第三章-染色体工程与植物育种课件

第三章染色体工程与植物育种

第三章染色体工程与植物育种1植物染色体工程的用途十分广泛，主要用在基因定位和异源基因的导入。我国自80年代开始进行染色体工程育种研究，经过“六五”和“七五”协作攻关，在小麦染色体工程育种方面有较大进展，创制了小麦与黑麦(Secalecereals)、山羊草(Aegilopstauschii)、簇毛麦(Haynaldiavillosa)、大麦(Hodeumvulgare)、类麦(Thinopyrum)等近缘种、属的双二倍体，转育了不同生态型的小麦单体系统和缺体系统，选育出了多种异附加系、异代换系和易位系。这是一批十分有用的染色体工程基础材料，是选育小麦良种的宝贵资源。

植物染色体工程的用途十分广泛，主要用在基因定位和异源基因的导2本章内容提要第一节染色体工程的一般概念和主要内容第二节染色体组水平的操纵技术第三节染色体水平的细胞遗传学操纵第四节染色体片段的细胞遗传学操纵第五节染色体微切割和人工染色体第六节染色体工程和作物育种本章内容提要第一节染色体工程的一般概念和主要内容3第一节染色体工程的一般概念和主要内容

一、概念二、亲缘关系远近与遗传操作策略三、染色体的操纵的三个水平第一节染色体工程的一般概念和主要内容一、概念4一、染色体工程概念该术语最早由里克（Rick）和库升（Khush）于1966年在论述番茄单体、三体和缺体时提出的。染色体工程：按照人们预定目标，采用一定的方法和步骤，通过染色体操纵改变生物染色体组，并进而改变其遗传性的过程。——陈佩度染色体工程：是人们按照一定的设计，有计划地消减、添加或代换同种或异种染色体，从而达到定向改变遗传性和选育新品种的一种技术。——李志勇染色体工程：指某一种植物的染色体或染色体片段按照人们的意愿进行添加、消减、代换或易位，从而达到定向改变植物遗传性的一项技术。——陈耀锋一、染色体工程概念该术语最早由里克（Rick）和库升（Khu5陈佩度本课教材编者陈佩度6狭义和广义染色体工程：狭义：指人工分离染色体或染色体片段，导入受体原生质体，再经过原生质体培养再生细胞壁、愈伤组织，直至再生出完整植株的过程。广义的还应包括应用细胞遗传学技术通过有性杂交和回交、细胞组织培养和体细胞杂交等方法，按预定目标有计划有步骤地转移染色体组、染色体或染色体片段。注：导入的染色体必须是有活力的，导入原生质后，又涉及到如何与受体染色体“共处”或“重组”问题。染色体工程在培育抗病新品种上有重要意义，而且是基因定位和染色体转移等基础研究的有效手段。狭义和广义染色体工程：7染色体组：生物体内维持生命活动所必须的一套非同源染色体（用x表示），它是遗传的生命单位。部分同源群：分别处于不同染色体组中，最早可能由同一条染色体演化而成的，具有不同程度同源关系的染色体互称为部分同源染色体并共同组成一个部分同源群。它们具有基本相似的核苷酸组成和排列次序，相互之间具有一定的补偿性。染色体组和部分同源群染色体组：生物体内维持生命活动所必须的一套非同源染色体（用x8二、亲缘关系远近与遗传操作策略

1、含有同源染色体组物种间的遗传操纵特点：有性杂交容易成功，F1雌雄配子的育性较好策略：采用一般的有性杂交技术，如果双亲间遗传性状差异大，要加大杂种群体、增加选择代数、或辅以花药花粉培养等技术诱导单倍体，然后加倍，加速形成纯合体。二、亲缘关系远近与遗传操作策略1、含有同源染色体组物种间的92、含有部分同源染色体组物种间的遗传操纵特点：没有相同的染色体组，但具有部分同源关系，有性杂交有难度，杂种后代双亲染色体间很少或基本不配对。策略：通过回交，育成异附加系或异代换系；通过操纵染色体配对控制体系（如小麦5B），可促进具有部分同源关系的染色体间配对，发生交换和重组；也可以通过理化因子或生物因子（如小麦近缘种中的杀配子基因）诱导染色体断裂、重接，产生易位。2、含有部分同源染色体组物种间的遗传操纵特点：没有相同的染色103、无同源染色体组物种间的遗传操纵特点：无同源性，有性杂交极其困难，或至今得不到有性杂种。策略：采用体细胞杂交技术获得体细胞杂种。3、无同源染色体组物种间的遗传操纵特点：无同源性，有性杂交极11三、染色体的操纵的三个水平

1、染色体组操纵：添加或消减同种或异种染色体组，合成双二倍体或部分双二倍体，或者创造单倍体。2、染色体操纵：整条染色体的附加、消除、代换，导入的染色体要有完整的着丝粒和端粒，以保持其结构稳定性和进行正常的复制分裂。三、染色体的操纵的三个水平1、染色体组操纵：添加或消减同种123、染色体片段操纵：指染色体片段的转移→易位、添加或消除。需要经过染色体断裂和重接，新形成的染色体具有且只具有一个着丝粒，而且染色体两端形成完好端粒。在育种中，不仅要求整组染色体、整条染色体或染色体片段的操纵成功，还要求经操纵后的个体在细胞遗传学上的稳定性，在遗传组成和形态特性上比原有亲本更加优良。3、染色体片段操纵：指染色体片段的转移→易位、添加或消除。需13第二节染色体组水平的操纵技术

一、远缘杂交障碍及克服途径二、染色体组的消减：即单倍体产生和二倍体化三、染色体组的添加——异源多倍体、同源多倍体等第二节染色体组水平的操纵技术一、远缘杂交障碍及克服途径14一、远缘杂交障碍及克服途径障碍：花粉萌发不好、花粉管伸长缓慢、雄配子不能顺利通过珠孔进入胚囊壳完成受精、远缘杂种的某亲本的染色体全部或部分消失、杂种灭亡和杂种不育。克服途径：使用失活的母本花粉、生长素类物质（2，4—D）或利用可交配基因和桥梁亲本，采取幼胚拯救和染色体加倍等措施。一、远缘杂交障碍及克服途径障碍：花粉萌发不好、花粉管伸长缓慢15二、染色体组的消减：即单倍体产生和二倍体化

