病理组织切片制作技术课件

病理组织切片制作技术.病理组织切片制作技术.1实验内容

掌握组织材料的取材、固定、脱水、透明、包埋、切片、烤片、脱蜡、染色及封固的基本操作。.实验内容.2一、取材及固定（一）取材注意事项：

1、材料新鲜

2、组织块力求小而薄3、勿使组织块受挤压

4、尽量保持组织的原有形态5、熟悉取材部位.一、取材及固定（一）取材注意事项：.3（一）取材注意事项：6、选好组织块的切面7、保持材料的清洁8、切除不需要的部位.（一）取材注意事项：6、选好组织块的切面.4（二）固定及目的：应用化学试剂使组织或细胞中的无机成分和有机成分凝固或沉淀，以保持其生活状态的过程称为固定。.（二）固定及目的：应用化学试剂使组织5固定液是10%福尔马林溶液（4%甲醛溶液），固定24小时以上。.固定液是10%福尔马林溶液（4%甲醛6固定的目的1、迅速阻止组织、细胞死后变化，防止自溶与腐败，使之尽量保持生前的状态与结构。2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持其原有状态。3、使组织内各种物质成分产生不同的折光率，以便染色后易于鉴别和观察。4、使组织块硬化，便于制作薄片。.固定的目的.7固定的注意事项1、组织块不宜大，厚度小于5mm，长宽也应小于15×15mm。2、固定液与组织块的比例应大于10：1。3、软组织或较大组织块可先经2-3小时固定后再修整成小块，重新投入新配制的固定液中继续固定。4、肠道可在浆膜面贴上一层厚纸，以防固定组织变形。.固定的注意事项1、组织块不宜大，厚度小于5mm，长宽也应小于8二、固定后处理及切片(一)、洗涤与修切(二)、脱水与透明脱水：将组织块内水分置换的过程。透明：乙醇和石蜡不互溶，最常用的透明剂是二甲苯。既能溶于脱水剂又能溶于包埋剂（石蜡），透明必须适度。

.二、固定后处理及切片(一)、洗涤与修切.950%乙醇30-60min70%乙醇1-2小时或过夜80%乙醇1-2小时95%乙醇1-1.5小时100%乙醇30min100%乙醇20min1：1无水乙醇：二甲苯20min二甲苯10-30min.50%乙醇30-60min.10(三)、浸蜡与包埋52-58℃石蜡，浸蜡的全过程在60℃的温箱中进行。1：1二甲苯：石蜡30min石蜡一30min石蜡二30min 石蜡三30min.(三)、浸蜡与包埋52-58℃石蜡，浸蜡的全过11（四）切片、粘片1、切片前处理及切片2、载玻片处理3、粘片（展片）4、烤片

.（四）切片、粘片1、切片前处理及切片.12三、脱蜡和染色（一）、脱蜡1、二甲苯Ⅰ5-10min2、二甲苯Ⅱ1-2min3、1：1二甲苯：乙醇（冬天20min）5min4、无水乙醇、95%、80%、70、50%梯度乙醇每级1-2min5、蒸馏水1-2min.三、脱蜡和染色（一）、脱蜡.13（二）、染色（HE染色法）

6、苏木素染液5～15min7、蒸馏水（洗去多余的染液）8、分色:1%盐酸-70%乙醇分色30-60sec8、蓝化:自来水冲洗（碱化，核蓝色）15-20min9、蒸馏水（洗去多余的碱）1-2min10、逐级入50%、70%、85%乙醇，每级1-2min

11、伊红-95%乙醇染液15sec～2min12、95%、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ逐级脱水，每级1-2min13、1：1无水乙醇：二甲苯

