不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白

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不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白一、实验目的1．掌握凝胶电泳的三个效应。2．了解该电泳的特点及适用范围。第1页/共8页二、基本原理讲解聚丙烯酰胺凝胶电泳的三种效应：

1、浓缩效应。

2、电荷效应。

3、分子筛效应。第2页/共8页三、实验原理

本实验利用聚丙烯酰胺凝胶作电泳支持物。电荷数和分子大小不一的各种血清蛋白质通过浓缩效应、电荷效应、分子筛效应而被精细地分离。由于具有以上三种效应，所以此方法分离效果好，分辨率高，血清蛋白在纸上电泳仅能分成5～7个组分，而在聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳中可分出12～30个组分。第3页/共8页四、实验材料

1．圆盘电泳槽。2．电泳仪。3．玻璃管（10×0.6cm）。4．50μl微量注射器、5ml注射器。5．10cm长的局麻针头，10号针头。6．试剂第4页/共8页五、实验方法（一）凝胶柱的制备

1．凝胶玻璃管的准备

2．分离胶的制备

3．浓缩胶的制备

4.装柱第5页/共8页(二)加样(三)电泳(四)剥胶(五)固定和染色(六)漂洗第6页/共8页六、注意事项

1．丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺是神经毒性试剂，并对皮肤有刺激作用，注意避免直接接触。大量操作时应在通风橱中进行。

2．丙稀酰胺和甲叉双丙烯酰胺溶液应装在棕色瓶中，置冰箱内（4℃）保存。可贮存1～2个月。测定pH（4.9～5.2）可检查其是否失效，失效不能聚合。

3．TEMED要密封保存，过硫酸铵溶液最好当天配制，以防止氧化失效。

4．凝胶的聚合速度与温度关系很大，温度低时，聚合速度减慢，必须根据实验时的温度调整3号、4号试剂的用量，以使凝胶在30min内聚合。第7页/共8页

实验思考1、解释聚丙烯酰胺凝胶电泳的

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