肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会课件

常见肝病的病理形态特点及免疫组化染色的几点体会

肝穿刺标本检查和处理原则1.肉眼观察肝穿刺标本呈完整园柱状，长度1－3cm典型的慢性肝炎肝纤维化标本呈竹节状外观肝硬化的穿刺标本，呈不规则碎块2.石蜡切片每张玻片上应放置超过6个连续组织切片，有助于肝纤维化的病理诊断。④Dm-HSC⑤α-SMA-MFb

Dmα-SMAS1S2S3S4各种病因引起肝纤维的病理学特点及分期1.慢性肝炎肝纤维化(Dr.Scheuer方案）活动性纤维间隔静止性纤维间隔脂肪性肝病肝纤维化穿刺肝组织呈淡黄色，标本悬浮于固定液

小叶中央区纤维化窦周纤维化4.Wilson病红氨酸(Rubeanicacid)染色,铜被染成深绿色6.自身免疫性肝炎肝纤维化（AIH）

门管区肝细胞呈花环状排列HepaticRosette，表现为数个水样变性的肝细胞被炎症细胞和塌陷的网状支架包绕成花环状结构。8.血吸虫性肝纤维化

肝癌(LIVERCANCER)HCCICCCombinedhepatocellularandcholangiocarcinoma肝癌病理诊断常用免疫组化和特染HepPar1线粒体相关抗原，与AFP无关对胎儿和成人肝细胞高度特异(HCC:阳性率82-97%）

AFPHCC阳性率：15-82%CD34:HCC型染色长条分枝，管壁纤细，管腔狭窄，分布均匀弥漫.而非癌肝组织内极少见.CK19:胆管型CK:CK19,CK7肝细胞－胆管上皮，ICC：77-100%ICC最好的标志物CEA：monoclonalCEA:毛细胆管－ICC，转移性肝癌：60-75%+HCC:0-11%+polyclonalCEA:毛细胆管＋HCC特异标志物之一

MOC31:抗人上皮相关抗原

转移性腺癌：100%+ICC:92.9%+HCC:0%+胃癌肝转移HBsAg:HCC:70-80%+胞质型，胞核型阳性胞质型，核周型阳性免疫组织化学染色的几点体会一、组织和细胞标本制备目的：(1)最大限度地保存组织结构。(2)最大限度地保存抗原性。注意事项：在选择组织处理方法前，先根据实验目的，参考抗体说明，确定组织处理方式(冰冻?石蜡?)。1.取材（1）原则：尽可能新鲜，动物标本可选用动脉灌注固定。（2）取材部位：尽量包括病灶和正常组织交界处，避免选择坏死组织。（3）避免挤压：受挤压组织不但影响HE切片的观察，还造成非特异性免疫组化组织着色。2.固定根据不同的染色目的，选择不同的固定液，固定时组织越新鲜越好。组织块厚薄大小要合适。容器要大,固定液要宽余.固定时间既要考虑充分固定,又不能太长(依组织块厚薄大小从24hr至3～5天,太长可溶性抗原会渗漏,阳性会减弱甚至转阴.选择最合适的固定剂,如用福尔马林,必须用缓冲福尔马林4.制备冰冻切片冷冻包埋能较好保存抗原,新鲜及已固定材料均适合于冷冻包埋、切片。★防止冰结晶!!!预处理:目的是减少组织中的水分以减少冰结晶的产生,方法是将已固定、冲洗的组织块放入20～30%蔗糖缓冲液内,4℃冰箱过夜,再将组织块埋于OCT包埋剂速冻:目的是使温度很快下降迅速通过冰点,防止冰结晶产生。速冻方法液氮法:将OCT包埋的组织块投入液氮数秒,等组织块冻结后,立即移入低温冰箱(装入封口塑料袋内密封)或放入恒冷切片机恒冷箱内以备切片;干冰-丙酮法:将200ml丙酮注入小型广口保温瓶或保温杯内,逐渐加入干冰至饱和不再冒泡为止,温度可达-70℃;将装有50ml异戊烷的小烧杯缓慢置入干冰-丙酮饱和液中;然后将OCT包埋的组织块投入异戊烷内速冻半分至一分钟。免疫组化染色后的衬染常用苏木精或甲基绿衬染细胞核。但如果阳性信号在细胞核,切勿衬染细胞核!!!细胞质衬染:1%亮绿,但退色较快,可改用坚固绿(FASTBLUE)染,则保存时间较长封固和保存绝大多数免疫酶染色后都可用树胶封固，但如用DAB以外的底物应注意有色沉淀物如为脂溶性，应改用水溶性封固物如明胶、甘油缓冲液等。酶免疫染色切片可保存数周甚至数月。免疫荧光染色后应尽快观察、拍照。一.常用免疫组织化学方法免疫荧光:

用于培养细胞效果较好,石蜡切片因常有自发荧光,背景荧光较强,用时要注意

FITC(异硫氰酸荧光素)用450～490nm光激发,515nm滤片观察,呈翠绿色

RB200(四乙基罗达明B200)用570nm光激发,596～600nm滤片观察,呈橘红色

TRITC(四甲基异硫氰酸罗达明)用530～560nm光激发,580nm滤片观察,呈红色

Texasred

用595nm光激发,615nm滤片观察,呈红色直接免疫荧光法:

间接免疫荧光法双重荧光染色2.免疫组织化学常用方法:PAPABC或LSABELPS(二步法)20世纪70年（1970）SternbergPeroxidase-anti-Peroxidase(PAP)20世纪80年代（1981）许世民ABC（亲和免疫组化）Avidin-Biotin-PeroxidaseComplex90年代中期：EnhancedPolymerOneStep(EPOS)EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,ELPS)简称二步法1mol含70molHRP+10molAB如何做好免疫组化染色?什么才是高质量的免疫组化染色?阳性信号突出无背景染色切片平整无破裂/碎,无污秽做好免疫组化染色几点体会1.组织细胞处理:

固定剂固定时间速冻防冰结晶白片质量好:平整,无破裂/碎,无污秽防脱片:玻片绝对干净涂粘合剂:

白胶多聚赖氨酸铬明矾明胶液甲醛明胶液

贴片后冷风吹干或37℃/60℃烘干

2.抗体:特异性,高效价,亲合力,适度稀释度3.石蜡切片-抗原修复

(1)蛋白酶消化:胰蛋白酶胰糜蛋白酶链霉蛋白酶蛋白酶K胃蛋白酶

消化不足-修复失败,假阴性或信号弱消化过度-结构破环,脱片(2)热修复:微波照射高压加热水浴加热

(3)微波+蛋白酶消化注意点:★固定时间长,消化时间或热修复时间适当延长★酶生产厂家不一,或批号不一,消化时间可能也不一★热修复的介质要选合适,必须要加钙螯合剂