试验三未知临床标本的分离鉴定设计性试验课件

标本中未知肠道感染细菌

的分离鉴定程序

标本中未知肠道感染细菌

的分离鉴定程序1标本脓血便、肛拭子选择/鉴别培基生化反应血清学鉴定克氏双糖铁培养基,动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基玻片凝集试验SS平板,中国兰,EMB平板标本脓血便、肛拭子选择/鉴别培基生化反应血清学鉴定克氏双糖铁2标本中未知病原性球菌

的分离鉴定程序

标本中未知病原性球菌

的分离鉴定程序3

直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板涂片、染色、镜检挑取可疑菌落生化反应测定纯培养致病性测定

（凝固酶、耐热核酸酶）标本血液脑脊液肉汤增菌培养涂片染色镜检标本血液肉汤增菌培养涂片染色镜检4设计性实验临床标本中病原菌的分离与鉴定设计性实验临床标本中病原菌的分离与鉴定5设计性实验1.脓汁标本：脓拭子培养基：血琼脂平板其他：3%H2O2、兔血浆、生理盐水、革兰染液、玻片等2.痰标本：咽拭子培养基：血琼脂平板其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等设计性实验1.脓汁63.尿标本：尿液培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等4.粪便标本：肛门拭子培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺菌多价血清、玻片等3.尿7脓拭子分离培养（血平板）革兰染色革兰染色触酶实验血浆凝固酶实验脓拭子分离培养革兰染色革兰染色触酶实验血浆凝固酶实验8咽拭子革兰染色革兰染色胆汁溶菌试验奥普托辛试验

荚膜染色（石炭酸复红单染）分离培养（血平板）咽拭子革兰染色革兰染色胆汁溶菌试验荚膜染色分9尿液

离心沉淀1500转，10分钟分离培养（EMB平板）革兰染色革兰染色克氏双糖铁斜面培养基动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基观察结果观察结果观察结果完成靛基质试验尿液离心沉淀分离培养革兰染色革兰染色克氏双糖铁斜10肛门拭子1/2EMB平板克氏双糖铁斜面培养基动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基观察结果观察结果完成靛基质试验玻片凝集试验肛门拭子1/2EMB平板克氏双糖铁斜面培养基动力-靛基质-尿111.EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基）组成：无糖培养基＋乳糖＋伊红＋美蓝底物指示剂、抑菌剂原理：细菌乳糖产酸：伊红＋美蓝紫黑/紫红结果：分解乳糖细菌菌落变黑，有金属光泽不分解乳糖细菌菌落无色、半透明（粉色）分解培养基原理1.EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基）分解培养基原理12EMBagarEMBagar132.靛基质试验（吲哚试验）组成：蛋白胨水＋色氨酸原理：分解某些细菌有色氨酸酶色氨酸吲哚（无色）＋柯氏试剂玫瑰吲哚（红色）结果：液面形成玫瑰红色2.靛基质试验（吲哚试验）14吲哚试验吲哚试验153.克氏双糖铁斜面培养基反应试验组成：无糖培基＋1份葡萄糖＋10份乳糖＋铁盐＋酚红营养底物底物底物指示剂原理：只分解葡萄糖产酸（葡萄糖少，产酸量少）分解葡萄糖＋乳糖产酸（乳糖多，产酸多）上下层均为黄色产生H2S＋铁盐FeS培养基成黑色上层氧化呈红色下层缺氧不氧化呈黄色3.克氏双糖铁斜面培养基反应试验上层氧化呈红色16DoublesugerironslantDoublesugerironslant174.尿素培养基组成：基础培基＋尿素＋酚红底物指示剂原理：有些细菌产生尿素酶分解尿素产氨结果：分解尿素培基变红不分解尿素培基不变色4.尿素培养基18UreaslantUreaslant19肥达试验(4人/组)材料：病人未知血清：1#，2#，3#菌液：O、H、PAH、PBH（已知Ag）每组1块多孔板，标记每人2支吸管肥达试验(4人/组)材料：病人未知血清：1#，2#，3#20123456OAgHAgPAHPBH123456OAgHAgPAHPBH21

123456 NS（ml）0.50.50.50.50.50.5 未知血清0.50.50.50.50.5(1:10)1:201:401:801:1601:320 菌液(摇匀) 0.50.50.50.50.50.5(4种，1种/人)1:40

1:80

1:160

1:320

1:640

(阴性对照)

37℃水浴过夜方法弃0.5ml于消毒缸 方法弃0.5ml于消毒缸22肥达试验H凝集：絮状，以疏松大团沉于管底O凝集：颗粒状，以坚实凝片沉于管底凝集程度的判定以“＋”、“－”号表示＋＋＋＋上清完全透明，细菌全部形成凝集块＋＋＋细菌绝大多数凝集，液体有轻度混浊＋＋50％细菌形成凝集，液体半澄清＋仅少数细菌凝集，液体比较混浊－液体均匀混浊，无凝集（沉于管底，形成圆形沉淀，边缘整齐）肥达试验H凝集：絮状，以疏松大团沉于管底23以呈现＋＋凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝集效价1234561:401:801:1601:3201:640对照O++++++++---H+++++++++++--PAH+++----PBH+-----肥达试验以呈现＋＋凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝集效价肥达试验24肥达反应

