DNA甲基化与肿瘤

DNA甲基化与肿瘤DNA甲基化（DNAmethylation）是指在DNA甲基化转移酶（DNMT）催化下，以S-DNA哺DNA甲基化多发生在CpG二核苷酸中的胞嘧啶的5DNA甲基化是一种表观（epigenetic）修饰，它在不改变DNA序列的情况下，对个体的生长、发育、基因表达模式以及基因组的稳定性起到重要的调控作用，并且这种修饰在发育和肿瘤DNA甲基化的变化表现在基因组总体甲基化水平的降低和某一些基因启动子区域CpG岛甲基化水平的升高：抑癌基因和DNA修复基因的甲基化使得抑癌基因沉默和修复基因失活，因而对于肿瘤的抑制作用丧失，同时基因损伤增加；而基因组总体甲基化水平的降低，使原癌基因和反转录转座子活化，染色体稳定性下降。高甲基化抑癌基因高甲基化正常细胞中，由于抑癌基因处于较高的转录表达水平，因而维持了细胞的正常状态。但在肿瘤细胞中，抑癌基因启动子区域的CpGCpG岛甲基化最在发现于Rb基因（retinoblastoma,视网膜母细胞瘤），此后在肿瘤细胞中陆续发现一些细胞周期调控相关蛋白（p16INK4a、p15INK4a、p14ARF、RASSF1A等）基因（DAPK、TMS1等）等的高甲基化现象。其中p16p53RASSF1A等在多种肿瘤细胞中均表现为高甲基化状态，而其他某些基因仅在特定的肿瘤细胞中维持高甲基化。DNA修复基因高甲基化DNA错配修复系统（mismatchrepairsystem,MMR ）是在人类细胞中存在的一种修复DNA碱基错配的自身保障体系由一系列特异修复DNA错配的酶组成它不同于其它抑制基因对细胞的无序增长具有直接的作用，而是通过修复DNA复制过程中产生的错误维持基因组的稳定性避免突变间接抑制肿瘤的发生目前已发现人类的MMR系统含有9个错配修复基因，其中以hMLH1和hMSH2 功能最为重要MMR基因保证了DNA复制的高度保真一旦MMR基因发生突变或启动子甲基化引起错配修复基失活，导致机体错配修复功能的降低，进而导致整个基因组的不稳定，从而使某些癌基因和抑癌基因的突变在体内得到快速聚集，肿瘤由此发生，表现为肿瘤细胞的DNA多为二倍体或近二倍体的含量。MMR基因启动子高甲基化在结直肠癌、胃癌、脑胶质瘤等肿瘤细胞中均有报道。表1常见的被甲基化抑癌基因与修复基因及其部分相关肿瘤启动子CpGDNADNA甲基化使其更易与转录抑制蛋白结合，使该基因转录失活；3)CpG岛使其招募组蛋白脱乙酰酶(HDAC)影响基因转录。低甲基化原癌基因激活正常细胞中，由于甲基化作用原癌基因多处于沉默状态，但在多种肿瘤细胞中，均发现原癌基因处于低甲基化状态，并且低甲基化状态与其蛋白表达升高密切相关，表明低甲基化状态可使原癌基因激活。转座子活化转座子是可移动的基因序列，包括LINE-1、HERV-K等，在人类基因组中含量丰富，正常情况下处于被甲基化状态而转录沉默。而在肿瘤细胞中，由于基因组总体甲基化水平的降低，这些序列也因去甲基化而活化，转移位置导致基因片段的插入和缺失。诱导染色体不稳定性ofheterozygosis,LOH），2003年刊登的3篇论著认为这可能是导致肿瘤发生的原因之一。DNA甲基化导致基因突变基因突变普遍存在于生物体细胞中，但在正常情况下，基因突变发生的频率非常低，在肿瘤细胞中，基因突变发生的频率大大提高。肿瘤细胞中由于DNA甲基化的位点多在CpG岛胞嘧啶，甲基化的5-mCpG 二核苷酸中的5-mC能以较高的速率脱氨基转换成T，所以该位点是基因突变的常见位点。