杀虫剂生物测定技术

第二章杀虫剂生物测定技术

标准试虫杀虫剂生物测定方法毒力的表示方法杀螨剂生物测定方法杀虫剂田间药效试验一、标准试虫标准试虫是指数种被普遍采用的具有一定代表性和经济意义及耐药能力较稳定而均匀的昆虫群体。标准试虫的大量供应与质量均匀是影响生物测定结果正确、稳定与可靠的最基本因子，同时也是保证顺利地开展和完成生物测定最基本的条件之一。

（1）粘虫（LeucaniaseparateWalker），代表鳞翅目咀嚼式口器食叶性害虫。（可人工饲养）（2）玉米螟（Ostrinianubilalis），代表为害杂粮作物的钻蛀性害虫。（可人工饲养）（3）二化螟（Chilosuppressalis）,代表钻蛀性水稻害虫。（可人工饲养）常用的供试昆虫有：（4）还有三化螟、棉铃虫、地老虎农业害虫等。（5）卫生害虫（如蚊、蝇类）（6）仓库害虫（米象、赤拟谷盗等）（7）刺吸性害虫（蚜螨类）（1）在分类上或经济上有一定的代表性的不同种类的昆虫；（2）对药物敏感性符合要求；（3）容易饲养，能终年提供试材，使测定工作不受地区或季节的限制；（4）在试验中便于控制操作。供试昆虫的要求二、杀虫剂生物测定方法

（1）胃毒作用（2）触杀作用（3）熏蒸作用（4）内吸作用夹毒叶片法液滴饲喂法口腔注射法

胃毒作用（stomachaction）的测定方法

叶片夹毒法适合于植食性、取食量大的咀嚼式口器的昆虫，如鳞翅目幼虫、蝗虫等。其基本原理是用2张叶片，中间均匀地分布一层杀虫药剂，饲喂试虫，按吞食叶片的面积计算吞食药量。夹毒叶片法（sandwichmethod）

