要求：规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次数据要求：规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不二、精密度(Precision)系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之接近的程度。表示：偏差(d)、标准偏差(s)、相对标准偏差(RSD)重复性:

同一实验室,同一人多次测定的精密度中间精密度:

同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度

重现性:

不同实验室，不同人测定的精密度二、精密度(Precision)系指在规定的测试条件下，同一三、专属性(Specificity)

指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性。四、检测限(LimitofDetection,LOD)药物能被检出的最低浓度(µg/ml)1.非仪器分析目视法2.信噪比法一般以信噪比（S/N）3:1或2:1的相应浓度或注入量来确定检测限三、专属性(Specificity)指有其他成分（杂质、五、定量限(LimitofQuantitation,LOQ)药物能被定量测定的最低浓度(µg/ml)信噪比法

S/N=10五、定量限(LimitofQuantitation,L六、线性待测结果(响应值)与试样中被测物的浓度或量直接成正比关系的程度。

Y=a+bx（r=0.9999)六、线性待测结果(响应值)与试样中被测物的浓度或量直接成正比精密称取大黄素对照品约17.29mg,，置50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为大黄素对照品储备液。精密吸取储备液0.2、0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0mL分别置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件，分别进样10μl，记录峰面积，以峰面积(y)为纵坐标、大黄素浓度(x)为横坐标进行线性回归，得回归方程。Y=2.962106X－4.958103r=0.9999

结果表明大黄素溶液在6.92μg·mL-1~311μg·mL-1之间呈良好的线性关系。

精密称取大黄素对照品约17.29mg,，置50mL量瓶中标准曲线与线性范围6.412.819.225.63232.41.81.20.60茶碱(µg/ml)·····Y=9.56610-2X+6.15310-3

r=0.9995至少6个浓度点建立标准曲线线性范围必须覆盖全部待测浓度，不得外推最低浓度点偏差在±20%其余浓度点的偏差在±

15%。标准曲线与线性范围6.412.819.225.63232.七.范围达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。七.范围测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pH，商品柱的品牌，柱温等八、耐用性(Robustness)测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度八、耐用性(Robu①①已有重现性验证，不需验证中间精密度②如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充②③视具体情况予以验证③①①已有重现性验证，不需验证中间精密度②如一种方法不够专属，各种含量测定方法对效能指标的要求1.容量分析法

用原料药精制品(含量>99.5%)或对照品考察方法的精密度，RSD≤

0.2%

；回收率一般在99.7～100.3%之间。

2.UV法

用适当浓度的精制品进行测定，其RSD≤1%

。制剂的测定，回收率一般应在98～102％之间。3.HPLC法

要求RSD<2％，回收率98～102%之间。各种含量测定方法对效能指标的要求1.容量分析法第二节定量分析样品的前处理方法不经有机破坏经有机破坏直接测定配位滴定法氧化还原滴定法水解后测定碱水解酸水解经还原分解后测定湿法破坏——凯氏定氮法干法破坏高温灼烧法氧瓶燃烧法第二节定量分析样品的前处理方法不经有机破坏经有机破坏直接测一.含金属的有机药物分析(一)、结构分析富马酸亚铁邻二氮菲-硫酸铈滴定特点：药物中金属原子与药物连接的不牢固，在水溶液中可以离解成金属离子。1.金属原子不直接于碳原子相连或某些C-M键结合不牢固的有机金属药物。富马酸亚铁邻二氮菲-硫酸铈滴定1.金属原子不直接于碳原子2.金属直接和碳原子相连的有机金属药物特点：药物中金属原子与药物连接的牢固，需要进行有机破坏。2.金属直接和碳原子相连的有机金属药物特点：药物中金属原子与(二)、含量测定如富马酸亚铁含量测定1.含铁药物（溶解直接测定法）(二)、含量测定如富马酸亚铁含量测定1.含铁药物（溶解直接测第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件2.含锑药物（水解后测定法）如：葡萄糖酸锑钠2.含锑药物（水解后测定法）二、经有机破坏的分析方法