miRNA的超甲基化肿瘤细胞另一个重要的特点是miRNA表达水平的整体下降，通常也是由于miRNA启动子区域高甲基化造成的。这种miRNA肿瘤的转移密切相关。如肿瘤细胞中miR-148a、miR-34b/c、miR-9这三种miRNA都发生了明显得超甲基化，同时外源表达这三种miRNA均可抑制肿瘤细胞的生长和转移。肿瘤发生是一个涉及多基因、多步骤的复杂过程，越来越多的研究表明DNA甲基化在肿瘤的发生、发展、转移中起到了重要的作用，特征性甲基化位点对于肿瘤的诊断、分型、预后及治疗具有重要意义。甲基化与肿瘤侵袭和转移DNADNA甲基化（DNAmethylation）DNA甲基化转移酶（DNMT）S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体，将活性甲基转移至DNA链中特定碱基上的化学修饰过程。哺乳甲基化多发生在CpG5DNA甲基化是一种表观（epigeneticDNA基因表达模式以及基因组的稳定性起到重要的调控作用细胞癌变有着密切的联系。有很多方面和DNA甲基化相关。上皮-间质转化（epithelialmesenchymal上皮-间质转化（epithelialmesenchymaltransition,EMT）指上皮细胞向间质细胞转EMTEMT时上皮（EMT随着人们对人体肿瘤和实验动物模型的观察越来越深入，发现EMT过程与肿瘤发生过程密切EMT（invasionmetastaticdissemination）以及药物耐受等都有关系EMT（mesenchymalepithelialtransition,MET）过程则似乎是在肿瘤细胞播散之后形成转移灶过程中起到重要作用。DNA甲基化在肿瘤转移过程中发挥着重要作用DNA甲基化在肿瘤转移过程中发挥着重要作用EMT的转录DNA甲基转移酶（methyltransferase）5-氮杂胞苷）处理MCF-7EMT过程相关的促细胞侵袭基因（pro-invasiveEMT-associatedgene）表达上调，DNA甲基转移酶抑制剂来治疗肿瘤固然可能抑制原癌基因的表达，但也可能造成肿瘤细胞转移播散增加的风险。（E-cadherinCDH-1表达的下调或沉默可导致细胞间E-cadherin下调的因素之一就是其启动子区域CpG岛的超甲基化。肿瘤细胞突破血管内皮及基底膜进入血循环是肿瘤细胞侵袭和转移的重要步骤。基底膜组成肿瘤细胞突破血管内皮及基底膜进入血循环是肿瘤细胞侵袭和转移的重要步骤。基底膜组成蛋白Nidogen的缺失将严重影响基底膜的完整性，有利于肿瘤细胞顺利通过进入血循环进平，而在正常细胞中却极少或没有发生甲基化。另外，某些另外，某些miRNA（MiR-148a、miR-34b/c、miR-9）能够起到抑制肿瘤细胞生长和转移的作用，而在肿瘤细胞中，这些miRNA通常由于发生超甲基化而沉默。甲基化与肿瘤治疗DNADNA甲基化（DNAmethylation）DNA甲基化转移酶（DNMT）S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体，将活性甲基转移至DNA链中特定碱基上的化学修饰过程。哺乳甲基化多发生在CpG5DNA甲基化是一种表观（epigeneticDNA异常甲基化与肿瘤的发生、发展、细胞癌变有着密切的联系。DNA甲基化在肿瘤中的作用主要表现在以下几个方面DNA甲基化在肿瘤中的作用主要表现在以下几个方面CpG岛二核苷酸中的胞嘧啶以较高的频率脱氨基变成胸腺嘧啶，造成碱基突变；二是抑癌基因和DNA修复基因逆的，因此可以甲基化位点为靶点，靶向用药进行肿瘤的预防、治疗。