大鼠血管平滑肌细胞的培养课件

人的差异在于业余时间大鼠血管平滑肌细胞的培养大鼠血管平滑肌细胞的培养人的差异在于业余时间大鼠血管平滑肌细胞的培养大鼠血管平滑肌细胞的培养本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!相关帮助需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网biomean进行咨询，期待您的加入小学是学习语言的最佳年龄段，我们要抓住这一教育的契机，及时开展口语训练，并探索有效的途径和方法，让每一位学生都乐于交际，善于表达。目前农村小学存在着教师不懂教，学生不会说、不敢说、说不好的弊端，因此教师要改革小学语文口语交际教学模式，开发口语交际的训练途径，用各种方法引导学生学会倾听，乐于表达，提高学生口语交际的能力。1.创设情境进行口语交际训练新大纲提出这样的要求：“要在课内外创设多种多样的交际情境，让每个学生无拘无束地进行口语交际”。这是口语交际训练的一条重要途径。学生口语交际能力，是在具体情境的实践中培养出来的，特别是小学生，他们年龄小、注意力易分散、形象思维占主要优势，没有具体的情境，学生就不可能承担有实际意义的交际任务，也不可能有双向互动的实践过程，因此，在教学中教师要为学生创设情境训练学生的口头表达能力。1.1实物创设情境；小学生智能发展尚处于低级阶段，他们观察事物往往比较粗略，因此，在教小学生说话时，要教会他们观察。直观形象的实物展示，能很快吸引学生的注意力，易于学生观察，引起学生口语交际的欲望，激发他们口语交际的热情。如第六册语文课本中有口语交际“说家乡”，教师把一幅幅家乡的山水画、果园、田野、建筑、风情世俗等熟悉的画面呈现于学生面前，学生个个眼前一亮，随着教师的相机点拨，人人有话想说、有话可说，学生根据自己喜欢的话题到“家乡的景”“家乡的人”“家乡的建筑”“家乡的风情”小组中交流，然后每小组留下一人，其他成员带着本组交流成果分别到其他小组分享，这样学生入情入境地进行口语交际，达到良好的训练效果。1.2表演创设情境；儿童是用形象、色彩来思维的，儿童只有通过表演，再现生活情景，从中感受、体验形象，观察、思维、想象和表达能力才得到最充分的发展。如苏教版二年级上册练习4的口语交际“买文具”，这是小学生社会交际活动中常见的买卖交易，具有浓厚的生活气息，买卖双方本着各自的立场说话、做事，教师设计两个层次的问题：“售货员没搭理你，怎么说？”“要求调换商品，怎么说？”，让学生在小组内扮演交际的主人公张小雨和售货阿姨的对话情景：张小雨走进文具店，没有称呼说“我要买一支钢笔”，售货员阿姨没有搭理张小雨，“阿姨，我要买一支钢笔”，售货员阿姨随手拿了一支笔递给张小雨说“六元伍角一支”，张小雨看了看“这支笔不好，换一支吧，阿姨”“你想要什么档次的笔？”，“中档的吧，笔尖细点的”。“你看，这支笔可以吗？”“阿姨，请您多拿几款给我挑选，行吗？”，售货员阿姨拿了几支笔给张小雨，张小雨挑选到满意的笔付了钱，说“谢谢阿姨！”。学生在表演的情境中轻松愉快、循序渐进、步步深入地进行口语交际训练，既顺应了学生的认识规律和能力发展的过程，又有效地培养了学生良好的说话态度和语言习惯。2.联系生活进行口语交际训练培养学生的口语交际能力仅仅依靠课内是远远不够的，还必须引导学生运用课内学到的口语交际知识，积极主动地在平时的社会生活中进行实践。而丰富多彩的生活又给口语交际教学提供了活水源泉。因此，教师要主动帮助学生巧搭口语交际的“舞台”，创设富有时代感和浓郁的生活情趣的语境，让学生在多姿多彩的生活“舞台”中观察、表达，在活动中发展学生的口语交际能力。如苏教版四年级上册练习2的口语交际“介绍我的朋友”，让学生把朋友带到自己家中，向爸爸妈妈介绍朋友的年龄、家庭住址、兴趣爱好、学习、特长等情况，通过这种生活实践式的说话训练，让我真正看到了学生语言表达能力的提高，也让他们学会了在生活中交际。3.