12-2基因表达载体的构建课件

基因工程的基本操作程序P8剪切拼接导入表达基因工程的基本操作程序P8剪切拼接导入表达1目的基因的获取方法目的基因的获取可以从自然界中已有的物种中分离出来，也可以用人工的方法合成。1.从基因文库中获取2.利用PCR技术扩增目的基因3.化学方法直接人工合成目的基因的获取方法目的基因的获取可以从自然界中已有的21.基因表达载体构建的目的使目的基因在受体细胞中

，并且可以遗传给下一代使目的基因能够________和

。稳定存在表达发挥作用1.基因表达载体构建的目的使目的基因在受体细胞中32.基因表达载体的组成启动子＋目的基因＋终止子＋标记基因＋复制原点①启动子：一段特殊的DNA片段，位于目的基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录。②终止子：一段特殊的DNA片段，位于目的基因的尾端，使转录终止。③标记基因：一般为抗生素抗性基因或荧光蛋白基因，鉴别受体细胞中是否导入目的基因。2.基因表达载体的组成启动子＋目的基因＋终止子＋标记基因＋复43.基因表达载体构建的过程用产生互补末端的

酶分别切割载体和含有目的基因的DNA片段，再用

酶把两者连接(如图)。限制DNA连接3.基因表达载体构建的过程用产生互补末端的53.基因表达载体的构建过程单酶切(a酶）①质粒重新环化②质粒与目的基因反向连接③目的基因自身环化④产生质粒与质粒的连接产物以及目的基因与目的基因的连接产物。的缺点3.基因表达载体的构建过程单酶切(a酶）①质粒重新环化的缺点63.基因表达载体的构建过程双酶切(a酶和b酶）优点①防止质粒重新环化②防止质粒与目的基因反向连接③防目的基因自身环化④避免质粒与质粒以及目的基因与目的基因的自身大量连接,提高正确连接的效率。3.基因表达载体的构建过程双酶切(a酶和b酶）优点①防止质粒7获取目的基因构建表达载体导入受体细胞目的基因检测鉴定基因文库基因组文库cDNA文库PCR变性—复性—延伸模板、引物、Taq酶、4种dNTP人工合成基因小序列已知1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】获取构建导入目的基因检测鉴定基因文库基因组文库cDNA文库P8启动子和起始密码子、终止子和终止密码子的区别

项目启动子终止子起始密码子终止密码子化学成分DNA片段DNA片段mRNA上三个相邻碱基mRNA上三个相邻碱基位置目的基因首端目的基因尾端mRNA首端mRNA尾端作用RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出RNA决定转录的结束翻译的起始信号决定翻译过程的结束知识归类1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】启动子和起始密码子、终止子和终止密码子的区别

项目启动子终止91.下列有关抗虫基因表达载体的叙述，正确的是（）A.切割含抗虫基因的DNA片段和载体必须用同一种限制酶B.抗虫基因表达载体中要有启动子和终止密码子C.抗虫基因表达载体必须具备标记基因，其作用是筛选含有目的基因的受体细胞D.抗虫基因的表达启动于复制原点C1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.下列有关抗虫基因表达载体的叙述，正确的是（）102.以下为形成cDNA(图中的单链DNA)过程和PCR扩增过程示意图。据图分析，下列说法正确的是()BA.催化①过程的酶是RNA聚合酶B.④过程发生的变化是引物与单链DNA结合C.催化②⑤过程的酶都是DNA聚合酶，都能耐高温D.如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的40%，则一个双链DNA中，A与U之和也占该DNA碱基含量的40%1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】2.以下为形成cDNA(图中的单链DNA)过程和PCR扩增过113.如图是利用基因工程技术培育转基因植物生产可食用疫苗的部分过程示意图，其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制性核酸内切酶。下列说法错误的是()A.图示过程是基因工程的核心步骤B.抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来C.除图示组成外，表达载体中还应该含有启动子和终止子等结构D.表达载体构建时需要用到限制酶SmaⅠD1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】3.如图是利用基因工程技术培育转基因植物生产可食用疫苗的部分124.某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）．有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化．被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌．回答下列问题：(1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有_________________________（答出两点即可）。而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。能自我复制、具有标记基因1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】4.某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr134.某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）．有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化．被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌．回答下列问题：（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是____________________________________________________________；并且________________和________________的细胞也是不能区分的，其原因是：二者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长。含有质粒载体含有重组质粒____________________________________________________二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有__________的固体培养基．四环素1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】4.某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr14如何筛选出插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落？在含有氨苄青霉素的培养基上进行培养，产生一些菌落，然后将这些菌落按照原来的位置转移到含有四环素的培养基上进行培养，一段时间后，某些菌落将会出现停止增殖的现象，这些菌落的位置在含氨苄青霉素的培养基中对应的位置的菌落即为插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落。1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】如何筛选出插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落？在含有151.日本那些再现曲水宴的表演，有着不少“中国元素”，但是由于现代年轻人对古代中国文化了解甚少，并不知道哪些元素来自中国。2.本着保证校车安全的原则，公安机关将会同教育行政等部门对校车驾驶人进行逐一审查，坚决清退不符合安全规定的校车驾驶人。3.山寨文化是一种平民文化、草根文化，自然有其存在的意义和价值，但山寨产品的泛滥则是中国知识产权意识不足的揭露与讽刺。4.神舟7号宇宙飞船载着三位航天英雄胜利返回地球，这艘宇宙飞船是我们国家自行研制的，每一个中国人不能不为之骄傲。5.这家工厂虽然规模不大，但曾两次荣获省科学大会奖，三次被授予省优质产品称号，产品远销全国各地和东南亚地区。6.杭州湾跨海大桥是一座由我国自行建造、自行设计、自行管理、自行投资的特大型交通基础设施，是我国跨海大桥建设史上的一个重要里程碑。7、为防止东南亚地区发生的禽流感传入我国，国家质检总局和农业部今天联合发出通知，自即日暂行禁止进口来自疫区的禽类及其产品。谢谢观赏1.日本那些再现曲水宴的表演，有着不少“中国元素”，但是由于16基因工程的基本操作程序P8剪切拼接导入表达基因工程的基本操作程序P8剪切拼接导入表达17目的基因的获取方法目的基因的获取可以从自然界中已有的物种中分离出来，也可以用人工的方法合成。1.从基因文库中获取2.利用PCR技术扩增目的基因3.化学方法直接人工合成目的基因的获取方法目的基因的获取可以从自然界中已有的181.基因表达载体构建的目的使目的基因在受体细胞中

