临床免疫测定的室内质量控制课件

酶联免疫吸附试验(EL|SA)室内质量控制免疫室2011.8.22酶联免疫吸附试验(EL|SA)1室内质量控制(nternalQualityControl,Qc)的概念由实验室工作人员,采取一定的方法和步骤,连续评价本实验室工作的可靠性程度,旨在监测和控制本实验室工作的精密度,提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性,以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。可概括为:(1)执行者:实验室技术人员;(2)目的监测实验室测定的重复性;(3)功能:决定了当批测定的有效性,报告可否发出。是对实验室测定的即时性评价。室内质量控制2临床免疫测定的室内质量控制课件3酶联免疫吸附试验(ELSA)操作简单,灵敏度高,特异性好,经济安全等特点而在临床上广泛应用,但是由于其操作步骤复杂,一般包括试剂准备,样本收集,加样,温育,洗涤,显色,比色,结果判定等,其中任何一项操作不当都会对检测结果产生很大影响。因此,必须加强ELSA检测的全面质量控制,保证其结果的准确可靠。酶联免疫吸附试验(ELSA)4试剂优质的试剂是保证检验质量的基础。近年来,国家采用批检的形式对ELSA试剂严格把关,但不同厂家的试剂在使用效果上仍存在差异,试剂质量在很大程度上决定了检测水平我们从去年将原来使用的北京科卫试剂,更换成现在的英科新创,同时采用上海科华对可疑样本进行复检,目前来看效果很好。试剂5从4°C冰箱取出的试剂必须放置室温20~30min后再启用,否则水化层的形成可能影响试剂的原始浓度及试剂中溶质分子的均匀分布。根据蛋白质在冷冻过程中出现蛋白分子分布改变的特点,试剂正式启用前应充分混匀。不同批次的试剂在制作过程中很难保证质量完全一致,因此必须选择和订购长批号的试剂,并保证保存条件,严格执行这一标准可以避兔试剂批号改变而重建质控体系及重新评估试剂的复杂过程,并且能够保证结果的稳定性。从4°C冰箱取出的试剂必须放置室温20~30min6标本在低温下保存时间过长,lgG可聚合成多聚体,在间接法EL|SA测定中会导致本底加深,甚至出现假阳性结果。通常血清标本可在2~8℃保存1周,冷冻保存时间会更长。血清标本应充分离心,否则可因纤维蛋白原非特异吸附于微孔而造成假阳性结果。冷冻保存标本避免反复冻融,标本的反复冻融会因其所产生的机械剪切力对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,使抗体效价下降从而引起假阴性结果标本7操作因素加样加样器是一种比较精密的工具,其在长时间使用时会因机械磨损或推动杆内附着的血痂等原因造成加样不准,因此必须定期对加液器进行维护和校准。每次加速度不可太快,以免将标本加在孔壁上部,并注意不要溅出或产生气泡。因此建议在加酶结合物和底物时用多道加液器,或者双人同时加样以减少操作时差对结果的影响,另外有些项目在检测前需要稀释以减少非特异性反应。操作因素8●温育●温育的温度:育常采用的温度有43、37°C、室温或4℃C等。37℃C是实验室中常用的温育温度,也是大多数抗原抗体结合的最适反应温度。抗原抗体反应一般在37℃C经1~2h产物的生成可达顶峰,为加速反应,可在一定范围内提高反应的温度并在反应过程中连续振荡来增加抗原抗体接触的概率。抗原抗体反应在4°C更为彻底,形成的产物更多、更稳定,但因所需时间太长,在EL|SA检测中一般不予采用。●温育9干扰因素标本患者标本中有可能含有干扰试验的免疫物质,导致假阳性或假阴性的结果,干扰因素一般可分为两类即内源性和外源性干扰因素。