含氮、硫、硫柳汞、氯化钠的生物制品、含氮有机合成药物测定的前处理和生物制品中金属元素测定时生物基质的去除。H2SO4-HNO3H2SO4-HClO4H2SO4-H2SO4HNO3-KMnO4分解剂/消化剂辅助分解剂——凯氏定氮法测定含有氨基和酰胺结构的药物结构(一)湿法破坏二、经有机破坏的分析方法含氮、硫、硫柳汞、氯化钠原理将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子中有机结构被“消化”成CO2和H2O，有机结合的氮转化为无机氮，与过量的硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，经碱化后释放出氨气，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。常量法——含氮量25～30mg半微量法——含氮量

1.0～2.0mg原理将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子中有凯氏烧瓶K2SO4(提高消解温度)CuSO4(加快消解速度)硫酸碱液硼酸(吸收液)甲基红-溴甲酚绿指示剂硫酸滴定空白校正凯氏烧瓶K2SO4(提高消解温度)硫酸碱液硼酸(吸收液)硫酸(二)干法破坏1.高温灼烧法常用于含卤素、含磷药物和药物中砷盐的检查。常加入无水碳酸钠、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化。注意事项：（1）加热或灼烧时温度应控制在420摄氏度以下。（2）要灰化完全（3）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但不要轻易弃去。(二)干法破坏1.高温灼烧法常用于含卤素、含磷药物和药物中砷2.氧瓶燃烧法系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密闭的密闭的燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为CO2和H2O，待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，再根据其性质和存在方式选择方法进行分析。2.氧瓶燃烧法系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件第一节定量分析样品的前处理方法第一节定量分析样品的前处理方法操作方法①样品的准备

取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下端的网或螺旋处。

②燃烧瓶燃烧前的准备

用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速度地通入氧气1min,立即用表面皿覆盖瓶口。操作方法①样品的准备

取样品适量，精密称定后按③样品的燃烧点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，待燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量冲瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测定。③样品的燃烧④吸收液的选择④吸收液的选择⑤注意事项：（1）充氧气，使瓶内空气排尽（2）测定含氟有机药物时，用石英制燃烧瓶（3）铂丝燃烧时起催化作用（4）应同时做空白试验（5）燃烧时要注意防爆（6）燃烧要完全（7）燃烧产生的烟雾完全被吸收⑤注意事项：第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件2.在药物含量测定中的应用碘苯酯的含量测定

取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用NaOHT.S.2ml与H2O10ml为吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液10ml，密塞，振摇放置数分钟，加甲酸约1ml，用水洗涤瓶口，并通入空气流约3~5min，以除去剩余的溴蒸气，加KI2g，密塞，摇匀，用Na2S2O3液(0.02mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硫代钠液(0.02mol/L)相当于1.388mg的C19H29IO2。2.在药物含量测定中的应用取本品约20mg，精密称定，第三节定量分析方法的特点一.容量分析法将已知浓度的滴定液（标准物质溶液）由滴定管滴加到被测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物反应完全，然后根据滴定液的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系计算出被测药物的含量。适用范围：化学原料药的含量测定特点：方法简单仪器价格低廉、测定结果准确、方法耐用性高、方法专属性差第三节定量分析方法的特点一.容量分析法二.光谱分析法1.紫外可见分光光度法朗伯比尔定律2.荧光分析法物质受紫外光或可见光照射激发后能发射出比激发光波长长的荧光。当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定的时候，物质在一定浓度范围内，其荧光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系，可用来进行定量分析。二.光谱分析法特点：（1）灵敏度高，10-12~10-10g/ml（2）荧光自熄灭（3）对于容易被光分解的样品，为了避免因激发光多次照射而影响荧光强度，我们可以选择一种激发光的波长与它近似的而对光稳定的物质配成适当浓度的溶液，作为基准溶液。（4）采用荧光衍生化试剂，使没有荧光或者荧光比较弱的物质和一种荧光试剂发生反应，得到一个强的荧光产物，来提高分析方法的选择性。特点：三.色谱分析法1.HPLC法系统适用性试验：即用规定的对照品对色谱系统进行实验和条件①色谱柱的理论塔板数：在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或各种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间TR和半峰宽Wh/2,按n=5.54(tr/wh/2)2计算色谱柱的理论板数。三.色谱分析法②分离度（R）无论定性鉴别或定量分析，均要求待测峰与其人峰、内标峰或特定的杂货对照峰之间有较好的分离度。除另有规定外，定量分析时分离度应大于1.5。③重复性取各品种项下的对照常溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%。②分离度（R）④拖尾因子（T）为保证分离效果和测量精度，应检查待测峰的拖尾因子是否符合各品种项下的规定。除另有规定外，峰高法定量时T应在0.95~1.05之间。峰面积法测定时，T值偏离过大，也会影响小峰的检测和定量的准确度。④拖尾因子（T）测定法：