1、单倍体：含有配子染色体数目的孢子体单倍体包括：（1）整倍体单倍体：一倍体、多倍单倍体（同源多倍单倍体、异源多倍单倍体）（2）非整倍体单倍体：二体单倍体（n+1）、附加单倍体（n+1′）、缺体单倍体（n-1）、置换单倍体（n-1+1′）二、染色体组的消减：即单倍体产生和二倍体化1、单倍体：含有162、单倍体的产生①自然产生：双生苗（多胚现象）、半配合（精、卵各自分裂→嵌合体）②诱发产生：远源杂交蒙导、延迟授粉、单倍体的诱发基因（大麦中的hap基因）和核质互作、利用合子发育过程中染色体消减，以及花药、花粉核未授粉的子房、胚珠培养等。3、二倍体化可自然加倍，但频率很低，一般需要人工加倍。目前最常用的方法是用秋水仙素处理在细胞分裂时期的分生组织，使其新生器官的染色体加倍。2、单倍体的产生174、单倍体在育种上的应用（1）提高选择效率，加速育种进程，因为单倍体的基因型核表现型是一致的，对于隐性基因控制的性状特别有效，常规杂交育种需要8～10年，而单倍体育种只须一个世代即可得到纯合二倍体。（2）加速纯系的获得，尤其对于玉米等异花授粉作物杂种优势利用来说具有特别重要意义。4、单倍体在育种上的应用18（3）利用花粉植株进行异源染色体或基因的转移，例如：小黑麦（AABBRR）×小麦（AABBDD）→F1（AABBRD）→R、D两组单体在减数分裂过程中将以0～7的各种可能出现于子细胞中。通过花粉培养可得到类型丰富的花粉植株，这些植株在遗传育种中具有重要的研究利用价值。（4）利用单倍体进行突变体的选择，由于单倍体没有显隐性关系，所以无论是培养过程中引起的体细胞变异还是在人工诱导产生的突变体，特别是隐性突变体，均可以有效地表现出来。（3）利用花粉植株进行异源染色体或基因的转移，例如：小黑麦（195、单倍体育种的不足（1）基因重组的机会只有一次，缺少常规杂交育种各个分离世代的基因交换与重组的机会，后代不能积累更多的优良基因。（2）单倍体诱导技术还不是很完善，花培出愈率和绿苗率均较低，单倍体群体小，很多优良基因可能被淘汰。5、单倍体育种的不足20三、染色体组的添加——异源多倍体、同源多倍体等

染色体组的添加可以自然发生，也可以人工诱导合成1、异源多倍体：在正常二倍体染色体组的基础上添加一个至多个异种染色体组的个体。如：小麦、燕麦、棉花等典型的例子是普通小麦和小黑麦三、染色体组的添加——异源多倍体、同源多倍体等染色体组的添21一粒小麦（AA）2n＝14×？（BB）AB染色体自然加倍二粒小麦（AABB）2n＝28×节节麦（DD）2n＝14ABD染色体自然加倍普通小麦（AABBDD）2n＝42一粒小麦（AA）2n＝14×？（BB）AB染色22普通小麦AABBDD×黑麦RRABDR（不育）染色体加倍AABBDDRR八倍体小黑麦普通小麦AABBDD×黑麦RRABDR（不育）染色体加倍23硬粒小麦（AABB）×黑麦（RR）ABR（不育）染色体加倍AABBRR（六倍体小黑麦）硬粒小麦（AABB）×黑麦（RR）ABR（不育）染色体加242、同源多倍体：在正常二倍体的染色体基础上添加一个至多个同种染色体组的个体。如：马铃薯等同源多倍体在有利基因剂量效应对植株的生长量和某些生物产物有促进作用。如三倍体甜菜、橡胶、香蕉、西瓜、草莓等。典型例子：三倍体无籽西瓜3、同源异源多倍体（如AAAAGG）是介于同源多倍体和异源多倍体之间的过渡类型。2、同源多倍体：在正常二倍体的染色体基础上添加一个至多个同种25典型例子：三倍体无籽西瓜二倍体西瓜（BB2n＝2x＝22）0.2%秋水仙素处理生长点四倍体西瓜（BBBB）♀×二倍体西瓜♂三倍体西瓜（BBB）（*不育，不结籽，在外界花粉刺激下可结实）典型例子：三倍体无籽西瓜二倍体西瓜（BB2n＝2x＝226第三章_染色体工程与植物育种课件27第三节染色体水平的细胞遗传学操纵

一、染色体的消减二、染色体的添加三、染色体的代换第三节染色体水平的细胞遗传学操纵一、染色体的消减28一、染色体的消减

从正常细胞中去掉一条染色体，染色体数变为（2n-1），叫做单体；去掉一对同源染色体，则叫缺体（2n-2）；如果去掉的是两条非同源染色体则称为双单体（2n-1-1）。除了消减正常的整条染色体外，还可以消减染色体的某一个臂，称为端体。单体在遗传上不稳定，自交后可分离出正常的二体、单体和缺体三种类型，除缺体外，多数单体和二体在外部形态上十分相似，直观上很难区分，必须进行细胞学观察，才能把单体植株挑选出来。因此，单体植株的保存很困难。一、染色体的消减从正常细胞中去掉一条染色体，染色体数变为（29第三章_染色体工程与植物育种课件30以小偃6号1D单体（含14＋15）作为受体与含有5＋10优质亚基的品种杂交，进行优质亚基聚合的染色体工程法。以小偃6号1D单体（含14＋15）作为受体与含有5＋10优质312D单体小麦与遗4212杂交F1出现的单价体2D单体小麦与遗4212杂交F1出现的单价体32箭头示双单体箭头示双单体334D缺体小麦PMC减数分裂MI2n=20Ⅱ八倍体小堰麦PMC减数分裂MI2n=28Ⅱ杂种F1根尖染色体2n=484D缺体小麦PMC减数分裂MI2n=20Ⅱ八倍体小堰麦PM34簇毛麦6VS端体：a,T240-6-1(2n=41+t);b,T240-6-1(2n=41+2t)

簇毛麦6VS端体：a,T240-6-1(2n=41+t);35第三章_染色体工程与植物育种课件36在染色体工程上，常用单体植物系统和缺体植物系统，它们是染色体工程和基因定位的重要材料。例如，已知某植物的某对性状是由A和a一对基因控制的，而且已获得该植物的所有单体或缺体，用单体法或缺体法确定A（a）基因所在的染色体。1、单体法2、缺体法单体、缺体在基因定位上的应用在染色体工程上，常用单体植物系统和缺体植物系统，它们是染色体371、单体法（1）若测定的二体植株的基因是隐性纯合时，则单体系列为显性。1、单体法38Pa表现型二体（n-1）Ⅱ+Ⅱaa×A表现型单体（n-1）Ⅱ+ⅠA

G（n-1）Ⅰ+Ⅰa（n-1）Ⅰ（n-1）Ⅰ+ⅠA

F1（n-1）Ⅱ+Ⅰa（n-1）Ⅱ+ⅡAa

所有单体为a表现型所有二体为A表现型

①若待测基因在某单体染色体上时，则aa基因型双体（2n）与A表现型的该染色体的单体（2n-1）杂交后，F1代表现型为：Pa表现型二体（n-1）Ⅱ+Ⅱaa×39②若待测基因不在某单体染色体上时，则F1表现型为：Pa表现型二体（n-1）Ⅱaa+Ⅱ×A表现型单体（n-1）ⅡAA+ⅠG（n-1）Ⅰa+Ⅰ（n-1）ⅠA（n-1）ⅠA+ⅠF1（n-1）ⅡAa+Ⅰ（n-1）ⅡAa+Ⅱ无论单体还是二体，均为A表现型