内源性干扰因素一般包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白、异嗜性抗体及某些自身抗体等,避免内源性干扰因素主要通过选择合适的试剂;外源性干扰因素包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长及标本凝干扰因素10临床免疫测定的室内质量控制课件11临床免疫测定的室内质量控制课件12临床免疫测定的室内质量控制课件13临床免疫测定的室内质量控制课件14临床免疫测定的室内质量控制课件15临床免疫测定的室内质量控制课件16临床免疫测定的室内质量控制课件17临床免疫测定的室内质量控制课件18临床免疫测定的室内质量控制课件19临床免疫测定的室内质量控制课件20临床免疫测定的室内质量控制课件21临床免疫测定的室内质量控制课件22临床免疫测定的室内质量控制课件23临床免疫测定的室内质量控制课件24临床免疫测定的室内质量控制课件25临床免疫测定的室内质量控制课件26临床免疫测定的室内质量控制课件27临床免疫测定的室内质量控制课件28临床免疫测定的室内质量控制课件29临床免疫测定的室内质量控制课件30临床免疫测定的室内质量控制课件31临床免疫测定的室内质量控制课件32临床免疫测定的室内质量控制课件33临床免疫测定的室内质量控制课件34临床免疫测定的室内质量控制课件35临床免疫测定的室内质量控制课件36临床免疫测定的室内质量控制课件37临床免疫测定的室内质量控制课件38临床免疫测定的室内质量控制课件39临床免疫测定的室内质量控制课件40临床免疫测定的室内质量控制课件41临床免疫测定的室内质量控制课件42临床免疫测定的室内质量控制课件43临床免疫测定的室内质量控制课件44临床免疫测定的室内质量控制课件45临床免疫测定的室内质量控制课件46临床免疫测定的室内质量控制课件47临床免疫测定的室内质量控制课件48临床免疫测定的室内质量控制课件49临床免疫测定的室内质量控制课件50临床免疫测定的室内质量控制课件51临床免疫测定的室内质量控制课件52临床免疫测定的室内质量控制课件53临床免疫测定的室内质量控制课件54临床免疫测定的室内质量控制课件55临床免疫测定的室内质量控制课件56临床免疫测定的室内质量控制课件57临床免疫测定的室内质量控制课件58临床免疫测定的室内质量控制课件59临床免疫测定的室内质量控制课件60临床免疫测定的室内质量控制课件61临床免疫测定的室内质量控制课件62临床免疫测定的室内质量控制课件63临床免疫测定的室内质量控制课件64临床免疫测定的室内质量控制课件65酶联免疫吸附试验(EL|SA)室内质量控制免疫室2011.8.22酶联免疫吸附试验(EL|SA)66室内质量控制(nternalQualityControl,Qc)的概念由实验室工作人员,采取一定的方法和步骤,连续评价本实验室工作的可靠性程度,旨在监测和控制本实验室工作的精密度,提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性,以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。可概括为:(1)执行者:实验室技术人员;(2)目的监测实验室测定的重复性;(3)功能:决定了当批测定的有效性,报告可否发出。是对实验室测定的即时性评价。室内质量控制67临床免疫测定的室内质量控制课件68酶联免疫吸附试验(ELSA)操作简单,灵敏度高,特异性好,经济安全等特点而在临床上广泛应用,但是由于其操作步骤复杂,一般包括试剂准备,样本收集,加样,温育,洗涤,显色,比色,结果判定等,其中任何一项操作不当都会对检测结果产生很大影响。因此,必须加强ELSA检测的全面质量控制,保证其结果的准确可靠。酶联免疫吸附试验(ELSA)69试剂优质的试剂是保证检验质量的基础。近年来,国家采用批检的形式对ELSA试剂严格把关,但不同厂家的试剂在使用效果上仍存在差异,试剂质量在很大程度上决定了检测水平我们从去年将原来使用的北京科卫试剂,更换成现在的英科新创,同时采用上海科华对可疑样本进行复检,目前来看效果很好。试剂70从4°C冰箱取出的试剂必须放置室温20~30min后再启用,否则水化层的形成可能影响试剂的原始浓度及试剂中溶质分子的均匀分布。根据蛋白质在冷冻过程中出现蛋白分子分布改变的特点,试剂正式启用前应充分混匀。