参归软肝胶囊对大鼠肝纤维化保护作用的实验研究

参归软肝胶囊对大鼠肝纤维化保护作用的实验研究

[09-09-0211:34:00]

编辑：studa20

作者：李艳，路西明，王建刚，王淑英，张朝晖，付银峰【摘要】

目的观察参归软肝胶囊（SGR）对猪血清所致大鼠免疫性肝损伤、肝纤维化模型的影响。方法复制猪血清所致大鼠免疫性肝损伤、肝纤维化模型，测定血清ALT，AST，Alb，TP，SA，Hyp，观察肝病理变化,判断SGR对猪血清所致的大鼠免疫性肝损伤、肝纤维化模型的影响。结果SGR组ALT，AST，SA和Hyp降低(P<0.05)，TP和Alb增加(P<0.05)，肝脏损伤和纤维化程度降低（中剂量组P<0.05；高剂量组P<0.01）。结论SGR对猪血清所致大鼠免疫肝损伤、肝纤维化有保护作用。【关键词】

参归软肝胶囊；肝纤维化；肝功能；动物模型Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofShen-gui-rangan（SGR）capsuleonthehepaticfibrosisinrats.MethodsThemodelofhepaticfibrosiswasinducedinratsandliverfunction,serumAST,ALT,Alb,TP,liverSAandHypwereexamined.Histopathologicalchangeswereexaminedbyopticalmicroscope.ResultsComparedwithmodelgroup,inSGRmiddleandhighgroups:Liverfunctionswasimproved,ALT,AST,SAandHypofLiverwerelowered（P<0.05）.TPandAlbwereincreased（P<0.05）;Thedegreeoffibrosiswasreduced（inSGRmiddledosagegroupP<0.05andinSGRhighdosagegroupP<0.01）.ConclusionSGRcapsulehasprotectiveeffectonhepaticfibrosisinrats.Keywords：SGRcapsule；

Hepaticfibrosis；

Liverfunction；

Animalmodel

目前，西药逆转肝纤维化缺乏成熟有效的治疗药物。研制高效、低毒抗肝纤维化的中药具有重要意义。参归软肝胶囊（SGR）主要由黄芪、丹参、川芎、当归、白芍、郁金等中药组成，有健脾、益气、活血、舒肝等功效。本实验通过研究SGR对猪血清所致大鼠免疫性肝损伤、肝纤维化模型的影响，为其临床开发提供理论依据。1

动物、药物与试剂

Wistar大鼠，雄性，常规饲料喂养，饮水量不限。动物合格证号：医动字0001681，河南省实验动物中心提供。SGR批号040912，由河南科技大学附属医院制剂室提供。复方鳖甲软肝片（阳性对照药）批号040310，批准文号：国药准字Z19991011，内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司提供。羟脯氨酸（Hyp）试剂盒（样本碱水解法）批号050424及唾液酸（SA）试剂盒，批号050508，均由南京建成生物工程研究所提供；猪血清，批号050106，郑州佰安生物工程公司提供，-10℃保存备用。2

方法2.1

肝纤维化模型复制［1］将70只180～200g的雄性动物随机分成6组，即正常对照组，模型组，阳性对照组，SGR高、中、低剂量组。除模型组、正常对照组各15只外，其余每组10只。除正常对照组每只注射NS0.5ml外，其余各组动物均注射猪血清0.5ml，2次/周，共12周。第12周末，取正常对照组及模型组动物各5只进行眼内眦采血，检测ALT，AST，Alb，TP并取其肝脏，作病理组织检查，进行肝纤维化积分的评分，确认肝纤维化模型建立。第12周起，按上述分组，分别灌服相应受试药物，连续12周。于灌服受试药物第12周末，各组分别动物眼内眦采血，检测ALT，AST，Alb，TP，SA，Hyp，取肝脏相同部位进行病理学检查，肝纤维化积分的评分，比较用药前后各项指标。2.2

给药方法和测定指标在确认肝纤维化模型建立以后，按前述分组，分别灌服相应受试药物，1.0ml·（100g）-1·d-1连续12周，ig。正常对照组与模型组0.5%CMC-Na，ig；阳性对照组成药2.1g·kg-1，ig；SGR低、中、高3剂量组，生药1.8，3.6，5.4g·kg-1，ig。以上各组均按试剂盒测试方法学进行ALT，AST，Alb，TP，SA，Hyp测定。实验结束，取各组大鼠肝脏的相同部位，10%中性福尔马林溶液固定，切片，HE染色，光学纤维镜进行病理组织学观察。肝纤维化积分评分标准参考文献［2］进行积分。2.3