②若待测基因不在某单体染色体上时，则F1表现型为：Pa表40（2）若测定的基因为显性纯合时，则单体材料为隐性。

①若待测基因在某单体染色体上时，则AA基因型二体（2n）与a基因型的该染色体单体（2n-1）杂交后，F2代的分离情况为：

（2）若测定的基因为显性纯合时，则单体材料为隐性。①若待测41PA表现型二体（n-1）Ⅱ+ⅡAA×a表现型单体（n-1）Ⅱ+ⅠaG（n-1）Ⅰ+ⅠA（n-1）Ⅰ（n-1）Ⅰ+ⅠaF1（n-1）Ⅱ+ⅠA（n-1）Ⅱ+ⅡAa

F2（n-1）Ⅱ+ⅡAA（n-1）Ⅱ+ⅡAA（n-1）Ⅱ+ⅠA（n-1）Ⅱ+ⅡAa（n-1）Ⅱ（n-1）Ⅱ+Ⅱaa因缺体的生活力较弱，占很少一部分几乎全部为显性性状显隐性比例为3︰1自交

自交PA表现型二体（n-1）Ⅱ+ⅡAA×a表现型42②若待测基因不在某单体染色体上，则F2分离情况为：PA表现型二体（n-1）ⅡAA+Ⅱ×a表现型单体（n-1）Ⅱaa+ⅠG（n-1）ⅠA+Ⅰ（n-1）Ⅰa（n-1）Ⅰa+ⅠF1（n-1）ⅡAa+Ⅰ（n-1）Ⅱ+ⅡAa

自交自交F2（n-1）ⅡAA+Ⅱ（n-1）ⅡAa+Ⅱ（n-1）Ⅱaa+Ⅱ（n-1）ⅡAA+Ⅰ（n-1）ⅡAa+Ⅰ（n-1）Ⅱaa+Ⅰ（n-1）ⅡAA

（n-1）ⅡAa（n-1）Ⅱaa

显隐性比例为3︰1

（n-1）ⅡAA+Ⅱ（n-1）ⅡAa+Ⅱ（n-1）Ⅱaa+Ⅱ显隐性比例为3︰1②若待测基因不在某单体染色体上，则F2分离情况为：PA43Pa表现型二体（n-1）Ⅱ+Ⅱaa×缺体（n-1）ⅡF1（n-1）Ⅱ+Ⅰa

全部为a表现型的单体

自交F2（n-1）Ⅱ+Ⅱaa（n-1）Ⅱ+Ⅰa（n-1）Ⅱ2、缺体法（1）若待测定的是隐性基因a，则用显性缺体系统①若待测基因a在缺体染色体上，则：Pa表现型二体（n-1）Ⅱ+Ⅱaa×缺44②若待测基因a不在缺体染色体上，则：Pa表现型二体（n-1）Ⅱaa+Ⅱ×缺体（n-1）ⅡAA

F1（n-1）ⅡAa+Ⅰ全部为A表现型的单体F2（n-1）ⅡAA+Ⅱ（n-1）ⅡAa+Ⅱ（n-1）Ⅱaa+Ⅱ（n-1）ⅡAA+Ⅰ（n-1）ⅡAa+Ⅰ（n-1）Ⅱaa+Ⅰ（n-1）ⅡAA（n-1）ⅡAa（n-1）Ⅱaa

显隐性比例为3︰1

自交②若待测基因a不在缺体染色体上，则：Pa表现型二体（n45（2）若测定的是显性基因A，则用隐性缺体系统①若待测基因A在缺体染色体上，则：PA表现型二体（n-1）Ⅱ+ⅡAA×缺体（n-1）ⅡF1（n-1）Ⅱ+ⅠAF2（n-1）Ⅱ+ⅡAA

（n-1）Ⅱ+ⅠA（n-1）Ⅱ缺体很少，几乎全是显性

自交

（2）若测定的是显性基因A，则用隐性缺体系统PA表现型二46②若待测基因A不在缺体染色体上，则：PA表现型二体（n-1）ⅡAA+Ⅱ×缺体（n-1）Ⅱaa

F1（n-1）ⅡAa+ⅠF2（n-1）ⅡAA+Ⅱ（n-1）ⅡAA+Ⅰ（n-1）ⅡAA

（n-1）ⅡAa+Ⅱ（n-1）ⅡAA+Ⅰ（n-1）ⅡAa（n-1）Ⅱaa+Ⅱ（n-1）Ⅱaa+Ⅰ（n-1）Ⅱaa

无论单体、缺体、二体，显隐性比例均为3︰1自交②若待测基因A不在缺体染色体上，则：PA表现型二体（47除了用单、缺体进行基因定位外，端体也是进行基因定位的好材料，端体分析法基因定位，不仅能将基因定位在特定的染色体上，而且能定位在特定染色体的某一个臂上。（但较复杂）除了用单、缺体进行基因定位外，端体也是进行基因定位的好材料，48二、染色体的添加

一个种的染色体组经过杂交或其它方法导入同种或异种染色体叫染色体的添加。1、同种染色体的添加：在原来正常染色体数的基础上添加了一条或一对同种染色体（1）三体：指同源染色体为三条的个体,三体作为遗传工程的基础材料在理论和实践上都有重要的意义，可用来进行基因定位，并在育种实践中发挥作用。二、染色体的添加一个种的染色体组经过杂交或其它方法导入同种49结球甘蓝1号和4号染色体三体核型结球甘蓝1号和4号染色体三体核型50菜薹7号染色体三体菜薹7号染色体三体51陆地棉三体PMC：25Ⅱ+3Ⅰ陆地棉三体PMC：25Ⅱ+3Ⅰ52①基因定位，例如若待测隐性基因a在三体染色体上，则：Pa突变纯合二体（n-1）Ⅱ+Ⅱaa×三体（n-1）Ⅱ+ⅢAAA

G（n-1）Ⅰ+Ⅰa（n-1）Ⅰ+ⅠA（n-1）Ⅰ+ⅡAA

F1（n-1）Ⅱ+ⅡAa（n-1）Ⅱ+ⅢAAa

自交自交F2显隐性比例为3︰1显隐性比例为35︰1

①基因定位，例如Pa突变纯合二体（n-1）Ⅱ+Ⅱaa53若待测隐性基因a不在三体染色体上，则：Pa突变纯合二体（n-1）Ⅱaa+Ⅱ×三体（n-1）ⅡAA+ⅢG（n-1）Ⅰa+Ⅰ（n-1）ⅠA+Ⅰ（n-1）ⅠA+ⅡF1（n-1）ⅡAa+Ⅱ（n-1）ⅡAa+Ⅲ自交自交F2显隐性比例为3︰1显隐性比例为3︰1若待测隐性基因a不在三体染色体上，则：Pa突变纯合二体54②三体在育种实践上最成功的实例是大麦核不育系的杂交三级三体大麦的保持和利用