对于舐吸式口器的昆虫不宜用夹毒叶片法，如家蝇、果蝇、蜜蜂等昆虫喜欢食糖液，可将一定量的杀虫剂加入到糖液中，用微量注射器形成一定大小的液滴（0.001~0.01ml），直接饲喂昆虫。液滴饲喂法（Feedingofmeasureddrops）一般适适用个个体较较大的的咀嚼嚼式昆昆虫，，如家家蚕，，鳞翅翅目幼幼虫等等，处处理时时，将将药剂剂溶解解后用用微量量注射射器或或手细细管点点滴定定量的的药液液注入入试虫虫口器器中，，昆虫虫吞食食药液液后，，转入入放有有新鲜鲜饲料料的容容器中中培养养观察察。这种方方法由由于从从口腔腔注入入药液液时易易刺破破口腔腔内软软组织织，技技术难难以掌掌握。。因此此，应应用较较少。。口腔腔注注射射法法触杀杀作作用用（（contactaction））测测定定方方法法点滴滴法法药膜膜法法或或残残膜膜法法浸液液法法室内内定定量量测测定定触触杀杀毒毒力力最最常常用用的的方方法法。。在在测测定定触触杀杀毒毒力力时时，，应应尽尽量量避避免免药药剂剂从从口口器器或或气气孔孔进进入入虫虫体体。。直直接接将将药药液液点点滴滴到到昆昆虫虫的的某某一一部部位位。。多多为为幼幼虫虫的的前前胸胸背背板板，，溶溶剂剂迅迅速速挥挥发发，，药药剂剂在在体体壁壁上上形形成成药药膜膜而而侵侵入入体体内内。。点滴滴法法用喷喷雾雾法法及及喷喷粉粉法法将将药药剂剂定定量量地地分分布布于于一一定定表表面面上上，，如如滤滤纸纸、、玻玻璃璃容容器器内内壁壁及及植植物物叶叶片片等等而而形形成成一一层层均均匀匀的的药药膜膜。。使使昆昆虫虫在在药药膜膜上上接接触触一一定定时时间间（（4~24h）），，检检查查击击倒倒率率或或死死亡亡率率。。求求出出药药剂剂对对试试虫虫的的毒毒力力。。药膜法法或残残膜法法对于水水生昆昆虫（（蚊幼幼虫、、螨类类和蚜蚜虫））将将药剂剂配成成5~7个个不同同浓度度有药药液，，摘取取有一一定数数量蚜蚜虫的的豆苗苗叶片片，在在不同同药液液中浸浸3~5s，取取出后后，用用吸水水纸吸吸去多多余的的药液液，统统计叶叶片上上的蚜蚜虫数数量，，对照照用清清水处处理。。保湿湿24h，，检查查蚜虫虫的死死亡数数，计计算死死亡率率及校校正死死亡率率，求求出LC50。浸液法法某些药药剂有有内吸吸性如如许多多有机机磷和和氨基基甲酸酸酯类类杀虫虫剂可可以通通过植植株的的根、、茎、、叶等等部位位吸收收到植植株的的内部部，随随着植植物体体液在在体内内的传传导，，当害害虫取取食或或刺吸吸植物物时，，药剂剂也随随之进进入害害虫的的体内内并将将其杀杀死。。内吸作作用（（Systemicaction））的试试验方方法内吸杀杀虫剂剂毒力力的测测定方方法分分为直接测测定法法和间接测测定法法2种。。直接接法包包括茎茎或叶叶的局局部涂涂药、、根际际施药药及种种子处处理等等。间间接法法是用用处理理后的的植物物，取取其叶叶片研研磨成成为水水剂，，加在在水中中，测测定对对水生生昆虫虫的毒毒力。。定义杀虫药药剂以以气体体的方方式通通过害害虫的的呼吸吸系统统进入入虫体体，而而起到到毒杀杀的作作用称称熏蒸蒸作用用。目的熏蒸作作用毒毒力的的测定定的目目的主主要有有2个个：一一是用用鉴别别杀虫虫剂有有无熏熏蒸作作用；；二是是测定定熏蒸蒸剂的的杀虫虫毒力力。注意要求在在一个个密闭闭的条条件下下进行行，且且药剂剂不与与试虫虫接触触。熏蒸作作用（（fumigationaction））测定定方法法毒力的的表示示方法法及计计算致死中中量（（LD50：Medianlethaldose）或或致死死中浓浓度（（LC50：Medianlethalconcentration））：药药剂杀杀死某某种生生物群群体50％％所需需的剂剂量（（LD50）或浓浓度（（LC50）。结果检检查与与LD50计算胃毒作作用触杀作作用以夹毒毒叶片片法为例昆虫取取食后后放在在干净净容器器中，，加入入新鲜鲜的植植物叶叶片，，在24~72h后后检查查死亡亡率。。