12345O1:1601:3201:1601:401:40H1:3201:801:801:801:320PAH1:40-1:3201:801:320PBH-1:801:801:401:320PCH---1:40-伤寒伤寒早期副甲阴性回忆反应／疫苗接种肥达反应1225肠道杆菌的血清学试验（玻片凝集试验）材料1.菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物2.伤寒杆菌的诊断血清，志贺菌诊断血清、载玻片、生理盐水方法血清生理盐水肠道杆菌的血清学试验（玻片凝集试验）材料血清生理盐水26试验三未知临床标本的分离鉴定设计性试验课件27标本中未知肠道感染细菌

的分离鉴定程序

标本中未知肠道感染细菌

的分离鉴定程序28标本脓血便、肛拭子选择/鉴别培基生化反应血清学鉴定克氏双糖铁培养基,动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基玻片凝集试验SS平板,中国兰,EMB平板标本脓血便、肛拭子选择/鉴别培基生化反应血清学鉴定克氏双糖铁29标本中未知病原性球菌

的分离鉴定程序

标本中未知病原性球菌

的分离鉴定程序30

直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板涂片、染色、镜检挑取可疑菌落生化反应测定纯培养致病性测定

（凝固酶、耐热核酸酶）标本血液脑脊液肉汤增菌培养涂片染色镜检标本血液肉汤增菌培养涂片染色镜检31设计性实验临床标本中病原菌的分离与鉴定设计性实验临床标本中病原菌的分离与鉴定32设计性实验1.脓汁标本：脓拭子培养基：血琼脂平板其他：3%H2O2、兔血浆、生理盐水、革兰染液、玻片等2.痰标本：咽拭子培养基：血琼脂平板其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等设计性实验1.脓汁333.尿标本：尿液培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等4.粪便标本：肛门拭子培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺菌多价血清、玻片等3.尿34脓拭子分离培养（血平板）革兰染色革兰染色触酶实验血浆凝固酶实验脓拭子分离培养革兰染色革兰染色触酶实验血浆凝固酶实验35咽拭子革兰染色革兰染色胆汁溶菌试验奥普托辛试验

荚膜染色（石炭酸复红单染）分离培养（血平板）咽拭子革兰染色革兰染色胆汁溶菌试验荚膜染色分36尿液

离心沉淀1500转，10分钟分离培养（EMB平板）革兰染色革兰染色克氏双糖铁斜面培养基动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基观察结果观察结果观察结果完成靛基质试验尿液离心沉淀分离培养革兰染色革兰染色克氏双糖铁斜37肛门拭子1/2EMB平板克氏双糖铁斜面培养基动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基观察结果观察结果完成靛基质试验玻片凝集试验肛门拭子1/2EMB平板克氏双糖铁斜面培养基动力-靛基质-尿381.EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基）组成：无糖培养基＋乳糖＋伊红＋美蓝底物指示剂、抑菌剂原理：细菌乳糖产酸：伊红＋美蓝紫黑/紫红结果：分解乳糖细菌菌落变黑，有金属光泽不分解乳糖细菌菌落无色、半透明（粉色）分解培养基原理1.EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基）分解培养基原理39EMBagarEMBagar402.靛基质试验（吲哚试验）组成：蛋白胨水＋色氨酸原理：分解某些细菌有色氨酸酶色氨酸吲哚（无色）＋柯氏试剂玫瑰吲哚（红色）结果：液面形成玫瑰红色2.靛基质试验（吲哚试验）41吲哚试验吲哚试验423.克氏双糖铁斜面培养基反应试验组成：无糖培基＋1份葡萄糖＋10份乳糖＋铁盐＋酚红营养底物底物底物指示剂原理：只分解葡萄糖产酸（葡萄糖少，产酸量少）分解葡萄糖＋乳糖产酸（乳糖多，产酸多）上下层均为黄色产生H2S＋铁盐FeS培养基成黑色上层氧化呈红色下层缺氧不氧化呈黄色3.克氏双糖铁斜面培养基反应试验上层氧化呈红色43DoublesugerironslantDoublesugerironslant444.尿素培养基组成：基础培基＋尿素＋酚红底物指示剂原理：有些细菌产生尿素酶分解尿素产氨结果：分解尿素培基变红不分解尿素培基不变色4.尿素培养基45UreaslantUreaslant46肥达试验(4人/组)材料：病人未知血清：1#，2#，3#菌液：O、H、PAH、PBH（已知Ag）每组1块多孔板，标记每人2支吸管肥达试验(4人/组)材料：病人未知血清：1#，2#，3#47123456OAgHAgPAHPBH123456OAgHAgPAHPBH48

123456 NS（ml）0.50.50.50.50.50.5 未知血清0.50.50.50.50.5(1:10)1:201:401:801:1601:320 菌液(摇匀) 0.50.50.50.50.50.5(4种，1种/人)1:40

1:80

1:160

1:320

1:640

(阴性对照)

37℃水浴过夜方法弃0.5ml于消毒缸 方法弃0.5ml于消毒缸49肥达试验H凝集：絮状，以疏松大团沉于管底O凝集：颗粒状，以坚实凝片沉于管底凝集程度的判定以“＋”、“－”号表示＋＋＋＋上清完全透明，细菌全部形成凝集块＋＋＋细菌绝大多数凝集，液体有轻度混浊＋＋50％细菌形成凝集，液体半澄清＋仅少数细菌凝集，液体比较混浊－液体均匀混浊，无凝集（沉于管底，形成圆形沉淀，边缘整齐）肥达试验H凝集：絮状，以疏松大团沉于管底50以呈现＋＋凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝集效价12345