②三体在育种实践上最成功的实例是大麦核不育系的杂交三级三体55（2）四体：指某同源染色体为4条的个体，是研究剂量效应的特殊材料。人们对四体研究不多，但补偿性的缺体——四体具有特殊的作用而被人们重视，在小麦中比较典型。谷子四体（2）四体：指某同源染色体为4条的个体，是研究剂量效应的特殊562、异种染色体的添加——异附加系异附加系：添加有外源染色体的个体。又分为：单体异附加系、二体异附加系。双单体异附加系、双二体异附加系等（1）异附加系的产生：常用方法是栽培物种与亲缘物种或通过桥梁亲本再与亲缘物种杂交，再用受体亲本与F1或F1加倍成的双倍体回交一至数次，选出附加单体，再经自交即产生。（详见P65～66）2、异种染色体的添加——异附加系57抗白粉病八倍体小偃麦和双体附加系的鉴定Fig10、山农Line15根尖染色体荧光原位杂交（箭头所示微附加系中的中间偃麦草染色体）抗白粉病八倍体小偃麦和双体附加系的鉴定58抗大麦黄矮病毒的RAPD特异带左边第一个：中间偃麦草，第三～第八个，含抗病基因第二个：77－5433，不含抗病基因。抗大麦黄矮病毒的RAPD特异带59（2）异附加系的鉴定：形态标记染色体计数和染色体构型分析、染色体分带、生化标记（同工酶和蛋白质）、分子标记、原位杂交等方法鉴定异附加系。（3）异附加系的应用：生产中尚没有可直接利用的异附加系，原因主要是细胞学上不稳定、遗传学上不平衡，在导入携带有利基因的整条染色体时不可避免地带入该染色体的许多不利基因。优点：①是培育代换系和易位系的有用中间材料；②是研究染色体组亲缘关系、物种起源进化、基因互作、基因表达的有用遗传材料；③利用连锁标记生产杂交小麦种子等。（2）异附加系的鉴定：形态标记染色体计数和染色体构型分析、染60三、染色体的代换

由外源染色体代换受体品种染色体的个体称异代换系。通常发生在同一个部分同源群内的不同染色体之间，又分为单体异代换系、二体异代换系等，根据代换的染色体不同，可分为同种染色体的代换和异种染色体的代换，同种染色体的代换系通常可以直接作为品种使用，而异种染色体的代换系通常是转移有利基因的有效的中间材料。三、染色体的代换由外源染色体代换受体品种染色体的个体称异代61遗4212C-分带分析，箭头示2D染色体被携带抗黄矮病基因的中间偃麦草染色体代换遗4212C-分带分析，箭头示2D染色体被携带抗黄矮病基62GISH检测蓝粒小麦中含有长穗偃麦草的染色体片段和染色体GISH检测蓝粒小麦中含有长穗偃麦草的染色体片段和染色体63（一）异代换系的产生（1）在远缘杂交的回交、自交过程中自发产生（2）在选育异附加系过程中，由于产生n-1+1配子而产生（3）利用缺体或单体×异附加系，再自交，也可产生异代换系（一）异代换系的产生64第三章_染色体工程与植物育种课件65（二）异代换系的鉴定与异附加系的鉴定方法相同，但由于染色体数不发生变化，所以一般不能通过染色体计数来鉴定异代换系，必须辅助减数分裂期染色体配子对分析进行。（三）异代换系的应用（1）可在生产上直接利用，如小麦Lovlin13（1B/1R代换系）（2）用代换系来转移有用基因，培育易位系比用附加系有优势（3）在基因定位、研究基因效应、基因互作方面有特殊优越性（特别是整套代换系）（二）异代换系的鉴定66第四节染色体片段的细胞遗传学操纵

一、诱导染色体片段转移的方法二、易位系的鉴定三、易位系的利用第四节染色体片段的细胞遗传学操纵一、诱导染色体片段转移67转移外源基因较理想的方法是导入携有有利基因的染色体片段，而且伴随的额外染色体物质愈少愈好（最理想就是转基因了）易位系：指某物种的一段染色体和另一物种的相应染色体节段发生交换后，基因连锁群也随之发生改变而产生的新类型。转移外源基因较理想的方法是导入携有有利基因的染色体片段，而且68一、诱导染色体片段转移的方法

（一）辐射诱导易位，最常用的电离辐射。（二）用细胞、组织培养诱导染色体易位，原因可能与培养基中的某些成分和培养过程中的理化因素刺激有关，因此，组织培养结合理化诱变可大大提高变异体的频率，其中将会有不少易位。一、诱导染色体片段转移的方法（一）辐射诱导易位，最常用的电69（三）利用遗传控制体系诱导染色体易位——ph基因如在小麦5BL上的ph1基因抑制部分同源染色体之间配对，在5BS上存在染色体配对促进基因；还有3DS上的ph2基因，以及3A、4D、2A等上的一些微效抑制基因。因此有人认为，小麦染色体配对控制基因ph基因是主效基因，它还受位于5BS、5DL和5DS、3BL、3DL、2AS等上载有的促进染色体配对基因的制约，它是通过一套遗传体系来实现的。（三）利用遗传控制体系诱导染色体易位——ph基因70（四）利用杀配子基因诱导染色体易位所谓杀配子基因，乃是当载有这些基因的染色体处于半合杂合状态时，不含该染色体的雌雄配子无受精能力，而这些染色体自身则优先传递。还有研究认为小麦农林26的3B染色体上带有抑制杀配子效应的基因Igcl，该基因和杀配子基因（3S′、3C染色体上）互作，产生染色体断裂、重接，并可诱导易位。（四）利用杀配子基因诱导染色体易位71（五）利用着丝粒融合诱发易位，以及利用“染色体组重建”基因诱发易位在减数分裂时，两个非同源的单价染色体同时发生错分裂，产生端着丝粒染色体。由这些非同源染色体形成的新端着丝粒染色体融合而形成的易位叫罗伯逊易位。“染色体组重建”基因能诱发高频率的染色体断裂和重接。如，在玉米中有一种与染色体重排有关的系统——X组分，在高大山羊草品系中，发现一个调控基因组的基因，等等。（五）利用着丝粒融合诱发易位，以及利用“染色体组重建”基因诱72不管用什么方法诱导染色体易位，在育种上有用的易位最好是携带有用基因的小片段中间插入易位，它们在细胞学和遗传学上比较稳定且容易通过基因重组转入栽培品种并遗传给后代。不管用什么方法诱导染色体易位，在育种上有用的易位最好是携带有73二、易位系的鉴定

比代换系和附加系的鉴定要困难得多，尤其是小片段易位。使用的方法通常是染色体分带、分子原位杂交、生化标记和分子标记等。二、易位系的鉴定比代换系和附加系的鉴定要困难得多，尤其是小74通过C-分带鉴定小麦－簇毛麦6VS/6AL易位系通过C-分带鉴定小麦－簇毛麦6VS/6AL易位系75图A和图B:小麦-黑麦易位系BC152-1-1染色体的C-带(A)和GISH(B)图A和图B:小麦-黑麦易位系BC152-1-1染色体的C-76第三章_染色体工程与植物育种课件77三、易位系的利用

（1）直接利用：一般是指具有优良遗传背景的易位系。如，具有1RS/1BL易位的许多小麦品种。（2）用作品种改良的亲本：指携有亲缘物种有用基因的易位系，如小麦—簇毛麦6Vs/6AL易位系。三、易位系的利用（1）直接利用：一般是指具有优良遗传背景的78第五节染色体微切割和人工染色体