由于于各昆昆虫的的取食食量不不同，，因此此必须须单独独观察察记录录。根据取取食面面积、、单位位面积积上的的着药药量（（µg/g），，根据据单位位体重重受药药量，，由小小至大大顺序序排列列，由由于在在取食食量较较小时时试虫虫无死死亡；；随着着取食食量加加大，，出现现死、、活均均有出出现的的剂量量范围围；再再加大大取食食量，，试虫虫全部部死亡亡。这这三种种表现现自然然分成成三组组：（（1））生存存组（（2））生死死组（（3））死亡亡组。。如实实验中中三组组数值值均出出现，，则说说明实实验成成功，，如缺缺其中中一组组，应应重做做。生生存组组和死死亡组组是划划分生生死组组（中中间组组）界界线的的。将中间间组死死虫的的每项项单位位体重重药量量累加加，除除以总总死虫虫数得得A；；中间间组活活虫的的每项项单位位体重重相加加除以以活虫虫数得得B。。将A＋B除2即得得致死死中量量（µµg/g）），计计算公公式为为致死中中量（（LD50）＝（（A＋＋B））/2供试药药剂设设计5~6个浓浓度梯梯度，，每个个浓度度为一一个处处理，，每个个处理理40~60头头，重重复4~6次，，每个个重复复10头。。用微量量点样样器在在供试试昆虫虫的前前胸背背板上上点一一定体体积的的药量量，24~48h后后检查查死亡亡虫数数。统统计死死亡率率，计计算LD50。触杀毒毒力结结果检检查LD50（LC50）的计计算死亡率率（%）＝＝死虫虫数/供试试虫数数X100%校正死死亡率率（%）＝＝处理理组死死亡率率－对对照组组死亡亡度/100－－对照照组死死亡率率X100单位体体重受受药量量（µµg/g））＝处处理浓浓度（（ppm））X点点滴药药量(µl)/试虫虫平均均体重重(g)X100LD50的计算算方法法作图法法Excel法最小2乘法法例：用用点滴滴法测测定辛辛硫磷磷对玉玉米螟螟5龄龄幼虫虫的毒毒力，，试虫虫平均均体重重为0.046g/头，，每头头试虫虫点滴滴0.8μμl药药剂丙丙酮液液，48h检查查试虫虫死亡亡率，，结果果如表表1-1。。试计计算辛辛硫磷磷对玉玉米螟螟5龄龄幼虫虫的LD50。用计算器器求毒力力方程及及LD50或LC50打开计算算器的开开关，先先按MODE2进入“LR”按INVAC清除旧存存数字按INVMR清除贮存存数字将浓度的的对数值值作为X输入到XD,YD，将死亡亡率查机机率值作作为Y输入到RUN顺次输入入，输完完后，按按Kout3检查输入入数字的的组数。。按INV7显示示的数字字为a值值按INV8显示示的数字字为b值值按INV9显示示的数字字为r值值已知ab，，就可可写出回回归方程程y=a+bx求LC50或LD50、LC90、LC95求LC50，按5INVYX；再按按INVLog，显显示的数数字为LC50求LC90按6.2816INVYX；再再按INVLog，，显示的的数字为为LC90LC95按6.6449INVYX；；再按INVLog，显示示的数字字为LC95（1）死死亡率的的校正：：一般情情况，若若有对照照死亡，，需要校校正，若若对照死死亡超过过20%，应重重做；如如对照死死亡率小小于5%时，也也可不必必校正。。（2）死死亡率的的范围：：一般，，至少有有4个浓浓度处理理试虫的的死亡率率应在10－90%。。这样计计算得到到的LD50更可靠。。（3）相相关系数数R：一一般应在在0.9以上。。注意事项项叶片浸液液法玻片浸液液法叶片残毒毒法杀螨剂的的毒力测测定方法法1用盆盆栽豆苗苗（大豆豆苗）繁繁殖叶螨螨（如棉棉叶螨）），测定定时用成成螨，且且发育时时间（日日龄）一一致。2将将成成螨螨转转到到无无虫虫豆豆苗苗上上，，每每株株40头头左左右右。。叶片片浸浸液液法法3将将待待测测药药剂剂（（乳乳油油或或可可湿湿性性粉粉剂剂））用用水水稀稀释释成成系系列列浓浓度度，，每每一一浓浓度度可可配配40~50ml，，置置于于小小烧烧杯杯中中。。