常用培养基的制备

关于常用培养基的制备第一页，共十五页，2022年，8月28日熟悉培养基制备的基本程序会制备常用的培养基

实训目标高压蒸气灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、量筒、漏斗、试管、培养皿、烧杯、三角烧瓶、等仪器材料第二页，共十五页，2022年，8月28日方法步骤（一）肉汤培养基（二）琼脂培养基（三）半固体培养基（四）血液琼脂培养基第三页，共十五页，2022年，8月28日制备培养基方法步骤计算称量溶化调PH分装灭菌无菌检验备用（一）肉汤培养基（二）琼脂培养基（三）半固体培养基（四）血液琼脂培养基第四页，共十五页，2022年，8月28日（一）肉汤培养基1．成分牛肉膏3～5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。2．制法将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加蒸馏水后，加热溶解。矫正pH至7.4～7.6，过滤分装。置高压蒸气灭菌器内，121.3℃灭菌20min即成。3．用途可供一般细菌生长，同时也是制作一般培养基的基础原料。供营养要求较高的细菌分离培养，亦可供溶血性的观察和保存菌种。第五页，共十五页，2022年，8月28日（二）固体琼脂培养基

1．计算：

1000ml蒸馏水中应加营养琼脂粉31.3g，再根据培养基的需要量确定营养琼脂粉的用量。营养琼脂粉的量=31.3×15×n/1000（g）其中：

15代表一个平板需要营养琼脂约15ml；

n代表要做的培养基平板的数量第六页，共十五页，2022年，8月28日2．称量：用普通天平准确称量出营养琼脂粉的量，用量筒量出相应的蒸馏水的量，要尽量准确。第七页，共十五页，2022年，8月28日3．溶化：将营养琼脂粉和蒸馏水倒入搪瓷缸中，于电炉上加热溶化，边加热边搅拌，沸腾时立即从电炉上拿下，等泡沫消失后再放在电炉上加热，注意不能让琼脂溢出，煮沸2—3次。第八页，共十五页，2022年，8月28日4．分装：倒平板或倒试管若做平板培养基应倒于培养皿中，每板约15ml左右，以刚好覆盖平皿底为易。若做斜面培养基应倒入试管中，量为试管的1/3第九页，共十五页，2022年，8月28日包扎：

加塞后，试管通常每7支一起，包上一层牛皮纸或两层报纸，用线绳扎紧。三角瓶加塞后也用牛皮纸包扎。

以活结形式扎紧，以便使用时容易解开。

用记号笔注明培养基名称、配制日期、配制人或实验组。灭菌时包牛皮纸第十页，共十五页，2022年，8月28日5．灭菌：用高压灭菌器灭菌包扎好，直立放入内筒中，在121.3℃灭菌20-30min。灭菌完毕后，将平板培养基拿出平放于桌面，凝固前勿动；将试管培养基摆成斜面，凝固前勿动。第十一页，共十五页，2022年，8月28日6．无菌检验：随机抽取几个平板或试管培养基于温箱中培养24小时，若无菌生长则为合格。7．备用：将合格的培养基放入冰箱，在0-4℃中保存备用。第十二页，共十五页，2022年，8月28日（三）半固体培养基肉汤培养基中加入0.3%～0.5%琼脂粉制成，用于菌种的保存或观察细菌的运动性。第十三页，共十五页，2022年，8月28日（四）血液琼脂培养基将灭菌的营养琼脂冷至45～50℃，以无菌操作，加入5%～10%的无菌血