小鼠ⅲ型胶原coliiielisa试剂盒说明书模板

小鼠皿型胶原（ColIII）酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号:E-EL-M0316（本试剂盒仅供体外研究使用、 不用于临床诊断!)声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISAkit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、 血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组ColIII浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分 ！如有疑问,请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。试剂盒组成名称-中文名称-英文规格保存条件ELISA酶标板MicroELISAPlate8X12/86X4°C冻干标准品ReferenceStandard2/1支*4C标准品&样品稀释液ReferenceStandard&SampleDiluent1瓶20mL/12mL*4C浓缩生物素化抗体ConcentratedBiotinylatedDetectionAb1支120gL/70丄*4C生物素化抗体稀释液DiluentforBiotinylatedDetectionAb1瓶10mL/6mL*4C浓缩HRP酶结合物ConcentratedHRPConjugate1支120此/70丄*4C（避光）酶结合物稀释液DiluentforHRPConjugate1瓶10mL/6mL*4C浓缩洗涤液（25芥ConcentratedWashBuffer(25)x1瓶30mL/16mL*4C底物溶液（TMB）SubstrateReagent1瓶10mL/6mL*4C（避光）反应终止液StopSolution1瓶10mL/6mL*4C圭寸板覆膜PlateSealer5/3张*产品说明书ProductDescription1份:[96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整 ）检测原理：本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠ColIII抗体包被于酶标板上,实验时标本或标准品中的ColIII会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠 ColIII抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠ColIII抗体与结合在包被抗体上的小鼠 ColIII结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物 ，游离的成分被洗去。加入显色底物（TMB）,TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色 ，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，ColIII浓度与OD45o值之间呈正比，经过绘制标准曲线求出标本中 ColIII的浓度。标本收集：血清：全血标本于室温放置2小时或4C过夜后于1000为离心20分钟,取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原 ，无内毒素试管。血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2,标本采集后30分钟内于1000>g离心15分钟,取上清即可检测。避免使用溶血 ,高血脂标本。组织匀浆：用预冷的PBS（0.01M,pH=7.4）冲洗组织,以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果）,称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,能够对匀浆液进行超声破碎,或重复冻融。最后将匀浆液于5000>g离心5~10分钟,取上清检测。细胞培养上清：取细胞培养上清于1000>离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测（具体处理方法可参考：）标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。标本收集后若不及时检测 ，请按一次使用量分装，冻存于-20C/-80°C冰箱内，避免重复冻融，1-6月内检测,4C保存的应在1周内进行检测。如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值 ，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。试验所需自备物品：酶标仪（450nm波长滤光片）高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10让,2-20也20-200让，200-1000山37°C恒温箱，双蒸水或去离子水吸水纸检测前准备工作：请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。将浓缩洗涤液用双蒸水稀释（1:25）。未用完的放回4C。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40C水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液 （加热温度不要超过50C,使用时洗涤液应为室温）。标准品：加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，静置10分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀（浓度为1000ng/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释 ）。建议配制成以下浓度：1000、500、250、125、62.5、31.25、15.63、0ng/mL,样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制500ng/mL标准品：取0.5mL1000ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100山/孔计），实际配制时应多配制100-200此。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体 （1:100）成工作浓度。当日使用。酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100gL/孔计）,实际配制时应多配制 100-200o使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物（1:100）成工作浓度。当日使用。标准品稀释方法图例：（以500山/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200gL/管）1000 500 250 125 62.5 31.25 15.63 0 ng/mL洗涤方法:自动洗板机：每孔加入洗涤液350gL,注入与吸出间隔60秒。手工洗板:甩尽孔内液体,在洁净的吸水纸上拍干,每孔加洗涤液350gL,浸泡1-2分钟,吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体,在厚的吸水纸上拍干。操作步骤：实验开始前,各试剂均应平衡至室温;试剂或样品配制时,均需充分混匀,并尽量避免起泡。加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100gL,余孔分别加标准品或待测样品 100gL,注意不要有气泡,加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37C孵育90分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。弃去液体,甩干,不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液100山（在使用前15分钟内配制），酶标板加上覆膜，37C温育1小时。弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约350gL/每孔,甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。每孔加酶结合物工作液（临用前15分钟内配制）100gL,加上覆膜,37C温育30分钟。弃去孔内液体,甩干,洗板5次,方法同步骤3。每孔加底物溶液（TMB）100也酶标板加上覆膜37C避光孵育15分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长,但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时,即可终止）。每孔加终止液50也终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（OD值）。应提前打开酶标仪电源,预热仪器,设置好检测程序。实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。注意事项:保存:试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程