、二甲苯

Ⅰ

、二甲苯Ⅱ各5min.（二）、染色（HE染色法）

6、苏木素染液5～15min.14..15四、封固

滴加中性树胶，加盖玻片封片。.四、封固滴加中性树胶，加盖玻片封片16五、光镜观察.五、光镜观察.17放线菌病硫磺颗粒HE染色300倍

放线菌病硫磺颗粒HE染色300倍.放线菌病硫磺颗粒HE染色300倍

放线菌病硫磺颗粒HE染色318肺毛霉病病理HE染色

.肺毛霉病病理HE染色

.19肺曲霉球菌丝45度分枝HE染色.肺曲霉球菌丝45度分枝HE染色.20

概括主要流程取材固定脱水透明包埋切片封固染色脱蜡烤片.概括主要流程取材固定脱21Thankyou!.Thankyou!.22

病理组织切片制作技术.病理组织切片制作技术.23实验内容

掌握组织材料的取材、固定、脱水、透明、包埋、切片、烤片、脱蜡、染色及封固的基本操作。.实验内容.24一、取材及固定（一）取材注意事项：

1、材料新鲜

2、组织块力求小而薄3、勿使组织块受挤压

4、尽量保持组织的原有形态5、熟悉取材部位.一、取材及固定（一）取材注意事项：.25（一）取材注意事项：6、选好组织块的切面7、保持材料的清洁8、切除不需要的部位.（一）取材注意事项：6、选好组织块的切面.26（二）固定及目的：应用化学试剂使组织或细胞中的无机成分和有机成分凝固或沉淀，以保持其生活状态的过程称为固定。.（二）固定及目的：应用化学试剂使组织27固定液是10%福尔马林溶液（4%甲醛溶液），固定24小时以上。.固定液是10%福尔马林溶液（4%甲醛28固定的目的1、迅速阻止组织、细胞死后变化，防止自溶与腐败，使之尽量保持生前的状态与结构。2、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持其原有状态。3、使组织内各种物质成分产生不同的折光率，以便染色后易于鉴别和观察。4、使组织块硬化，便于制作薄片。.固定的目的.29固定的注意事项1、组织块不宜大，厚度小于5mm，长宽也应小于15×15mm。2、固定液与组织块的比例应大于10：1。3、软组织或较大组织块可先经2-3小时固定后再修整成小块，重新投入新配制的固定液中继续固定。4、肠道可在浆膜面贴上一层厚纸，以防固定组织变形。.固定的注意事项1、组织块不宜大，厚度小于5mm，长宽也应小于30二、固定后处理及切片(一)、洗涤与修切(二)、脱水与透明脱水：将组织块内水分置换的过程。透明：乙醇和石蜡不互溶，最常用的透明剂是二甲苯。既能溶于脱水剂又能溶于包埋剂（石蜡），透明必须适度。

.二、固定后处理及切片(一)、洗涤与修切.3150%乙醇30-60min70%乙醇1-2小时或过夜80%乙醇1-2小时95%乙醇1-1.5小时100%乙醇30min100%乙醇20min1：1无水乙醇：二甲苯20min二甲苯10-30min.50%乙醇30-60min.32(三)、浸蜡与包埋52-58℃石蜡，浸蜡的全过程在60℃的温箱中进行。1：1二甲苯：石蜡30min石蜡一30min石蜡二30min 石蜡三30min.(三)、浸蜡与包埋52-58℃石蜡，浸蜡的全过33（四）切片、粘片1、切片前处理及切片2、载玻片处理3、粘片（展片）4、烤片

.（四）切片、粘片1、切片前处理及切片.34三、脱蜡和染色（一）、脱蜡1、二甲苯Ⅰ5-10min2、二甲苯Ⅱ1-2min3、1：1二甲苯：乙醇（冬天20min）5min4、无水乙醇、95%、80%、70、50%梯度乙醇每级1-2min5、蒸馏水1-2min.三、脱蜡和染色（一）、脱蜡.35（二）、染色（HE染色法）

6、苏木素染液5～15min7、蒸馏水（洗去多余的染液）8、分色:1%盐酸-70%乙醇分色30-60sec8、蓝化:自来水冲洗（碱化，核蓝色）15-20min9、蒸馏水（洗去多余的碱）1-2min10、逐级入50%、70%、85%乙醇，每级1-2min

11、伊红-95%乙醇染液15sec～2min12、95%、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ逐级脱水，每级1-2min13、1：1无水乙醇：二甲苯

、二甲苯

Ⅰ

、二甲苯Ⅱ各5min.（二）、染色（HE染色法）

6、苏木素染液5～15min.36..37四、封固

滴加中性树胶，加盖玻片封片。.四、封固滴加中性树胶，加盖玻片封片38五、光镜观察.五、光镜观察.39放线菌病硫磺颗粒HE染色300倍

放线菌病硫磺颗粒HE染色300倍.放线菌病硫磺颗粒HE染色300倍

放线菌病硫磺颗粒HE染色340肺毛霉病病理HE染色

.肺毛霉病病理HE染色

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