一、染色体微切割二、人工染色体构建的依据第五节染色体微切割和人工染色体一、染色体微切割79一、染色体微切割

指在显微镜下利用特种工具对某个特定的染色体片断切割加工。要进行染色体微切割，首先要对染色体进行识别鉴定。又由于目标染色体片断DNA的量很少，或者由于目标基因大多数为单拷贝或寡拷贝，因此，常要借助PCR技术。目前，染色体微切割仍局限于构建特定染色体和特定染色体片段的微切割文库。一、染色体微切割指在显微镜下利用特种工具对某个特定的染色体80ChromosomesofChineseSpringstainedwithCarboFuchsin,Oneofchromosome6BindicatedinAwasmicrodissectedintoR1,R2,R3andR4sections(B)Barrepresents10µmChromosomesofChineseSpring81二、人工染色体构建的依据

着丝粒、端粒、复制起始点是真核生物染色体的三个最基本的组成元件。实际研究中常是根据不同的需要进行构建。如，酵母人工染色体（YAC）是目前容量最大的克隆载体，但遗传不稳定。细菌人工染色体（BAC）和P1克隆系列和源于P1的PAC可作为YAC的重要补充，但，它们都不能直接转化植物细胞。因此，又有人构建了双元细菌人工染色体（BIBAC）和可能转化人工染色体（TAC）。而上述这些人工染色体都是针对基因克隆存在的一些问题而设计的。在育种中可能真正有作用的人工染色体，如哺乳动物人工染色体（MAC）和植物人工染色体（PAC），还处在研究阶段中。二、人工染色体构建的依据着丝粒、端粒、复制起始点是真核生物82第六节染色体工程和作物育种

一、染色体工程中值得注意的问题二、应用染色体工程方法开展植物育种时应注意的几个方面第六节染色体工程和作物育种一、染色体工程中值得注意的问83一、染色体工程中值得注意的问题

（1）外源基因能否在受体中表达，与受体的遗传背景有关。（2）转移有利基因的同时不可避免地带入不利基因。一、染色体工程中值得注意的问题（1）外源基因能否在受体中表84二、应用染色体工程方法开展植物育种时应注意的几个方面

染色体工程的产品主要是新的遗传种质而不是品种，在创造出新的遗传种质之后，还必须通过常规育种方法或综合其它育种方法将外源基因组装到综合农艺性状好的亲本中去。为此，在应用染色体工程方法开展植物育种时应注意几个方面：（一）目标性状：是欠缺的或急需的，最好是单基因或寡基因控制；二、应用染色体工程方法开展植物育种时应注意的几个方面染色体85（二）初始亲本和回交亲本：选用最优异的系或单株作原始供体亲本，并尽可能分系或分单株保存；尽可能选用综合农艺性状较好的推广品种或优良品系作回交亲本，同时考虑长远的育种发展需要；（三）群体大小要看重组率高低、育种方法、质量或数量性状及显隐性、亲缘关系和基因互作关系等方面；（四）辅助分子或细胞学标记进行选择，通过加代，缩短育种年限。（二）初始亲本和回交亲本：选用最优异的系或单株作原始供体亲本86[复习思考题]：1、染色体工程的概念和主要内容是什么？2、单倍体在育种上的优势和不足分别是什么？3、三倍体无子西瓜是怎么形成的？4、如何应用单体缺体进行基因定位？5、三级三体大麦的保持和利用。6、YAC、BAC、BIBAC、TAC、MAC、PAC分别指什么？[复习思考题]：87第三章染色体工程与植物育种

第三章染色体工程与植物育种88植物染色体工程的用途十分广泛，主要用在基因定位和异源基因的导入。我国自80年代开始进行染色体工程育种研究，经过“六五”和“七五”协作攻关，在小麦染色体工程育种方面有较大进展，创制了小麦与黑麦(Secalecereals)、山羊草(Aegilopstauschii)、簇毛麦(Haynaldiavillosa)、大麦(Hodeumvulgare)、类麦(Thinopyrum)等近缘种、属的双二倍体，转育了不同生态型的小麦单体系统和缺体系统，选育出了多种异附加系、异代换系和易位系。这是一批十分有用的染色体工程基础材料，是选育小麦良种的宝贵资源。

植物染色体工程的用途十分广泛，主要用在基因定位和异源基因的导89本章内容提要第一节染色体工程的一般概念和主要内容第二节染色体组水平的操纵技术第三节染色体水平的细胞遗传学操纵第四节染色体片段的细胞遗传学操纵第五节染色体微切割和人工染色体第六节染色体工程和作物育种本章内容提要第一节染色体工程的一般概念和主要内容90第一节染色体工程的一般概念和主要内容

一、概念二、亲缘关系远近与遗传操作策略三、染色体的操纵的三个水平第一节染色体工程的一般概念和主要内容一、概念91一、染色体工程概念该术语最早由里克（Rick）和库升（Khush）于1966年在论述番茄单体、三体和缺体时提出的。染色体工程：按照人们预定目标，采用一定的方法和步骤，通过染色体操纵改变生物染色体组，并进而改变其遗传性的过程。——陈佩度染色体工程：是人们按照一定的设计，有计划地消减、添加或代换同种或异种染色体，从而达到定向改变遗传性和选育新品种的一种技术。——李志勇染色体工程：指某一种植物的染色体或染色体片段按照人们的意愿进行添加、消减、代换或易位，从而达到定向改变植物遗传性的一项技术。——陈耀锋一、染色体工程概念该术语最早由里克（Rick）和库升（Khu92陈佩度本课教材编者陈佩度93狭义和广义染色体工程：狭义：指人工分离染色体或染色体片段，导入受体原生质体，再经过原生质体培养再生细胞壁、愈伤组织，直至再生出完整植株的过程。广义的还应包括应用细胞遗传学技术通过有性杂交和回交、细胞组织培养和体细胞杂交等方法，按预定目标有计划有步骤地转移染色体组、染色体或染色体片段。注：导入的染色体必须是有活力的，导入原生质后，又涉及到如何与受体染色体“共处”或“重组”问题。染色体工程在培育抗病新品种上有重要意义，而且是基因定位和染色体转移等基础研究的有效手段。狭义和广义染色体工程：94染色体组：生物体内维持生命活动所必须的一套非同源染色体（用x表示），它是遗传的生命单位。部分同源群：分别处于不同染色体组中，最早可能由同一条染色体演化而成的，具有不同程度同源关系的染色体互称为部分同源染色体并共同组成一个部分同源群。它们具有基本相似的核苷酸组成和排列次序，相互之间具有一定的补偿性。染色体组和部分同源群染色体组：生物体内维持生命活动所必须的一套非同源染色体（用x95二、亲缘关系远近与遗传操作策略

