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文档简介
激光捕获显微切割技术
LaserMicro-Dissection(LMD)DefinitionofLMD显微镜下用手工或仪器采样的方法从组织切片或细胞涂片上将所要研究的形态或表型相同的细胞从组织三维构造中分离出来,获得纯的细胞群(purecellpopulation),以备进一步作分子水平的研究。显微切割技术的贡献就是克服了组织的细胞成分非常繁杂这一重大的缺点。Lasercapturemicrodissection
TheHistoryofLMD1965,BaxterTJ,肾小管1990‘s,紫外激光切割超薄膜上的组织1996,NIH,红外激光光源,转运膜技术美国Arcturus公司:热塑膜德国PALM公司:激光脉冲所产生的压力WeaknessofLMD用仪器和耗材昂贵;QIAGEN染色时对后续反应可能有影响;对涂片的要求比较苛刻等。UseOfLMDCancer肿瘤基因突变检测肿瘤特异基因表达分析杂和性丢失检测微卫星序列不稳定性分析新基因发现核酸及蛋白质的定量研究染色体畸变分析细胞局部病变病因学PathologyandForensic
组织切片冰冻切片检验。法医学中的各种细胞涂片,目前常见的法医物证检材如液体类(精液、血液、唾液、精阴混和液)、斑迹类(精斑,血斑,唾液斑,混和斑等)等NotetheuseofLCM
DNA分析基因组DNA时,细胞越大,则需要切割更多的细胞,才能保证包含细胞的全部基因组保持基因组的相对完整性,避免在样品处理过程中造成DNA的降解和断裂RNA建议样本使用冰冻组织块,同时用Trizol法抽提原始组织样本RNA,鉴定样本降解情况,确保样本质量。常规HE染色,伊红和苏木精配好后用DEPCProtein可以根据需要制备总蛋白,或膜蛋白,或核蛋白等,也可以富集糖蛋白通过去除白蛋白来减少蛋白质类型的复杂程度。WorkfashionofLeicaLMD6000重力掉落方式,掉落到指定的PCR(RT-PCR)盖子上组织:石蜡切片/冰冻切片/活细胞LMD专用SmartCutUVI-镜头:6.3x,10x,20x,40x,63x,100x.150xCollectiontubeA/B/C/D四个收集孔,管盖固定在收集孔上SpecialGlassslide含热塑膜特制玻片,成本约40元/片Cuttingofparaffinsection石蜡包埋HE染色Multiplecuttingofbrainsection连续切割容易出现切割不下来,需要手动辅助LivingcellcuttingofLMD6000荧光显微镜下切割活细胞Annotation:
Howtopreparefrozensection1.取材:取新鲜的组织。2.固定:组织固定于10%中性福尔马林,冰冻切片。3.切片:利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度,调整切片角度,安装切片刀。将样品放到样品托上,利用包埋剂固定,放到冷台上冷冻,在即将完成冷透前用热交换装置压平
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