2.1微生物的实验室培养课件 高二生物人教版选修一

课题1：微生物的实验室培养用于发酵的微生物：1.制作果酒——酵母菌酵母菌——真菌2、制作果醋——醋酸菌醋酸菌——细菌3、制作腐乳——毛霉毛霉——多细胞真菌4、制作泡菜——乳酸菌乳酸菌——细菌到目前为止，几十项Nobel生理学和医学奖，化学奖都与微生物学有关一、微生物的类群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌、霉菌单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等微生物一般个体微小，结构简单。无细胞结构真核细胞细菌、蓝藻等原核细胞资料：某种细菌的营养构成微生物需要的五大类营养要素物质是：二、微生物需要的营养物质及功能1.碳源2.氮源3.生长因子4.无机盐5.水：凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。①无机碳源：CO2；NaHCO3等②有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等①参与构成细胞物质和一些代谢产物②有机碳源是异养微生物的能源⑴.概念⑵.来源：⑶.作用：1.微生物的碳源①无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能够为微生物提供N元素的营养物质。主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物。2.微生物的氮源⑴.概念：⑵.来源：⑶.作用：3.生长因子⑶.常见的生长因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生长不可缺少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。下表关于四种生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢的类型，描述正确的是硝化细菌乳酸细菌根瘤菌衣藻能源NH3乳糖固定N2光能碳源CO2糖类糖类CO2氮源NH3N2N2NO2-新陈代谢类型自养型异养性异养性自养型三、微生物的培养基

1、培养基定义：培养基（培养液）是为人工培养微生物而制备的，提供适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。

2、培养基的类型（1）按物理状态分：固体培养基、液体培养基、半固体培养基。加入琼脂的量决定培养基的物理状态。琼脂的性质：熔点：98度凝固点：44度注意：一般细菌不能利用琼脂。单个或者少数微生物在固体培养基表面生长繁殖,可以形成肉眼可见子细胞的群体——菌落菌落固体培养基用途：用于微生物纯化、计数、鉴定几种菌落及其形态半固体培养基：观察运动无动力有动力(弥散)液体培养基：工业生产表面生长均匀混浊生长沉淀生长（2）按成分分：天然培养基、合成培养基

半合成培养基。（3）按功能分：基础培养基、选择培养基、鉴别培养基。基础培养基：含有微生物生长所需的基本物质。选择培养基：培养基加入某种物质或缺少某种营养物质而抑制不需要的微生物生长促进需要的微生物生长。不含药物含药物抗药菌株几种选择培养基：加入青霉素的培养基:

分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:

分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:

分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:

分离自养型微生物鉴别培养基：区别微生物如：伊红——美蓝培养基产气杆菌菌落大、灰棕色大肠杆菌菌落小、紫黑色菌落并有绿色金属光泽思考：微生物生长需要条件

1、夏天为什么食物容易腐败？如何处理可以防止腐败？

2、为什么真空包装的食品不容易腐败？3、醋酸是否具有杀菌作用？

以上反应了微生物生长受到哪些条件影响？细菌30～37霉菌25～28放线菌25～281～2d3~4d5~7d大肠杆菌乳酸菌破伤风杆菌

大多数细菌为好氧型霉菌5.0～6.0细菌6.5～7.5放线菌7.5～8.5四、营养基配制1：目的要明确配制培养基要根据培养的微生物、培养的目的、培养基的用途来确定培养基的化学成分、物理状态。2：营养要协调3：PH要适宜3、配置牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤1.计算:100ml蒸馏水中各物质的量。2.称量：注意牛肉膏的粘稠度大。3.溶化：牛肉膏连同称量纸一同放入不断搅拌4.调节PH:7.0—7.2思考：1.获得纯净培养物的关键？2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考）3.哪些地方有菌可能导致菌体感染？4.消毒和灭菌有何不同？无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染防止外来杂菌的入侵五、无菌技术操作者、培养基、接种工具、器皿、空间比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒灭菌消毒与灭菌的比较较为温和部分生活状态的微生物不能强烈全部微生物能5.常用的消毒和灭菌方法有哪些？常用的消毒方法种类主要方法应用范围

