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文档简介
利用土壤宏基因技术定向筛选抗生素产生菌的方法学的建立栗若兰路新华张华蒋沁郑智慧摘要本实验主要利用分子生物学技术，从土壤环境样品种直接提取微生物基因组DNA，再结合不同的筛选技术，可从中筛选活性物质产生菌实验是建立在已知抗生素的基因簇上的。经过大量科学家女里，大量的抗生素合成基因簇得到大量升入的研究，为微生物刺激代谢产物药物的研究打下结实的基础。背景所运用的技术主要运用PCR技术(DNA聚合酶链式反应)电泳土壤取样PCR检验DNA纯度土壤DNA的提取与纯化应用筛选菌种PCR方法灵敏度可行性测试扩大培养步骤材料和方法一、方法土壤DNA提取方法（液氮冷冻法）1.液氮融冻（37度反复四次）土壤中加入400μLTE2.涡旋（200mmolNacl与10%SDS）3.离心3Min
DNA粗提液DNA纯化方法（PVPP柱层析法）粗提液上柱离心70%乙醇洗净酚氯仿异戊醇抽提一次氯仿抽屉一次较为纯净的DNA检测的DNA含量为23KB电泳后所有实验组中DNA的含量右图六份土质差异较大的土壤中提取到的DNA大约在23KB左右验证方法的灵敏度与可行性Herbimycin产生菌菌悬液浓度为10^-6从1ml到10-4ml五个梯度稀释六份分别与1g土壤混合冷冻法提取DNAPVPP柱层析
PCR扩增产Herbimycin基因簇里面的一段543bp片段进行电游得出灵敏度结果如图注：六份其中一份为未掺入菌的土壤作为对照对10-3每克的土壤土样涂布平板结果与PCR结果反
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