内标法加校正因子测定供试品中主成分含量

外标法测定供试品中主成分的含量①外标法：用标准品的峰面积或峰高与其对应的浓度做一条标准曲线,测出样品的峰面积或峰高,在标准曲线上查出其对应的浓度,这是最常用的一种定量方法。含量Cx=CR×(AX/AR)测定法：②内标法：精密称取药物对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液适量，混合配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积。校正因子（f）=(AS/CS)/(AR/CR)AS为内标物质的峰面积；AR为对照品的峰面积；CS为内标物质的浓度；CR为对照品的浓度含量Cx=f×(AX/（Aˊs/cˊs)

内标物质的峰面积和浓度②内标法：精密称取药物对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量内标法和外标法比较：1.内标法可避免因样品前处理和进样体积误差对结果的影响。2.外标法比较简单，但要求进样量准确且操作条件稳定。建议采用定量环满进样或自动进样器进样。内标法和外标法比较：四.含量测定计算1.原料药：实际百分含量上限：101.0%下限：98.5%、99.0%、99.5%2.制剂：标示百分含量95.0%---105.0%93.0%---107.0%90.0%---110.0%四.含量测定计算一.原料药含量测定方法（实际百分含量）W%=实际测得量/取样量*100%（一）.容量法W：取样量F：浓度校正因子T：滴定度T=C标*（b/a）*M测（每1ml标准溶液相当于待测物质的质量）一.原料药含量测定方法（实际百分含量）W：取样量F：浓滴定度：每1ml标准溶液相当于待测物质的质量T=C标*（a/b）*M测C标：滴定液的摩尔浓度（mol/l）a:被测药物的摩尔数b:滴定剂的摩尔数M：被测药物的摩尔质量（mg）滴定度：每1ml标准溶液相当于待测物质的质量1.碘量法测VC含量的时候，若VC的分子量为176.13，每1ml碘滴定液（0.1mol/l）相当于VC的质量为？1.碘量法测VC含量的时候，若VC的分子量为176.13，每第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件3.碘量法测定VC含量：取本品0.2000g，加新沸过的冷水100ml与稀HAC10ml使溶解，加淀粉指示液1ml,立即用碘滴定液（0.1mol/l）滴定至溶液显蓝色时，消耗20.00ml。已知VC分子量为176.12，求vc的百分含量。3.碘量法测定VC含量：取本品0.2000g，加新沸过的冷水W%=(1/2)×176.13×0.1×20×10-3/0.2000×100%W%=88.10%W%=(1/2)×176.13×0.1×20×10-W%=

（二）紫外法1.吸收系数法E1%1cm·100A*C样X100%实际测得样品浓度取样浓度（二）紫外法E1%1cm·100A*C样X100%实际测得样例.对乙酰氨基酚含量测定方法为：取本品约40mg，精密称定，置250ml量瓶中，加0.4%NaOH溶液50ml溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%NaOH溶液10ml，加水至刻度，摇匀，照分光光度法，在257nm波长处测定吸收度，按C8H9NO2的吸收系数为715计算，即得，若样品的称样量为m(g),测得的吸收度为A，则含量百分率就算公式为：A.