4将将接接上上螨螨的的豆豆苗苗浸浸入入药药液液6s，，取取出出后后用用吸吸水水纸纸吸吸去去多多余余药药液液。。处处理理时时先先用用清清水水处处理理对对照照(CK)，，再再由由低低浓浓度度至至高高浓浓度度处处理理，，每每一一浓浓度度重重复复4~5次次。。5处处理理后后豆豆苗苗置置于于25℃℃恒恒温温箱箱中中，，保保持持24h后后检检查查死死亡亡率率。。为为了了防防止止红红蜘蜘蛛蛛逃逃逸逸，，可可在在叶叶柄柄基基部部涂涂上上一一圈圈凡凡士士林林。。6将将药药剂剂浓浓度度取取对对数数值值，，24h校校正正死死亡亡率率（（或或减减退退率率））取取机机率率值值，，用用统统计计分分析析法法求求出出毒毒力力回回归归式式Y＝＝a+bx及及LC50值。。本法法适适于于测测定定各各种种雌雌成成螨螨，，饲饲养养时时必必须须将将螨螨种种鉴鉴别别、、纯纯化化，，使使之之为为单单一一种种类类。。以以苹苹果果实实生生苗苗饲饲养养山山楂楂红红蜘蜘蛛蛛，，以以柑柑桔桔苗苗饲饲养养柑柑桔桔红红蜘蜘蛛蛛，，螨螨的的龄龄期期应应一一致致。。浸玻玻片片法法1．．将将双双面面尼尼龙龙胶胶带带剪剪成成2cm长长，，贴贴在在常常用用的的载载玻玻片片的的一一端端。。2．．用用零零毫毫毛毛笔笔挑挑起起3～～4日日龄龄的的雌雌成成螨螨，，将将其其背背部部粘粘在在胶胶带带上上，，每每行行10头头，，粘粘2~3行行或或用用毛毛笔笔将将雌雌成成螨螨集集中中在在一一起起。。然然后后将将贴贴在在胶胶带带的的玻玻片片的的胶胶面面部部分分轻轻轻轻地地压压向向成成螨螨背背部部，，以以粘粘着着为为准准，，再再用用毛毛笔笔将将重重叠叠或或不不规规则则的的或或死死亡亡的的挑挑去去，，使使其其成成行行保保留留，，这这样样比比较较省省时时也也省省工工。。3．用用水将将药剂剂配成成系列列浓度度，置置于小小烧杯杯中，，用手手持纸纸片无无螨的的一端端，将将粘有有螨的的一端端置药药液中中浸5秒钟钟，取取出后后用吸吸水纸纸吸去去多余余药液液。对对照用用清水水处理理。各各处理理重复复4次次。4．取取一白白瓷盘盘，盘盘底铺铺厚2cm的海海绵，，其上上铺一一块略略小一一点的的蓝布布，再再铺一一层塑塑料薄薄膜，，然后后加蒸蒸馏水水至蓝蓝布。。将粘粘有螨螨的玻玻片平平放在在盘中中，再再用纱纱布罩罩住，，置25℃℃，相相对湿湿度85％％左右右温室室中，，经24h检查查死亡亡率。。用毛毛笔尖尖轻轻轻触动动螨足足，以以不动动者为为死亡亡。求求出毒毒力回回归式式及LC50值。编号＿＿＿＿＿浓度＿＿＿＿＿名称＿＿＿＿＿日期＿＿＿＿＿。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。浸玻片片法示示意图图注：。。表示示为成成螨叶片残残效法法此法适适用于于测定定卵、、若螨螨及背背部刚刚毛过过长的的雌成成螨（（不易易用浸浸玻片片法））。1在在直直径为为9cm的的培养养皿内内放入入保温温的叶叶片2在在叶片片上接接20头雌雌成雌雌成螨螨，让让其在在叶片片上产产卵，，24h后后移去去成螨螨，保保留螨螨卵。。3将将待待测药药剂用用水稀稀释成成5个个系列列浓度度4将将有螨螨卵的的叶片片在待待测药药液中中浸5s，，每一一药液液浓度度重复复5次次，对对照用用清水水处理理。5将将培养养皿保保持在在22℃，，相对对湿度度95％恒恒温箱箱内，，每天天观察察记载载卵的的孵化化数及及若螨螨存活活数，，直至至对照照组全全部孵孵化成成若螨螨。6计计算药药剂各各浓度度的杀杀卵或或杀死死若虫虫的效效果。。求出出药剂剂杀卵卵或若若虫的的毒方方程及及LC50。杀虫剂剂田间间药效效试验验处理组死亡率－对照组死亡率校正死亡率（%）＝1－对照组死亡率X100注意：：自然死死亡在在20％以以内内，可可以用用上面面的公公式计算，，否则则不行行；自然死死亡在在5％％以内内，不不必校校正死死亡率率。田间防防治