1、含有同源染色体组物种间的遗传操纵特点：有性杂交容易成功，F1雌雄配子的育性较好策略：采用一般的有性杂交技术，如果双亲间遗传性状差异大，要加大杂种群体、增加选择代数、或辅以花药花粉培养等技术诱导单倍体，然后加倍，加速形成纯合体。二、亲缘关系远近与遗传操作策略1、含有同源染色体组物种间的962、含有部分同源染色体组物种间的遗传操纵特点：没有相同的染色体组，但具有部分同源关系，有性杂交有难度，杂种后代双亲染色体间很少或基本不配对。策略：通过回交，育成异附加系或异代换系；通过操纵染色体配对控制体系（如小麦5B），可促进具有部分同源关系的染色体间配对，发生交换和重组；也可以通过理化因子或生物因子（如小麦近缘种中的杀配子基因）诱导染色体断裂、重接，产生易位。2、含有部分同源染色体组物种间的遗传操纵特点：没有相同的染色973、无同源染色体组物种间的遗传操纵特点：无同源性，有性杂交极其困难，或至今得不到有性杂种。策略：采用体细胞杂交技术获得体细胞杂种。3、无同源染色体组物种间的遗传操纵特点：无同源性，有性杂交极98三、染色体的操纵的三个水平

1、染色体组操纵：添加或消减同种或异种染色体组，合成双二倍体或部分双二倍体，或者创造单倍体。2、染色体操纵：整条染色体的附加、消除、代换，导入的染色体要有完整的着丝粒和端粒，以保持其结构稳定性和进行正常的复制分裂。三、染色体的操纵的三个水平1、染色体组操纵：添加或消减同种993、染色体片段操纵：指染色体片段的转移→易位、添加或消除。需要经过染色体断裂和重接，新形成的染色体具有且只具有一个着丝粒，而且染色体两端形成完好端粒。在育种中，不仅要求整组染色体、整条染色体或染色体片段的操纵成功，还要求经操纵后的个体在细胞遗传学上的稳定性，在遗传组成和形态特性上比原有亲本更加优良。3、染色体片段操纵：指染色体片段的转移→易位、添加或消除。需100第二节染色体组水平的操纵技术

一、远缘杂交障碍及克服途径二、染色体组的消减：即单倍体产生和二倍体化三、染色体组的添加——异源多倍体、同源多倍体等第二节染色体组水平的操纵技术一、远缘杂交障碍及克服途径101一、远缘杂交障碍及克服途径障碍：花粉萌发不好、花粉管伸长缓慢、雄配子不能顺利通过珠孔进入胚囊壳完成受精、远缘杂种的某亲本的染色体全部或部分消失、杂种灭亡和杂种不育。克服途径：使用失活的母本花粉、生长素类物质（2，4—D）或利用可交配基因和桥梁亲本，采取幼胚拯救和染色体加倍等措施。一、远缘杂交障碍及克服途径障碍：花粉萌发不好、花粉管伸长缓慢102二、染色体组的消减：即单倍体产生和二倍体化

1、单倍体：含有配子染色体数目的孢子体单倍体包括：（1）整倍体单倍体：一倍体、多倍单倍体（同源多倍单倍体、异源多倍单倍体）（2）非整倍体单倍体：二体单倍体（n+1）、附加单倍体（n+1′）、缺体单倍体（n-1）、置换单倍体（n-1+1′）二、染色体组的消减：即单倍体产生和二倍体化1、单倍体：含有1032、单倍体的产生①自然产生：双生苗（多胚现象）、半配合（精、卵各自分裂→嵌合体）②诱发产生：远源杂交蒙导、延迟授粉、单倍体的诱发基因（大麦中的hap基因）和核质互作、利用合子发育过程中染色体消减，以及花药、花粉核未授粉的子房、胚珠培养等。3、二倍体化可自然加倍，但频率很低，一般需要人工加倍。目前最常用的方法是用秋水仙素处理在细胞分裂时期的分生组织，使其新生器官的染色体加倍。2、单倍体的产生1044、单倍体在育种上的应用（1）提高选择效率，加速育种进程，因为单倍体的基因型核表现型是一致的，对于隐性基因控制的性状特别有效，常规杂交育种需要8～10年，而单倍体育种只须一个世代即可得到纯合二倍体。（2）加速纯系的获得，尤其对于玉米等异花授粉作物杂种优势利用来说具有特别重要意义。4、单倍体在育种上的应用105（3）利用花粉植株进行异源染色体或基因的转移，例如：小黑麦（AABBRR）×小麦（AABBDD）→F1（AABBRD）→R、D两组单体在减数分裂过程中将以0～7的各种可能出现于子细胞中。通过花粉培养可得到类型丰富的花粉植株，这些植株在遗传育种中具有重要的研究利用价值。（4）利用单倍体进行突变体的选择，由于单倍体没有显隐性关系，所以无论是培养过程中引起的体细胞变异还是在人工诱导产生的突变体，特别是隐性突变体，均可以有效地表现出来。（3）利用花粉植株进行异源染色体或基因的转移，例如：小黑麦（1065、单倍体育种的不足（1）基因重组的机会只有一次，缺少常规杂交育种各个分离世代的基因交换与重组的机会，后代不能积累更多的优良基因。（2）单倍体诱导技术还不是很完善，花培出愈率和绿苗率均较低，单倍体群体小，很多优良基因可能被淘汰。5、单倍体育种的不足107三、染色体组的添加——异源多倍体、同源多倍体等

染色体组的添加可以自然发生，也可以人工诱导合成1、异源多倍体：在正常二倍体染色体组的基础上添加一个至多个异种染色体组的个体。如：小麦、燕麦、棉花等典型的例子是普通小麦和小黑麦三、染色体组的添加——异源多倍体、同源多倍体等染色体组的添108一粒小麦（AA）2n＝14×？（BB）AB染色体自然加倍二粒小麦（AABB）2n＝28×节节麦（DD）2n＝14ABD染色体自然加倍普通小麦（AABBDD）2n＝42一粒小麦（AA）2n＝14×？（BB）AB染色109普通小麦AABBDD×黑麦RRABDR（不育）染色体加倍AABBDDRR八倍体小黑麦普通小麦AABBDD×黑麦RRABDR（不育）染色体加倍110硬粒小麦（AABB）×黑麦（RR）ABR（不育）染色体加倍AABBRR（六倍体小黑麦）硬粒小麦（AABB）×黑麦（RR）ABR（不育）染色体加1112、同源多倍体：在正常二倍体的染色体基础上添加一个至多个同种染色体组的个体。如：马铃薯等同源多倍体在有利基因剂量效应对植株的生长量和某些生物产物有促进作用。如三倍体甜菜、橡胶、香蕉、西瓜、草莓等。典型例子：三倍体无籽西瓜3、同源异源多倍体（如AAAAGG）是介于同源多倍体和异源多倍体之间的过渡类型。2、同源多倍体：在正常二倍体的染色体基础上添加一个至多个同种112典型例子：三倍体无籽西瓜二倍体西瓜（BB2n＝2x＝22）0.2%秋水仙素处理生长点四倍体西瓜（BBBB）♀×二倍体西瓜♂三倍体西瓜（BBB）（*不育，不结籽，在外界花粉刺激下可结实）典型例子：三倍体无籽西瓜二倍体西瓜（BB2n＝2x＝2113第三章_染色体工程与植物育种课件114第三节染色体水平的细胞遗传学操纵