统计学处理实验数据以±s表示，并进行差异显著性检验。

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结果3.1

纤维化模型的建立表1

猪血清诱导的大鼠肝脏纤维化模型的建立（肝功能）（略）模型组与正常对照组相比较，P<0.01；n=15表2

猪血清诱导的大鼠肝脏纤维化模型的建立（纤维化程度）（略）模型组与正常对照组比较，P<0.01；n=52.2

SGR对肝纤维化大鼠肝功能，肝SA，Hyp及病理学变化的影响肝功能、肝SA及肝Hyp测定结果见表3～4。表3

SGR对猪血清诱导的大鼠肝脏纤维化模型肝功能、肝SA和Hyp的影响（略）模型组与正常对照组比较，△P<0.05，△△，P<0.01；治疗组与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；n=10表4

SGR对猪血清诱导的大鼠肝脏纤维化模型肝纤维化程度的影响（略）模型组与正常对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；治疗组与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；n=10

模型组与正常对照组相比：ALT，AST，SA，Hyp高于正常组（P<0.05），Alb、TP降低（P<0.05），表明肝纤维化模型持续存在；阳性对照组与模型组相比ALT，AST，Alb，TP，SA有显著性差异（P<0.05），Hyp有非常显著性差异（P<0.01），肝脏纤维化积分降低（P<0.05）、肝脏纤维化程度降低（P<0.01）。

SGR各剂量组各项指标与模型组相比：低剂量与模型组相比无显著性差异（P＞0.05）；中、高剂量组与模型组相比有显著性差异（P<0.05）。

肝脏纤维化积分中、高剂量组剂量组较模型组降低，有显著性差异或非常显著性差异（中剂量组P<0.05，高剂量组P<0.01）。3

讨论

肝纤维化是慢性肝损伤和修复的病理过程，是向肝硬化发展的前期过程，也是各种慢性肝病所共有的病理学基础。阻断或逆转肝纤维化发生和发展是防治肝硬化的关键。

西医对肝纤维化的治疗尚缺乏有效办法。中医药治疗肝纤维化、肝硬变历史悠久，成为国内外学者研究热点。目前，中药治疗肝纤维化是以活血化淤与补虚扶正两大类药物的疗效好。中医理论认为［3，4］，肝纤维化、肝硬变是“久病入络”，肝气郁滞、血瘀、脾虚等多方面原因形成的。现代中药药理研究表明，活血化淤中药可抑制结缔组织的异常增生，促进增生的结缔组织吸收与分解，扶正补益药在抗肝纤维化的研究中有重要意义。由此可见，肝纤维化治疗应以舒肝、祛淤、活血，健脾等为治疗肝纤维化、肝硬化的基本治则，多方面着手治疗，方可提高疗效。SGR由此而设计，其中郁金行气疏肝解郁、甘草补脾益气。现代药理研究表明甘草中的甘草甜素使肝内核因子活性下降，可明显抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原的合成，降低血清转氨酶水平和肝脏脂肪变性以及和纤维化程度；丹参、黄芪，以突出活血、益气作用，丹参中的丹酚酸A可很好地抑制成纤维细胞增殖和细胞内胶原的合成，可显著减轻大鼠肝纤维化模型的纤维化程度，明显降低肝羟脯氨酸含量，改善肝功能；川芎中含有川芎嗪，可明显降低肝纤维化动物血谷丙转氨酶、Ⅲ型前胶原及肝组织内的丙二醛（MDA），提高肝内超氧化物歧化酶（SOD）的活性，显著减轻肝脏胶原纤维的增生程度。ALT，AST，Alb及TP反映肝功能情况，SA、Hyp含量可以反映肝纤维化的程度，对诊断、治疗及预后的判断都具有重要意义。

本实验给猪血清免疫性肝损伤、肝纤维化模型大鼠灌服SGR，相当于生药3.6，5.4g·kg-1，12周，可不同程度地改善模型动物的肝功能，降低肝脏纤维化及肝实质损伤程度，故SGR对猪血清致大鼠慢性肝损伤、肝纤维化有保护作用，其机制可能与降低肝组织SA和Hyp的含量有关。【参考文献】

［1］程明玲，杨常青.肝纤维化的基础研究及临床，第2版［M］.北京：