激励评价进行口语交际训练口语交际课上，要重视学生有兴趣，才有交流的动机，他们需要老师常用肯定和表扬的方式来保护他们的自尊心，激发他们的上进心，如苏教版三年级上册的口语交际“介绍我的小制作”，让学生把自己制作的过程跟大家说一说，不管学生讲得是否有条理，只要他（她）想说、敢说，老师要耐心地听学生发言，不要轻易打断学生的思路；要善于发现学生微小的进步及时肯定，不要轻易挑剔学生这个词“不规范”，那个词“有毛病”，即使某个词说错了，也要允许或提醒他重新换个词再说。小学生初练口语，往往语无伦次，更需要老师的细心呵护。总之，口语交际是人人必需掌握的工具，生活就是口语交际的内容。我们老师应培养和提高学生口语交际能力的多种切入点，创设宽松、愉悦的交际环境，让学生创造性地说练，学生的口语交际能力一定会不断提高，从而提高学生的综合素质。德育工作是学校教育的核心和关键，是全面发展教育的重要组成部分。特别是在我们农村小学，由于相对贫穷落后，好多父母外出务工，加上小学生年龄小自我约束力差，在这种家庭德育教育滞后的情况下，就贪玩了，厌学了，也任性妄为了。在这种环境下，德育工作在农村教育中就显得尤为重要。由于受人文素质和地理环境的影响，农村的德育比起城市搞起来要难，在现实生活中，我们农村学校的教育很难融入到家庭教育和社会环境中。比如，在学校教育中，同学们能互相关心、热爱劳动，而回到家里则衣来伸手，饭来张口，一切劳动都有家长来承包，不懂得关心父母和长辈，成为了小皇帝。学校教育大打折扣。由此可见，如何对农村学生开展道德教育，使德育的实效性更能显现出来是摆在我们面前的一个不容忽视的问题。下面就我几十年的德育工作，总结出以下几种方法：一、言传身教影响学生，使学生知道应该做什么，不该做什么记的《中国青年报》上看到过这样一段话：“一个孩子，从小崇拜爸爸妈妈。一上学就开始崇拜老师，不再崇拜家长。原因一个是老师知识多了，更重要的是，孩子从人格上不再崇拜父母，因为父母说话总不算数，或者家长自己说的，却经常做不到。”这一段话说得是比较中肯的。在工作中我总是严格要求自己，注意自己的一言一行，平时我要求学生不迟到、不早退，那么我本人在工作中首先就早来晚走，经常深入班级。有的学生自习时坐不住凳子，我就在这个时间到教室里备课、改作业，这样做既保持了自习纪律，又为那些坐不住凳子的学生作了“示范”。应该说，教师的一举一动都潜移默化地影响着学生。从老师的身上，学生们会无形中感到什么是应该做的，什么是不应该做的他们会自觉地遵守学校的各项规章制度，自觉地约束好自己、管理好自己。二、既做慈母，又做严父作为教师，我们不仅要真心诚意地把你的爱心奉献给有些学生时，使他们克服缺点、改正毛病。更要应用情感教育进行教学。如对那些平时比较散漫、不够遵守纪律的学生应耐心地给他们讲道理;对他们的生活也特别关心，有的学生生病时我从家里给他们拿药、买营养品;有的学生家庭困难，我毫不吝惜地资助他们生活费。可是，对学生同时应有严格要求。在《现代汉语词典》中就有“慈”是母亲，“严”是父亲的解释。而老师，尤其是班主任，则应该既要当好母亲，又要做好父亲，也就是对学生既要慈爱，又要严管。正如小树的成长，既需要浇灌，也需要修剪。实际上，慈爱是爱，严管又何尝不是爱呢？古人云：“君子爱人以德，小人爱人以姑息。”我们教师都应该是君子。因此在情感教育的前提下，对那些经常犯错误的学生，我总是让他们严格遵守《小学生守则》和《小学生日常行为规范》，并配以灵活的措施。这样才能让学生们感到他们是生活在充满温暖而又有秩序的集体中。三、教育学生树立远大的理想，并为自己理想的实现而努力帮助学生们树立远大理想，并且引导他们为实现自己的理想而奋斗是教师义不容辞的责任。但是，对“理想”这个诱人的字眼儿，谈起来容易，要实现起来就困难了。作为教师，既要用理想激发学生们去刻苦学习，又要帮助他们克服前进道路上的障碍。对于每位小学生来说，他们的思想容易波动，情绪不够稳定，遇到困难犹豫徘徊，这些虽然属于正常现象，但却很容易影响他们的学习积极性，那么教师就要经常给他们讲述学习的目的，激发他们拼搏进取，让他们清楚刻苦学习是实现理想的重要途径。四、利用我们中华民族的传统美德去影响学生的实际行为中华民族有着悠久的传统美德，很多名人、伟人他们在立德修身、治国安邦方面有着感人的故事。