B.C.D.例.对乙酰氨基酚含量测定方法为：取本品约40mg，精密称定，W%=

×100%

A样*C对*M样A对*C样*M对（二）紫外法2.对照品比较法A样*C对*M样A对*C样*M对（二）紫外法例：取注射用的硫喷妥钠(C11H17N2NaO2S=264.33)的含量测定：精密称定内容物0.2658g，加水稀释至500ml，摇匀，取此液1ml,稀释成100ml，作为样品溶液，另取硫喷妥(C11H18N2O2S=242.33)对照品，制成每1ml中含有5.05ug的溶液，在304nm的波长处分别测定吸收度，测得样品液的吸收度为0.446，对照液体的吸收度为0.477，计算本品的百分含量。（96.9%）例：取注射用的硫喷妥钠(C11H17N2NaO2S=264.第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件二.制剂（标示百分含量）（一）片剂S%=测得量（g/片）/标示量（g/片）*100%

1.容量法二.制剂（标示百分含量）第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件100.3%100.3%二.注射剂S%=测的量（g/ml）/标示量（g/ml）*100%1.容量法标示量二.注射剂标示量2.紫外法（1）吸收系数法稀释倍数标示量2.紫外法稀释倍数标示量例：精密量取醋酸可的松溶液2.0ml，置100ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密量取2.0ml，置另一100ml量瓶中，加无水乙醇至度，于210nm处测A=0.395，计算它的标示百分含量，规格：125mg/5ml。E1%1cm=395。例：精密量取醋酸可的松溶液2.0ml，置100ml量瓶100.0%100.0%（2）对照品比较法S%=【（A测*C对）/（A对*C取样）】*100%（2）对照品比较法例：醋酸地塞米松注射液的含量测定：精密称定醋酸地塞米松对照品25.3mg，加无水乙醇溶解并稀释至100ml,摇匀，即可得对照品溶液；另精密量取本品适量（相当于醋酸地塞米松25mg），置100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤，即得供试品溶液。精密量取对照品溶液与供试品溶液各1ml,分别精密加无水乙醇9ml和氯化三苯四氮唑试液1ml，摇匀，再精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25摄氏度暗处放置40-50分钟，在485nm的波长处测定吸收度，测得对照品溶液与供试品溶液的吸收度分别为0.478和0.468，计算本品的百分含量。例：醋酸地塞米松注射液的含量测定：精密称定醋酸地塞米松对照品99.1%99.1%单项选择题：1．用氧瓶燃烧法破坏有机药物，燃烧瓶的塞底部熔封的是（）A、铁丝B、铜丝C、银丝D、铂丝

2．准确度表示测量值与真值的差异，常用（）反映。A、RSDB、回收率C、标准对照液D、空白实验填空题1．破坏有机药物进行成分分析，可采用__干法_____法，湿法_____法和氧瓶燃烧______法。单项选择题：树立质量法制观念、提高全员质量意识。12月-2212月-22Thursday,December29,2022人生得意须尽欢，莫使金樽空对月。10:02:1510:02:1510:0212/29/202210:02:15AM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦绷。12月-2210:02:1510:02Dec-2229-Dec-22加强交通建设管理，确保工程建设质量。10:02:1510:02:1510:02Thursday,December29,2022安全在于心细，事故出在麻痹。12月-2212月-2210:02:1510:02:15December29,2022踏实肯干，努力奋斗。2022年12月29日10:02上午12月-2212月-22追求至善凭技术开拓市场，凭管理增创效益，凭服务树立形象。29十二月202210:02:15上午10:02:1512月-22严格把控质量关，让生产更加有保障。十二月2210:02上午12月-2210:02December29,2022作业标准记得牢，驾轻就熟除烦恼。2022/12/2910:02:1510:02:1529December2022好的事情马上就会到来，一切都是最好的安排。10:02:15上午10:02上午10:02:1512月-22专注今天，好好努力，剩下的交给时间。12月-2212月-2210:0210:02:1510:02:15Dec-22牢记安全之责，善谋安全之策，力务安全之实。2022/12/2910:02:15Thursday,December29,2022相信相信得力量。12月-222022/12/2910:02:1512月-22谢谢大家！树立质量法制观念、提高全员质量意识。12月-2212月-22踏实，奋斗，坚持，专业，努力成就未来。12月-2212月-22Thursday,December29,2022弄虚作假要不得，踏实肯干第一名。10:02:1510:02:1510:0212/29/202210:02:15AM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦绷。12月-2210:02:1510:02Dec-2229-Dec-22重于泰山，轻于鸿毛。10:02:1510:02:1510:02Thursday,December29,2022不可麻痹大意，要防微杜渐。12月-2212月-2210:02:1510:02:15December29,2022加强自身建设，增强个人的休养。2022年12月29日10:02上午12月-2212月-22追求卓越，让自己更好，向上而生。29十二月202210:02:15上午10:02:1512月-22严格把控质量关，让生产更加有保障。十二月2210:02上午12月-2210:02December29,2022重规矩，严要求，少危险。2022/12/2910:02:1510:02:1529December2022好的事情马上就会到来，一切都是最好的安排。10:02:15上午10:02上午10:02:1512月-22每天都是美好的一天，新的一天开启。12月-2212月-2210:0210:02:1510:02:15Dec-22务实，奋斗，成就，成功。2022/12/2910:02:15Thursday,December29,2022抓住每一次机会不能轻易流失，这样我们才能真正强大。12月-222022/12/2910:02:1512月-22谢谢大家！踏实，奋斗，坚持，专业，努力成就未来。12月-2212月-2第五章