，并且可以遗传给下一代使目的基因能够________和

。稳定存在表达发挥作用1.基因表达载体构建的目的使目的基因在受体细胞中192.基因表达载体的组成启动子＋目的基因＋终止子＋标记基因＋复制原点①启动子：一段特殊的DNA片段，位于目的基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录。②终止子：一段特殊的DNA片段，位于目的基因的尾端，使转录终止。③标记基因：一般为抗生素抗性基因或荧光蛋白基因，鉴别受体细胞中是否导入目的基因。2.基因表达载体的组成启动子＋目的基因＋终止子＋标记基因＋复203.基因表达载体构建的过程用产生互补末端的

酶分别切割载体和含有目的基因的DNA片段，再用

酶把两者连接(如图)。限制DNA连接3.基因表达载体构建的过程用产生互补末端的213.基因表达载体的构建过程单酶切(a酶）①质粒重新环化②质粒与目的基因反向连接③目的基因自身环化④产生质粒与质粒的连接产物以及目的基因与目的基因的连接产物。的缺点3.基因表达载体的构建过程单酶切(a酶）①质粒重新环化的缺点223.基因表达载体的构建过程双酶切(a酶和b酶）优点①防止质粒重新环化②防止质粒与目的基因反向连接③防目的基因自身环化④避免质粒与质粒以及目的基因与目的基因的自身大量连接,提高正确连接的效率。3.基因表达载体的构建过程双酶切(a酶和b酶）优点①防止质粒23获取目的基因构建表达载体导入受体细胞目的基因检测鉴定基因文库基因组文库cDNA文库PCR变性—复性—延伸模板、引物、Taq酶、4种dNTP人工合成基因小序列已知1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】获取构建导入目的基因检测鉴定基因文库基因组文库cDNA文库P24启动子和起始密码子、终止子和终止密码子的区别

项目启动子终止子起始密码子终止密码子化学成分DNA片段DNA片段mRNA上三个相邻碱基mRNA上三个相邻碱基位置目的基因首端目的基因尾端mRNA首端mRNA尾端作用RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出RNA决定转录的结束翻译的起始信号决定翻译过程的结束知识归类1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】启动子和起始密码子、终止子和终止密码子的区别

项目启动子终止251.下列有关抗虫基因表达载体的叙述，正确的是（）A.切割含抗虫基因的DNA片段和载体必须用同一种限制酶B.抗虫基因表达载体中要有启动子和终止密码子C.抗虫基因表达载体必须具备标记基因，其作用是筛选含有目的基因的受体细胞D.抗虫基因的表达启动于复制原点C1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.下列有关抗虫基因表达载体的叙述，正确的是（）262.以下为形成cDNA(图中的单链DNA)过程和PCR扩增过程示意图。据图分析，下列说法正确的是()BA.催化①过程的酶是RNA聚合酶B.④过程发生的变化是引物与单链DNA结合C.催化②⑤过程的酶都是DNA聚合酶，都能耐高温D.如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的40%，则一个双链DNA中，A与U之和也占该DNA碱基含量的40%1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】2.以下为形成cDNA(图中的单链DNA)过程和PCR扩增过273.如图是利用基因工程技术培育转基因植物生产可食用疫苗的部分过程示意图，其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制性核酸内切酶。下列说法错误的是()A.图示过程是基因工程的核心步骤B.抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来C.除图示组成外，表达载体中还应该含有启动子和终止子等结构D.表达载体构建时需要用到限制酶SmaⅠD1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】3.如图是利用基因工程技术培育转基因植物生产可食用疫苗的部分284.某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）．有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化．被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌．回答下列问题：(1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有_________________________（答出两点即可）。而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。能自我复制、具有标记基因1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】1.2-2基因表达载体的构建(共15张PPT)【优秀课件】4.某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr294.某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）．有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化．被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌．回答下列问题：（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是____________________________________________________________；并且________________和________________的细胞也是不能区分的，其原因是：二者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长。含有质粒载体含有重组质粒____________________________________________________二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有__________的固体培养基．四环素1.2-