一、染色体的消减二、染色体的添加三、染色体的代换第三节染色体水平的细胞遗传学操纵一、染色体的消减115一、染色体的消减

从正常细胞中去掉一条染色体，染色体数变为（2n-1），叫做单体；去掉一对同源染色体，则叫缺体（2n-2）；如果去掉的是两条非同源染色体则称为双单体（2n-1-1）。除了消减正常的整条染色体外，还可以消减染色体的某一个臂，称为端体。单体在遗传上不稳定，自交后可分离出正常的二体、单体和缺体三种类型，除缺体外，多数单体和二体在外部形态上十分相似，直观上很难区分，必须进行细胞学观察，才能把单体植株挑选出来。因此，单体植株的保存很困难。一、染色体的消减从正常细胞中去掉一条染色体，染色体数变为（116第三章_染色体工程与植物育种课件117以小偃6号1D单体（含14＋15）作为受体与含有5＋10优质亚基的品种杂交，进行优质亚基聚合的染色体工程法。以小偃6号1D单体（含14＋15）作为受体与含有5＋10优质1182D单体小麦与遗4212杂交F1出现的单价体2D单体小麦与遗4212杂交F1出现的单价体119箭头示双单体箭头示双单体1204D缺体小麦PMC减数分裂MI2n=20Ⅱ八倍体小堰麦PMC减数分裂MI2n=28Ⅱ杂种F1根尖染色体2n=484D缺体小麦PMC减数分裂MI2n=20Ⅱ八倍体小堰麦PM121簇毛麦6VS端体：a,T240-6-1(2n=41+t);b,T240-6-1(2n=41+2t)

簇毛麦6VS端体：a,T240-6-1(2n=41+t);122第三章_染色体工程与植物育种课件123在染色体工程上，常用单体植物系统和缺体植物系统，它们是染色体工程和基因定位的重要材料。例如，已知某植物的某对性状是由A和a一对基因控制的，而且已获得该植物的所有单体或缺体，用单体法或缺体法确定A（a）基因所在的染色体。1、单体法2、缺体法单体、缺体在基因定位上的应用在染色体工程上，常用单体植物系统和缺体植物系统，它们是染色体1241、单体法（1）若测定的二体植株的基因是隐性纯合时，则单体系列为显性。1、单体法125Pa表现型二体（n-1）Ⅱ+Ⅱaa×A表现型单体（n-1）Ⅱ+ⅠA

G（n-1）Ⅰ+Ⅰa（n-1）Ⅰ（n-1）Ⅰ+ⅠA

F1（n-1）Ⅱ+Ⅰa（n-1）Ⅱ+ⅡAa

所有单体为a表现型所有二体为A表现型

①若待测基因在某单体染色体上时，则aa基因型双体（2n）与A表现型的该染色体的单体（2n-1）杂交后，F1代表现型为：Pa表现型二体（n-1）Ⅱ+Ⅱaa×126②若待测基因不在某单体染色体上时，则F1表现型为：Pa表现型二体（n-1）Ⅱaa+Ⅱ×A表现型单体（n-1）ⅡAA+ⅠG（n-1）Ⅰa+Ⅰ（n-1）ⅠA（n-1）ⅠA+ⅠF1（n-1）ⅡAa+Ⅰ（n-1）ⅡAa+Ⅱ无论单体还是二体，均为A表现型

②若待测基因不在某单体染色体上时，则F1表现型为：Pa表127（2）若测定的基因为显性纯合时，则单体材料为隐性。

①若待测基因在某单体染色体上时，则AA基因型二体（2n）与a基因型的该染色体单体（2n-1）杂交后，F2代的分离情况为：

（2）若测定的基因为显性纯合时，则单体材料为隐性。①若待测128PA表现型二体（n-1）Ⅱ+ⅡAA×a表现型单体（n-1）Ⅱ+ⅠaG（n-1）Ⅰ+ⅠA（n-1）Ⅰ（n-1）Ⅰ+ⅠaF1（n-1）Ⅱ+ⅠA（n-1）Ⅱ+ⅡAa

F2（n-1）Ⅱ+ⅡAA（n-1）Ⅱ+ⅡAA（n-1）Ⅱ+ⅠA（n-1）Ⅱ+ⅡAa（n-1）Ⅱ（n-1）Ⅱ+Ⅱaa因缺体的生活力较弱，占很少一部分几乎全部为显性性状显隐性比例为3︰1自交

自交PA表现型二体（n-1）Ⅱ+ⅡAA×a表现型129②若待测基因不在某单体染色体上，则F2分离情况为：PA表现型二体（n-1）ⅡAA+Ⅱ×a表现型单体（n-1）Ⅱaa+ⅠG（n-1）ⅠA+Ⅰ（n-1）Ⅰa（n-1）Ⅰa+ⅠF1（n-1）ⅡAa+Ⅰ（n-1）Ⅱ+ⅡAa

自交自交F2（n-1）ⅡAA+Ⅱ（n-1）ⅡAa+Ⅱ（n-1）Ⅱaa+Ⅱ（n-1）ⅡAA+Ⅰ（n-1）ⅡAa+Ⅰ（n-1）Ⅱaa+Ⅰ（n-1）ⅡAA

（n-1）ⅡAa（n-1）Ⅱaa

显隐性比例为3︰1

（n-1）ⅡAA+Ⅱ（n-1）ⅡAa+Ⅱ（n-1）Ⅱaa+Ⅱ显隐性比例为3︰1②若待测基因不在某单体染色体上，则F2分离情况为：PA130Pa表现型二体（n-1）Ⅱ+Ⅱaa×缺体（n-1）ⅡF1（n-1）Ⅱ+Ⅰa

全部为a表现型的单体

自交F2（n-1）Ⅱ+Ⅱaa（n-1）Ⅱ+Ⅰa（n-1）Ⅱ2、缺体法（1）若待测定的是隐性基因a，则用显性缺体系统①若待测基因a在缺体染色体上，则：Pa表现型二体（n-1）Ⅱ+Ⅱaa×缺131②若待测基因a不在缺体染色体上，则：Pa表现型二体（n-1）Ⅱaa+Ⅱ×缺体（n-1）ⅡAA

F1（n-1）ⅡAa+Ⅰ全部为A表现型的单体F2（n-1）ⅡAA+Ⅱ（n-1）ⅡAa+Ⅱ（n-1）Ⅱaa+Ⅱ（n-1）ⅡAA+Ⅰ（n-1）ⅡAa+Ⅰ（n-1）Ⅱaa+Ⅰ（n-1）ⅡAA（n-1）ⅡAa（n-1）Ⅱaa

显隐性比例为3︰1

自交②若待测基因a不在缺体染色体上，则：Pa表现型二体（n132（2）若测定的是显性基因A，则用隐性缺体系统①若待测基因A在缺体染色体上，则：PA表现型二体（n-1）Ⅱ+ⅡAA×缺体（n-1）ⅡF1（n-1）Ⅱ+ⅠAF2（n-1）Ⅱ+ⅡAA