药物定量分析与分析方法验证药物分析教研室第五章

药物定量分析与分析方法验证药物分析教研室Contents定量分析样品的前处理方法1定量分析方法的特点2药物分析方法的验证3Contents定量分析样品的前处理方法1定量分析方法的特点第一节药品分析方法的验证一.目的：证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求二.用途（一）药品质量标准起草时，分析方法需要经过验证。（二）药物合成方法变更、制剂组分变更、原分析方法进行修订时。第一节药品分析方法的验证一.目的：二.用途需验证的分析项目1.鉴别试验2.杂质定量或限度检查3.原料或制剂中有效成分含量测定4.制剂中其他成分（降解产物、防腐剂）的测定5.溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。需验证的分析项目四.验证内容精密度,准确度,检测限,专属性，定量限，线性、范围和耐用性四.验证内容（一）、准确度（accuracy）

系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。回收率(Recovery)回收试验法加样回收试验3×3，至少9个测定结果（一）、准确度（accuracy）系指用该方回收试验：空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为MR=M（平均）/A*100%

回收试验：空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值加样回收试验：已准确测定药物含量P的真是样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M加样回收试验：已准确测定药物含量P的真是样品+已知量A的对照数据要求：规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次数据要求：规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不二、精密度(Precision)系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之接近的程度。表示：偏差(d)、标准偏差(s)、相对标准偏差(RSD)重复性:

同一实验室,同一人多次测定的精密度中间精密度:

同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度

重现性:

不同实验室，不同人测定的精密度二、精密度(Precision)系指在规定的测试条件下，同一三、专属性(Specificity)

指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性。四、检测限(LimitofDetection,LOD)药物能被检出的最低浓度(µg/ml)1.非仪器分析目视法2.信噪比法一般以信噪比（S/N）3:1或2:1的相应浓度或注入量来确定检测限三、专属性(Specificity)指有其他成分（杂质、五、定量限(LimitofQuantitation,LOQ)药物能被定量测定的最低浓度(µg/ml)信噪比法

S/N=10五、定量限(LimitofQuantitation,L六、线性待测结果(响应值)与试样中被测物的浓度或量直接成正比关系的程度。

Y=a+bx（r=0.9999)六、线性待测结果(响应值)与试样中被测物的浓度或量直接成正比精密称取大黄素对照品约17.29mg,，置50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为大黄素对照品储备液。精密吸取储备液0.2、0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0mL分别置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件，分别进样10μl，记录峰面积，以峰面积(y)为纵坐标、大黄素浓度(x)为横坐标进行线性回归，得回归方程。Y=2.962106X－4.958103r=0.9999