巴氏消毒法60～85℃下处理30～35分钟、牛奶、啤酒、果汁等不宜高温灭菌的液体

煮沸消毒法100℃沸水浴日常食品、灌装食品紫外线消毒法30W紫外线灯照射30分钟接种室空气化学药物消毒法体积分数70%～75%的酒精、碘酒、来苏水等皮肤、伤口、动植物组织表面的消毒

常用的灭菌方法种类主要方法应用范围

灼烧灭菌酒精灯火焰灼烧接种针、接种环或其他金属用具，接种过程中的试管口、三角瓶口

干热灭菌法电热鼓风干燥箱160～170℃加热1～2h培养皿、试管、移液管等玻璃制品和金属制品不适宜用其他方法灭菌而又耐高温的物品

高压蒸汽灭菌压力100Kp、121℃维持15～

30分钟培养基及多种器材、物品（1）灼烧灭菌微生物的接种工具(接种环、接种针、试管口)或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧（2）干热灭菌

160－170℃；1－2h能耐高温的需要保持干燥的物品(玻璃器皿)（2）高压蒸汽灭菌

100kPa121℃15-30min通常用于培养基的灭菌思考：以下应当用何种方法灭菌、消毒？

操作者培养基接种工具器皿空间牛奶——手用酒精消毒——高压蒸汽灭菌——灼烧——干热灭菌——紫外线——巴氏消毒60～85℃下处理30～35分钟总结：无菌技术

1、实验操作空间、操作者、衣着和手要

和

。2、将用于微生物培养的器皿、接种工具和培养基等进行

。3、为了避免周围环境中微生物污染，实验操作应在

附近进行。4、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。清洁灭菌酒精灯消毒倒平板操作六、倒平板技术答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。问题讨论1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？

4、在倒平板的过程中，不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？

使培养基表面的水更好的挥发，防止皿盖上水珠落入培养基在皿盖与皿底之间的培养基上会滋生空气中的微生物，最好不要用该培养基培养微生物。3、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程称为接种。1、接种工具七、接种技术11.线条不重叠22-3.从上次的末端开始，交叉2~3条线344.最后的划线不能与第一区相连。平板划线法八、大肠杆菌的纯化培养：分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选菌株的最简便方法之一。八、大肠杆菌的纯化培养：纯化大肠杆菌：⑴平板划线法：菌种3个平板划线1个平板不划线1.接种：接种环防止划破培养基（重复实验）（空白对照）1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：（1）第一步灼烧接种环：避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；（2）每次划线前灼烧接种环：杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线的菌种直接来源于上次划线的末端（从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少）（3）划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。

2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。常用的其他接种方法6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：菌液微量移液器⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：b.涂布平板：不超过0.1ml各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照滴灼涂稀释103倍稀释104倍稀释105倍（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。实验操作成果评价3（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。九、菌种的保藏：1.临时保藏：试管固体斜面培养基上4℃2.长期保存：菌种易被污染、变异甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃编号成分含量①粉状硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml5．右表是某微生物培养基成分，请据此回答：（1）右表培养基可培养的微生物类型是

。（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入

，用于培养

，

自养型微生物

含碳有机物

金黄色葡萄球菌

（3）若除去成分②，加入（CH2O），该培养基可用于培养

。（4）表中营养成分共有

类。（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是

。（6）右表中各成分重量确定的原则是

。（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分

。固氮微生物

3调整pH

依微生物的生长需要确定

琼脂（或凝固剂）

编号成分含量①粉状硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分天然培养基合成培养基用途鉴别培养基培养基的种类不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产观察微生物的运动、分类鉴定微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产培养基成分明确分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基半固体培养基固体培养基P84取2个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和50mlLB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮纸包装后高压锅灭菌15min。LB液体培养基——细菌的扩大培养LB固体培养基——细菌的划线分离将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中，使其在37℃摇床培养12小时。