肿瘤预防和治疗的一个手段是通过去甲基化恢复某些关键的抑癌基因或DNA修复基因的活肿瘤预防和治疗的一个手段是通过去甲基化恢复某些关键的抑癌基因或DNA修复基因的活性，目前研究最多的是DNMTs抑制剂，它通过抑制DNMT 活性以逆转异常的DNA甲化。第一个表型修饰药物为5-azacytidine及其类似物5-aza-2'-deoxycytidine5-aza-CdR，这类药物已经美国FDA批准用于白血病前骨髓增生异常综合征的治疗。5-aza-CdR降低DNADNA复制过程中可以掺入到DNA接收甲基的能力，另一方面它抑制DNMT活性，导致DNA链中，一方面它可以甲基化水平的降低。体外和体内试验均表明，5-aza-CdR具有降低超甲基化的抑癌基因甲基化水平从而抑制肿5-aza-CdRIV期小细胞肺癌患者生存率，但该药也（5-aza-CdR可能诱发肿瘤的转移研究表明，低剂量的As2O3可起到治疗肝癌的目的。相比于上述手段更为有效的策略是针对肿瘤相关癌基因启动子低甲基化而进行的靶向甲基化治疗，包相比于上述手段更为有效的策略是针对肿瘤相关癌基因启动子低甲基化而进行的靶向甲基化治疗，包括DNA和RNA介导的甲基化治疗1介导的DNA甲基化最适底物为带复制叉样结构的半甲基化DNA，据此Yao等设计了一段22nt的甲基化脱氧寡核苷酸MON1，MON1 可以诱导IGF2启动子区域特定的胞嘧啶发生甲基化，体外实验证明其可抑制裸鼠肝脏肿瘤细胞生长，延长荷裸鼠存活期2介导的DNA甲基化：双链RNA可以介导启动子区域DNA甲基化，从而抑制基因的转录表达。针对癌基因启动区域人工设计一段双链RNA分子，便可招募DNMT 转移甲基使癌基因沉默，抑制肿瘤胞增殖，这一机制在乳腺癌病例中已得到验证。另外，还可以通过人工介导上胞增殖，这一机制在乳腺癌病例中已得到验证。另外，还可以通过人工介导上调DNMT 或抑制DNA去甲基化酶实现肿瘤的甲基化治疗。目前，针对肿瘤的甲基化治疗出现不久，但已展现出良好的应用前景，针对这一领域的深入目前，针对肿瘤的甲基化治疗出现不久，但已展现出良好的应用前景，针对这一领域的深入研究有望为临床预防和治疗提供高效低毒的抗肿瘤药物。DNA甲基化作为肿瘤生物标志物目前对于早期肿瘤患者，通过靶向治疗等手段，可以显著延长其寿命，但对于晚期恶性肿瘤目前对于早期肿瘤患者，通过靶向治疗等手段，可以显著延长其寿命，但对于晚期恶性肿瘤DNA甲基化目前已成为多种肿瘤诊断和预后的生物标志物。DNADNA甲基化（DNAmethylation）DNA甲基化转移酶（DNMT）S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体，将活性甲基转移至DNA链中特定碱基上的化学修饰过程。哺乳甲基化多发生在CpG5DNA甲基化是一种表观（epigeneticDNA基因表达模式以及基因组的稳定性起到重要的调控作用。DNA甲基化在肿瘤中的作用主要表现在以下几个方面DNA甲基化在肿瘤中的作用主要表现在以下几个方面CpG岛二核苷酸中的胞嘧啶以较高的频率脱氨基变成胸腺嘧啶，造成基因突变；二是抑癌基因和DNA修复基因DNA总体甲基化水平（即甲基化谱）和特定基因甲基化程度改变可作为肿瘤诊断指标。RNA和蛋白质是目前研究最多的两类生物标志物，miRNARNA和蛋白质是目前研究最多的两类生物标志物，miRNA也被认为可用于肿瘤的诊断分RNA和蛋白质与DNA相比其稳定性差，分离纯化也相对困难，并且此类生物标志物用于定性分析易受到样本遗传背景的干扰。作