维生素E的检测方法

维生素E的检测方法维牛素E络构中具冇游禽的酚梵基•町以被强氧化剂筑化井昭色*通过比色法即可测定维生索E含黒常用的筑化剂有FeCh.CuCh⑦其还原产物Fe2\Cf可均不同的显色剂反应生成络合物井通过比色测定比色袪操柞简单，分析成本低，设备要求不高，但捷反应灵敏度低，給果精确度较是.紫外光谱法刪利用堆生索E結构中的苯环以披共牠双谨体系在紫外朮谱中”有吸收峰的特点，可以使用紫外光谱法测定维牛素E含星。侣是紫外法测定容易受到杂质干扰，对待测样品纯度要求较為，因此在实际应用中限制较大。H前在维牛素E标准品含虽标定中经常应用此方法。荧光法2")荧光法同样利用维生素E结构中的苯环以及共辘双键体系以及该体系中的离域兀电子可以被激发的特点。样品经过提取、皂化、纯化等前处理后使用适当的激发波长检测波长即可较申确的测定样品中维生素E含戢.与比色法以及紫外法相比，荧光法灵敏度高，特异性强，受杂质干扰也较小，检测结果也更加精确。因此在现代色谱技术未大屋应用前一直是维牛•素E检测使用的主要方法。电化学法"均VE结构中的酚疑基可以在碳和笛金电极上被不可逆氧化，利用其氧化过程产生的氧化还原电势即可以测定VE含虽。使用电化学法测定VE含星反应的灵敏度都很高，分析浓度范囤宽，检出限低，样品分析时间也较高效液相色谱法快速。气相色谱法(GC)z在液相色谱技术发展之前气相色谱法一直是测定VE含量的主要方法。气相色谱法将样品中的生育酚转化为醋酸酯或者三甲棊硅烷化衍生物，然麻测定英中的衍生物含堀。气相色谱法粘确度，灵敏度髙，适用性也较广，但是仍然无法有效的测定维生素E的各种异构体。液相色谱法(HPLC)g液相色谱法是口前应用放广泛的测定VE的方法。具有灵敏度高，分离效果显爭，重现性好等优点。依据待测样品不同，可以选择不同的检测器，色谱柱，流动相以达到不同的分离效果以及灵敏度要求。VE检测中常用的检测器旳紫外检测器(UV),荧光检测器(FL),电化学检测器(ECD)等。HPLC法有正相(NP)和反相(RP)两类，均可应用于VE检测，各有特点。正相法主喪应用于在VE界构体分离测定方面，反相法则由于其色谱柱稳定保阳时间短，匝现性好闻被广泛应用。1・4婴幼儿乳粉中维生素E检测方法研究50■⑷维生素E检测方法很多，包括紫外分光光度法，液相色谱法，气相色谱法等等1羽。目前较为常用的乳制品中维生素E检测方法为液相色谱法，其中由于提取方法以及流动相选择不同乂分为止相色谱反相色谱两种。国内以及国际检测标准中主要采用的是反相色谱的方法。1.4.1反相高效液相色谱利用反相色谱检测婴幼儿乳粉中维生索E含量的方法对仪器要求较低，并且可以同时检测乳粉中务种维生索含量的优点，但是同时也有前处理II杂，检测粘确度不高的缺点。其主耍测试原理为：乳粉中维生素E主耍以a•生育酚以及ct-生帀酚酣酸酯的形式存在，皂化过程使a・生育酚醋酸酯转化为a・生冇酚。使用石油赵将a•生育酚从庭化液中萃取出Z応将溶解丁•甲醇。利用C.gtt,甲醇流动相，UV检测器即可检测其中a・生育酚总量驹o此方法可以同时检测婴幼儿乳粉中维生索A、D、E二种维生索而被广泛用于乳粉屮a■生育酚含债的「I常檢測。但是在实验过程中维生索EE要以a・生育酚形式存在，而a・生询酚对光，热，氧气均比较敏感，因此在实验过程中具有…定的损失，同时所得到的实脸结果不能克观的反应乳粉屮生育酚异构体及其脂类含虽纽成。囚此仅仅适用丁日常检测而不适用于科研空试验。正相高效液相色谱国外科研型试验中多采用止相高效液相色谱的方法提取维生素E,提取检测方法多样，各白有其不同优点。