结果表明大黄素溶液在6.92μg·mL-1~311μg·mL-1之间呈良好的线性关系。

精密称取大黄素对照品约17.29mg,，置50mL量瓶中标准曲线与线性范围6.412.819.225.63232.41.81.20.60茶碱(µg/ml)·····Y=9.56610-2X+6.15310-3

r=0.9995至少6个浓度点建立标准曲线线性范围必须覆盖全部待测浓度，不得外推最低浓度点偏差在±20%其余浓度点的偏差在±

15%。标准曲线与线性范围6.412.819.225.63232.七.范围达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。七.范围测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pH，商品柱的品牌，柱温等八、耐用性(Robustness)测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度八、耐用性(Robu①①已有重现性验证，不需验证中间精密度②如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充②③视具体情况予以验证③①①已有重现性验证，不需验证中间精密度②如一种方法不够专属，各种含量测定方法对效能指标的要求1.容量分析法

用原料药精制品(含量>99.5%)或对照品考察方法的精密度，RSD≤

0.2%

；回收率一般在99.7～100.3%之间。

2.UV法

用适当浓度的精制品进行测定，其RSD≤1%

。制剂的测定，回收率一般应在98～102％之间。3.HPLC法

要求RSD<2％，回收率98～102%之间。各种含量测定方法对效能指标的要求1.容量分析法第二节定量分析样品的前处理方法不经有机破坏经有机破坏直接测定配位滴定法氧化还原滴定法水解后测定碱水解酸水解经还原分解后测定湿法破坏——凯氏定氮法干法破坏高温灼烧法氧瓶燃烧法第二节定量分析样品的前处理方法不经有机破坏经有机破坏直接测一.含金属的有机药物分析(一)、结构分析富马酸亚铁邻二氮菲-硫酸铈滴定特点：药物中金属原子与药物连接的不牢固，在水溶液中可以离解成金属离子。1.金属原子不直接于碳原子相连或某些C-M键结合不牢固的有机金属药物。富马酸亚铁邻二氮菲-硫酸铈滴定1.金属原子不直接于碳原子2.金属直接和碳原子相连的有机金属药物特点：药物中金属原子与药物连接的牢固，需要进行有机破坏。2.金属直接和碳原子相连的有机金属药物特点：药物中金属原子与(二)、含量测定如富马酸亚铁含量测定1.含铁药物（溶解直接测定法）(二)、含量测定如富马酸亚铁含量测定1.含铁药物（溶解直接测第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件2.含锑药物（水解后测定法）如：葡萄糖酸锑钠2.含锑药物（水解后测定法）二、经有机破坏的分析方法

含氮、硫、硫柳汞、氯化钠的生物制品、含氮有机合成药物测定的前处理和生物制品中金属元素测定时生物基质的去除。H2SO4-HNO3H2SO4-HClO4H2SO4-H2SO4HNO3-KMnO4分解剂/消化剂辅助分解剂——凯氏定氮法测定含有氨基和酰胺结构的药物结构(一)湿法破坏二、经有机破坏的分析方法含氮、硫、硫柳汞、氯化钠原理将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子中有机结构被“消化”成CO2和H2O，有机结合的氮转化为无机氮，与过量的硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，经碱化后释放出氨气，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或碱滴定液滴定。常量法——含氮量25～30mg半微量法——含氮量

1.0～2.0mg原理将含氮药物与硫酸在凯氏烧瓶中共热，药物分子中有凯氏烧瓶K2SO4(提高消解温度)CuSO4(加快消解速度)硫酸碱液硼酸(吸收液)甲基红-溴甲酚绿指示剂硫酸滴定空白校正凯氏烧瓶K2SO4(提高消解温度)硫酸碱液硼酸(吸收液)硫酸(二)干法破坏1.高温灼烧法常用于含卤素、含磷药物和药物中砷盐的检查。常加入无水碳酸钠、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化。注意事项：（1）加热或灼烧时温度应控制在420摄氏度以下。（2）要灰化完全（3）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但不要轻易弃去。(二)干法破坏1.高温灼烧法常用于含卤素、含磷药物和药物中砷2.氧瓶燃烧法系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密闭的密闭的燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为CO2和H2O，待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，再根据其性质和存在方式选择方法进行分析。2.氧瓶燃烧法系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件第一节定量分析样品的前处理方法第一节定量分析样品的前处理方法操作方法①样品的准备