（n-1）Ⅱ+ⅠA（n-1）Ⅱ缺体很少，几乎全是显性

自交

（2）若测定的是显性基因A，则用隐性缺体系统PA表现型二133②若待测基因A不在缺体染色体上，则：PA表现型二体（n-1）ⅡAA+Ⅱ×缺体（n-1）Ⅱaa

F1（n-1）ⅡAa+ⅠF2（n-1）ⅡAA+Ⅱ（n-1）ⅡAA+Ⅰ（n-1）ⅡAA

（n-1）ⅡAa+Ⅱ（n-1）ⅡAA+Ⅰ（n-1）ⅡAa（n-1）Ⅱaa+Ⅱ（n-1）Ⅱaa+Ⅰ（n-1）Ⅱaa

无论单体、缺体、二体，显隐性比例均为3︰1自交②若待测基因A不在缺体染色体上，则：PA表现型二体（134除了用单、缺体进行基因定位外，端体也是进行基因定位的好材料，端体分析法基因定位，不仅能将基因定位在特定的染色体上，而且能定位在特定染色体的某一个臂上。（但较复杂）除了用单、缺体进行基因定位外，端体也是进行基因定位的好材料，135二、染色体的添加

一个种的染色体组经过杂交或其它方法导入同种或异种染色体叫染色体的添加。1、同种染色体的添加：在原来正常染色体数的基础上添加了一条或一对同种染色体（1）三体：指同源染色体为三条的个体,三体作为遗传工程的基础材料在理论和实践上都有重要的意义，可用来进行基因定位，并在育种实践中发挥作用。二、染色体的添加一个种的染色体组经过杂交或其它方法导入同种136结球甘蓝1号和4号染色体三体核型结球甘蓝1号和4号染色体三体核型137菜薹7号染色体三体菜薹7号染色体三体138陆地棉三体PMC：25Ⅱ+3Ⅰ陆地棉三体PMC：25Ⅱ+3Ⅰ139①基因定位，例如若待测隐性基因a在三体染色体上，则：Pa突变纯合二体（n-1）Ⅱ+Ⅱaa×三体（n-1）Ⅱ+ⅢAAA

G（n-1）Ⅰ+Ⅰa（n-1）Ⅰ+ⅠA（n-1）Ⅰ+ⅡAA

F1（n-1）Ⅱ+ⅡAa（n-1）Ⅱ+ⅢAAa

自交自交F2显隐性比例为3︰1显隐性比例为35︰1

①基因定位，例如Pa突变纯合二体（n-1）Ⅱ+Ⅱaa140若待测隐性基因a不在三体染色体上，则：Pa突变纯合二体（n-1）Ⅱaa+Ⅱ×三体（n-1）ⅡAA+ⅢG（n-1）Ⅰa+Ⅰ（n-1）ⅠA+Ⅰ（n-1）ⅠA+ⅡF1（n-1）ⅡAa+Ⅱ（n-1）ⅡAa+Ⅲ自交自交F2显隐性比例为3︰1显隐性比例为3︰1若待测隐性基因a不在三体染色体上，则：Pa突变纯合二体141②三体在育种实践上最成功的实例是大麦核不育系的杂交三级三体大麦的保持和利用

②三体在育种实践上最成功的实例是大麦核不育系的杂交三级三体142（2）四体：指某同源染色体为4条的个体，是研究剂量效应的特殊材料。人们对四体研究不多，但补偿性的缺体——四体具有特殊的作用而被人们重视，在小麦中比较典型。谷子四体（2）四体：指某同源染色体为4条的个体，是研究剂量效应的特殊1432、异种染色体的添加——异附加系异附加系：添加有外源染色体的个体。又分为：单体异附加系、二体异附加系。双单体异附加系、双二体异附加系等（1）异附加系的产生：常用方法是栽培物种与亲缘物种或通过桥梁亲本再与亲缘物种杂交，再用受体亲本与F1或F1加倍成的双倍体回交一至数次，选出附加单体，再经自交即产生。（详见P65～66）2、异种染色体的添加——异附加系144抗白粉病八倍体小偃麦和双体附加系的鉴定Fig10、山农Line15根尖染色体荧光原位杂交（箭头所示微附加系中的中间偃麦草染色体）抗白粉病八倍体小偃麦和双体附加系的鉴定145抗大麦黄矮病毒的RAPD特异带左边第一个：中间偃麦草，第三～第八个，含抗病基因第二个：77－5433，不含抗病基因。抗大麦黄矮病毒的RAPD特异带146（2）异附加系的鉴定：形态标记染色体计数和染色体构型分析、染色体分带、生化标记（同工酶和蛋白质）、分子标记、原位杂交等方法鉴定异附加系。（3）异附加系的应用：生产中尚没有可直接利用的异附加系，原因主要是细胞学上不稳定、遗传学上不平衡，在导入携带有利基因的整条染色体时不可避免地带入该染色体的许多不利基因。优点：①是培育代换系和易位系的有用中间材料；②是研究染色体组亲缘关系、物种起源进化、基因互作、基因表达的有用遗传材料；③利用连锁标记生产杂交小麦种子等。（2）异附加系的鉴定：形态标记染色体计数和染色体构型分析、染147三、染色体的代换

由外源染色体代换受体品种染色体的个体称异代换系。通常发生在同一个部分同源群内的不同染色体之间，又分为单体异代换系、二体异代换系等，根据代换的染色体不同，可分为同种染色体的代换和异种染色体的代换，同种染色体的代换系通常可以直接作为品种使用，而异种染色体的代换系通常是转移有利基因的有效的中间材料。三、染色体的代换由外源染色体代换受体品种染色体的个体称异代148遗4212C-分带分析，箭头示2D染色体被携带抗黄矮病基因的中间偃麦草染色体代换遗4212C-分带分析，箭头示2D染色体被携带抗黄矮病基149GISH检测蓝粒小麦中含有长穗偃麦草的染色体片段和染色体GISH检测蓝粒小麦中含有长穗偃麦草的染色体片段和染色体150（一）异代换系的产生（1）在远缘杂交的回交、自交过程中自发产生（2）在选育异附加系过程中，由于产生n-1+1配子而产生（3）利用缺体或单体×异附加系，再自交，也可产生异代换系（一）异代换系的产生151第三章_染色体工程与植物育种课件152（二）异代换系的鉴定与异附加系的鉴定方法相同，但由于染色体数不发生变化，所以一般不能通过染色体计数来鉴定异代换系，必须辅助减数分裂期染色体配子对分析进行。（三）异代换系的应用（1）可在生产上直接利用，如小麦Lovlin13（1B/1R代换系）（2）用代换系来转移有用基因，培育易位系比用附加系有优势（3）在基因定位、研究基因效应、基因互作方面有特殊优越性（特别是整套代换系）（二）异代换系的鉴定153第四节染色体片段的细胞遗传学操纵

一、诱导染色体片段转移的方法二、易位系的鉴定三、易位系的利用第四节染色体片段的细胞遗传学操纵一、诱导染色体片段转移154转移外源基因较理想的方法是导入携有有利基因的染色体片段，而且伴随的额外染色体物质愈少愈好（最理想就是转基因了）易位系：指某物种的一段染色体和另一物种的相应染色体节段发生交换后，基因连锁群也随之发生改变而产生的新类型。转移外源基因较理想的方法是导入携有有利基因的染色体片段，而且155一、诱导染色体片段转移的方法

（一）辐射诱导易位，最常用的电离辐射。（二）用细胞、组织培养诱导染色体易位，原因可能与培