不同批次的试剂在制作过程中很难保证质量完全一致,因此必须选择和订购长批号的试剂,并保证保存条件,严格执行这一标准可以避兔试剂批号改变而重建质控体系及重新评估试剂的复杂过程,并且能够保证结果的稳定性。从4°C冰箱取出的试剂必须放置室温20~30min71标本在低温下保存时间过长,lgG可聚合成多聚体,在间接法EL|SA测定中会导致本底加深,甚至出现假阳性结果。通常血清标本可在2~8℃保存1周,冷冻保存时间会更长。血清标本应充分离心,否则可因纤维蛋白原非特异吸附于微孔而造成假阳性结果。冷冻保存标本避免反复冻融,标本的反复冻融会因其所产生的机械剪切力对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,使抗体效价下降从而引起假阴性结果标本72操作因素加样加样器是一种比较精密的工具,其在长时间使用时会因机械磨损或推动杆内附着的血痂等原因造成加样不准,因此必须定期对加液器进行维护和校准。每次加速度不可太快,以免将标本加在孔壁上部,并注意不要溅出或产生气泡。因此建议在加酶结合物和底物时用多道加液器,或者双人同时加样以减少操作时差对结果的影响,另外有些项目在检测前需要稀释以减少非特异性反应。操作因素73●温育●温育的温度:育常采用的温度有43、37°C、室温或4℃C等。37℃C是实验室中常用的温育温度,也是大多数抗原抗体结合的最适反应温度。抗原抗体反应一般在37℃C经1~2h产物的生成可达顶峰,为加速反应,可在一定范围内提高反应的温度并在反应过程中连续振荡来增加抗原抗体接触的概率。抗原抗体反应在4°C更为彻底,形成的产物更多、更稳定,但因所需时间太长,在EL|SA检测中一般不予采用。●温育74干扰因素标本患者标本中有可能含有干扰试验的免疫物质,导致假阳性或假阴性的结果,干扰因素一般可分为两类即内源性和外源性干扰因素。内源性干扰因素一般包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白、异嗜性抗体及某些自身抗体等,避免内源性干扰因素主要通过选择合适的试剂;外源性干扰因素包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长及标本凝干扰因素75临床免疫测定的室内质量控制课件76临床免疫测定的室内质量控制课件77临床免疫测定的室内质量控制课件78临床免疫测定的室内质量控制课件79临床免疫测定的室内质量控制课件80临床免疫测定的室内质量控制课件81临床免疫测定的室内质量控制课件82临床免疫测定的室内质量控制课件83临床免疫测定的室内质量控制课件84临床免疫测定的室内质量控制课件85临床免疫测定的室内质量控制课件86临床免疫测定的室内质量控制课件87临床免疫测定的室内质量控制课件88临床免疫测定的室内质量控制课件89临床免疫测定的室内质量控制课件90临床免疫测定的室内质量控制课件91临床免疫测定的室内质量控制课件92临床免疫测定的室内质量控制课件93临床免疫测定的室内质量控制课件94临床免疫测定的室内质量控制课件95临床免疫测定的室内质量控制课件96临床免疫测定的室内质量控制课件97临床免疫测定的室内质量控制课件98临床免疫测定的室内质量控制课件99临床免疫测定的室内质量控制课件100临床免疫测定的室内质量控制课件101临床免疫测定的室内质量控制课件102临床免疫测定的室内质量控制课件103临床免疫测定的室内质量控制课件104临床免疫测定的室内质量控制课件105临床免疫测定的室内质量控制课件106临床免疫测定的室内质量控制课件107临床免疫测定的室内质量控制课件108临床免疫测定的室内质量控制课件109临床免疫测定的室内质量控制课件110临床免疫测定的室内质量控制课件111临床免疫测定的室内质量控制课件112临床免疫测定的室内质量控制课件113临床免疫测定的室内质量控制课件114临床免疫测定的室内质量控制课件115临床免疫测定的室内质量控制课件116临床免疫测定的室内