取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下端的网或螺旋处。

②燃烧瓶燃烧前的准备

用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速度地通入氧气1min,立即用表面皿覆盖瓶口。操作方法①样品的准备

取样品适量，精密称定后按③样品的燃烧点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，待燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量冲瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测定。③样品的燃烧④吸收液的选择④吸收液的选择⑤注意事项：（1）充氧气，使瓶内空气排尽（2）测定含氟有机药物时，用石英制燃烧瓶（3）铂丝燃烧时起催化作用（4）应同时做空白试验（5）燃烧时要注意防爆（6）燃烧要完全（7）燃烧产生的烟雾完全被吸收⑤注意事项：第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件2.在药物含量测定中的应用碘苯酯的含量测定

取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用NaOHT.S.2ml与H2O10ml为吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液10ml，密塞，振摇放置数分钟，加甲酸约1ml，用水洗涤瓶口，并通入空气流约3~5min，以除去剩余的溴蒸气，加KI2g，密塞，摇匀，用Na2S2O3液(0.02mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硫代钠液(0.02mol/L)相当于1.388mg的C19H29IO2。2.在药物含量测定中的应用取本品约20mg，精密称定，第三节定量分析方法的特点一.容量分析法将已知浓度的滴定液（标准物质溶液）由滴定管滴加到被测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物反应完全，然后根据滴定液的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系计算出被测药物的含量。适用范围：化学原料药的含量测定特点：方法简单仪器价格低廉、测定结果准确、方法耐用性高、方法专属性差第三节定量分析方法的特点一.容量分析法二.光谱分析法1.紫外可见分光光度法朗伯比尔定律2.荧光分析法物质受紫外光或可见光照射激发后能发射出比激发光波长长的荧光。当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定的时候，物质在一定浓度范围内，其荧光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系，可用来进行定量分析。二.光谱分析法特点：（1）灵敏度高，10-12~10-10g/ml（2）荧光自熄灭（3）对于容易被光分解的样品，为了避免因激发光多次照射而影响荧光强度，我们可以选择一种激发光的波长与它近似的而对光稳定的物质配成适当浓度的溶液，作为基准溶液。（4）采用荧光衍生化试剂，使没有荧光或者荧光比较弱的物质和一种荧光试剂发生反应，得到一个强的荧光产物，来提高分析方法的选择性。特点：三.色谱分析法1.HPLC法系统适用性试验：即用规定的对照品对色谱系统进行实验和条件①色谱柱的理论塔板数：在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或各种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间TR和半峰宽Wh/2,按n=5.54(tr/wh/2)2计算色谱柱的理论板数。三.色谱分析法②分离度（R）无论定性鉴别或定量分析，均要求待测峰与其人峰、内标峰或特定的杂货对照峰之间有较好的分离度。除另有规定外，定量分析时分离度应大于1.5。③重复性取各品种项下的对照常溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%。②分离度（R）④拖尾因子（T）为保证分离效果和测量精度，应检查待测峰的拖尾因子是否符合各品种项下的规定。除另有规定外，峰高法定量时T应在0.95~1.05之间。峰面积法测定时，T值偏离过大，也会影响小峰的检测和定量的准确度。④拖尾因子（T）测定法：

内标法加校正因子测定供试品中主成分含量

外标法测定供试品中主成分的含量①外标法：用标准品的峰面积或峰高与其对应的浓度做一条标准曲线,测出样品的峰面积或峰高,在标准曲线上查出其对应的浓度,这是最常用的一种定量方法。含量Cx=CR×(AX/AR)测定法：②内标法：精密称取药物对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液适量，混合配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积。校正因子（f）=(AS/CS)/(AR/CR)AS为内标物质的峰面积；AR为对照品的峰面积；CS为内标物质的浓度；CR为对照品的浓度含量Cx=f×(AX/（Aˊs/cˊs)