N.Rodrigo,A.Alegria等使用：氧化硅柱(150mmx3.9mm,5pm),正己烷：乙酸乙耶-98:2为流动相，荧光檢测器可同时检测缨幼儿乳粉屮a■生仃酚醋酸酯,a•生育酚，丫•生介酚，&生育酚。样絡不经过皂化，溶解后经舗仿：甲醇=2:1提収，离心，収有机层吹干，溶解于正己烷。经荧光检测器在激发波长295nm检测波长330nm下检测。此方法可以简单快速的分析婴幼儿乳粉中的几种具冇较强生育酚活性的界构体含呈，冋时具有较高的检测精度【切。JorgeL.Chavcz-Scrvin,AnaI.Castcllote等利用：极管阵列检测器全波长扫推的特性，使用二氧化硅柱(50mmx2.1mm,3|im),正己烷：乙酸乙38-100:0.5为流动相，二极管阵列检测器可同时检测婴幼儿乳粉中a•生冇酚醋酸ffi(284nm),a-生育酚(296nm),丫・生育酚(296nm),&生育酚(296nm),视黄醇酪酸酯(326run),视黄醇棕稠酸ffi(326nm)o样品经过乙醇提取后使用止己烷萃取，将萃取液吹干后使用止己烷溶解，经二极管阵列检测器检测。此方法各种待测物星终回收率均能在95%-105%之间，前处理方法简瞅的同时具有一定的检测精度2叫以上两种正相色谱方法山于其使用的检测器不同而有各种不同的优势，荧光检测器检测结果爪确件较高同时对设备要求较低，而二极管阵列检测器可以方便快速的同吋检测生疗酚，视页醇及其多和异构体以及酣类。1.5婴幼儿乳粉中维生素E稳定性由于生育酚的游离酚式羟基易产生化学反应生成酿”罠生育酚在乳粉生产储疗过程中极易氧化变性，特别是是在冇氧，金属离子和紫外线照射条件下极易被氧化而丧失其抗氧化功能。而生育酚醋酸酣相对生育酚來讲则貝冇较好的稳定性，在氣气，紫外线条件下均能保证较低的解离程度冋)。在婴幼儿乳粉中，由于生产工艺，储藏条件不同生育酚以及生育酚酣酸弗乂冇其不同的稳定性农现。一殷來说，生育酚醐酸酯基本保持稳定，而生育酚及其异构休则有不同程度的损失。储藏温度EstherMiquela,AmparoAlegria等人研究农明添加a・生育酚酯酸酣的样品在22-C,37'C下密封储存17个月后a•生冇酚醋酸酯总毎均基本保持不变。而添加生存酚的样品在22C37C卜密封储藏17个月后生育酚总量损火分别为53.8%,60.7%⑶、人将牛奶样品分别储存在4*C,-20*C.-80-C之下，其中4匸储存96小时后牛奶中a•生育酚损失率为25%,而在・20•C,・8(TC下储存12个丿J以后牛奶中生育酚含就未发生明显变化⑹储存时间由丁乳粉生产配方不同,不同乳粉在其货架期（18个月）内稳定性表现不同，JorgeL.Chavez-Servin,AnaI.Castellote等测定25*C卜婴儿乳粉经过18个月保存后乳粉中牛育酚当量损失率在20%左右，而即使在打开包装后25C下婴儿乳粉经过两个月保存生育酚当疑损失率也仅仅在10%左右*叭1.5.3金属离子婴幼儿乳粉中添加的铁抹能够促进生育酚氧化，而添加铁盐种类不同对维生索E稳定性影响不同，Chivcz・Servfn,AnaI.Castellote等人研究表明添加乳酸盐的样品丫椁酚稳定性比添加硫酸盐的样品史好。添加不同铁盐的样品中生育酚醋酸酯含圮均能保持稳定（列来源以及存在形式婴幼儿乳粉屮维生素E来源主耍有三个：牛奶，植物油以及生产过程小添加的营养强化剂，不冋种类的槓物油中生育酚并构体含呆比例不同【旳，而营养强化剂屮则以牛育酚酷酸酯形式存在，一般来讲，经过12・17个月储诫后，婴幼儿乳粉中维生索E总帘:均能保证在较满意的程度，但绘由于貝有最强生冇酚活性的a・竺育酚损失鼠较人，根据乳粉配方