内标物质的峰面积和浓度②内标法：精密称取药物对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量内标法和外标法比较：1.内标法可避免因样品前处理和进样体积误差对结果的影响。2.外标法比较简单，但要求进样量准确且操作条件稳定。建议采用定量环满进样或自动进样器进样。内标法和外标法比较：四.含量测定计算1.原料药：实际百分含量上限：101.0%下限：98.5%、99.0%、99.5%2.制剂：标示百分含量95.0%---105.0%93.0%---107.0%90.0%---110.0%四.含量测定计算一.原料药含量测定方法（实际百分含量）W%=实际测得量/取样量*100%（一）.容量法W：取样量F：浓度校正因子T：滴定度T=C标*（b/a）*M测（每1ml标准溶液相当于待测物质的质量）一.原料药含量测定方法（实际百分含量）W：取样量F：浓滴定度：每1ml标准溶液相当于待测物质的质量T=C标*（a/b）*M测C标：滴定液的摩尔浓度（mol/l）a:被测药物的摩尔数b:滴定剂的摩尔数M：被测药物的摩尔质量（mg）滴定度：每1ml标准溶液相当于待测物质的质量1.碘量法测VC含量的时候，若VC的分子量为176.13，每1ml碘滴定液（0.1mol/l）相当于VC的质量为？1.碘量法测VC含量的时候，若VC的分子量为176.13，每第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件3.碘量法测定VC含量：取本品0.2000g，加新沸过的冷水100ml与稀HAC10ml使溶解，加淀粉指示液1ml,立即用碘滴定液（0.1mol/l）滴定至溶液显蓝色时，消耗20.00ml。已知VC分子量为176.12，求vc的百分含量。3.碘量法测定VC含量：取本品0.2000g，加新沸过的冷水W%=(1/2)×176.13×0.1×20×10-3/0.2000×100%W%=88.10%W%=(1/2)×176.13×0.1×20×10-W%=

（二）紫外法1.吸收系数法E1%1cm·100A*C样X100%实际测得样品浓度取样浓度（二）紫外法E1%1cm·100A*C样X100%实际测得样例.对乙酰氨基酚含量测定方法为：取本品约40mg，精密称定，置250ml量瓶中，加0.4%NaOH溶液50ml溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%NaOH溶液10ml，加水至刻度，摇匀，照分光光度法，在257nm波长处测定吸收度，按C8H9NO2的吸收系数为715计算，即得，若样品的称样量为m(g),测得的吸收度为A，则含量百分率就算公式为：A.

B.C.D.例.对乙酰氨基酚含量测定方法为：取本品约40mg，精密称定，W%=

×100%

A样*C对*M样A对*C样*M对（二）紫外法2.对照品比较法A样*C对*M样A对*C样*M对（二）紫外法例：取注射用的硫喷妥钠(C11H17N2NaO2S=264.33)的含量测定：精密称定内容物0.2658g，加水稀释至500ml，摇匀，取此液1ml,稀释成100ml，作为样品溶液，另取硫喷妥(C11H18N2O2S=242.33)对照品，制成每1ml中含有5.05ug的溶液，在304nm的波长处分别测定吸收度，测得样品液的吸收度为0.446，对照液体的吸收度为0.477，计算本品的百分含量。（96.9%）例：取注射用的硫喷妥钠(C11H17N2NaO2S=264.第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件二.制剂（标示百分含量）（一）片剂S%=测得量（g/片）/标示量（g/片）*100%

1.容量法二.制剂（标示百分含量）第五章药物定量分析与分析方法的验证新课件100.3%100.3%二.注射剂S%=测的量（g/ml）/标示量（g/ml）*100%1.容量法标示量二.注射剂标示量2.紫外法（1）吸收系数法稀释倍数标示量2.紫外法稀释倍数标示量例：精密量取醋酸可的松溶液2.0ml，置100ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密量取2.0ml，置另一100ml量瓶中，加无水乙醇至度，于210nm处测A=0.395，计算它的标示百分含量，规格：125mg/5ml。E1%1cm=395。例：精密量取醋酸可的松溶液2.0ml，置100ml量瓶100.0%100.0%（2）对照品比较法S%=【（A测*C对）/（A对*C取样）】*100%（2）对照品比较法例：醋酸地塞米松注射液的含量测定：精密称定醋酸地塞米松对照品25.3mg，加无水乙醇溶解并稀释至100ml,摇匀，即可得对照品溶液；另精密量取本品适量（相当于醋酸地塞米松25