像疏食淡饭不改其志的孔子，威武不屈、忠贞如一的苏武，忧乐天下的范仲淹，万古忠义的岳武穆等等。把这些可歌可泣的人物历史事迹讲给学生们听，在思想上培养他们高尚的道德情操，引导他们走向人生正道。当然这些人物事迹却代替不了学生们的实际行动，作为德育工作者就是要让学生把传统美德教育与社会现实有机地结合起来，培养出有健康的、高尚的品德、有上进心的一代新人。五、把严肃的纪律与活泼的班风结合起来一个班级具有严肃的纪律是每个学生顺利学习的保证，而活泼的班风又能使每个学生以更加愉快的心情，饱满的热情投入到学习中去。严肃的纪律与活泼的班风，二者缺一不可。在一个积极上进的班集体中，每个学生会更加遵守纪律。所以在我担任班主任时，总要与同学们制定一个切实可行，让每一名学生没有理由不执行的班规，一旦有人违背这个班规，将要受到严肃的批评。与此同时，我又千方百计地创造一个活泼的班风，鼓励同学们积极参加学校组织的各项有意义活动。如演讲比赛、体育竞赛，学雷锋活动。这些活动，丰富了学生们的学习生活，促进了他们学习成绩的提高，培养了他们的集体荣誉感。学校德育是一项系统的复杂的多环节密切配合的工作。任何环节的疏忽都会使德育效果大打折扣，我们做农村德育工作者更要有师德之心、师德之范、师德之行，这样才能搞好我们农村学校的德育工作，才能使农村学校的德育工作开出一片蓝天，赢来一片曙光。人的差异在于业余时间大鼠血管平滑肌细胞的培养大鼠血管平滑肌细1大鼠血管平滑肌细胞的培养课件大鼠血管平滑肌细胞的培养课件3大鼠血管平滑肌细胞的培养课件4大鼠血管平滑肌细胞的培养课件5细胞培养方法组织块培养法消化培养法器官培养法细胞培养方法组织块培养法6结合生化和化学手段把已经剪切成较小体积的组织进行进一步分离，制成细胞悬液。主要有：胰蛋白酶法胶原酶法EDTA法结合生化和化学手段把已经剪切成较小体积的组织进行进一步分离，7细胞培养方法组织块培养法消化培养法器官培养法细胞培养方法组织块培养法8从供体取得器官或器官组织块后，不进行组织分离而直接在一定环境中培养，保持其原有器官细胞的结构和联系并生存。从供体取得器官或器官组织块后，不进行组织分离而直接在一定环境9体外培养细胞的分型贴附型:细胞贴附在支持物上生长悬浮型：不贴附于支持物，呈悬浮生长体外培养细胞的分型贴附型:细胞贴附在支持物上生长10细胞培养实验室培养用品细胞培养液、培养基准备细胞培养实验室准备11“无菌”大鼠血管平滑肌细胞的培养课件12细胞培养实验室无菌操作区（无菌操作室、超净台）孵育区制备区储藏区清洗和消毒灭菌区细胞培养实验室无菌操作区（无菌操作室、超净台）13培养试剂的配制Hank’s液(单位g)CaCl20.14KCl0.4KH2PO40.06MgSO4.7H2O0.10NaCl8.0NaHCO30.35Na2HPO4.12H2O0.12D-glucose1.0Phenolred0.01培养试剂的配制Hank’s液14将CaCl2先溶解在100mL的ddH2O中，其它成分溶在750mL的ddH2O中，混匀（用磁力搅拌器搅拌至溶解），定容至1000mL。高压蒸气消毒10分钟，4℃冰箱保存。将CaCl2先溶解在100mL的ddH2O中，其它成分溶在15D-Hank’s液（单位：g）KCl0.40KH2PO40.06NaCl8.0NaHCO30.35Na2HPO4.12H2O0.08Phenolred0.02D-Hank’s液（单位：g）16将以上成分溶于900mLddH2O中，充分混匀，加ddH2O至1000mL。高压蒸气消毒10分钟，4℃冰箱保存。将以上成分溶于900mLddH2O中，充分混匀，加ddH217青霉素、链霉素液配制青霉素80万U加Hank’s液至80mL，终浓度1万u/mL链霉素100万U（相当于1g）加Hank’s液至100mL，终浓度10mg/mL分装后至-20℃冰箱保存。青霉素、链霉素液配制18DMEM培养液900mLddH2O于1000mL容器中，将DMEM粉1包倒入容器中，盛粉袋用50mLddH2O分次冲洗，也倒入容器，磁力搅拌溶解。加NaHCO3调PH至7.2加青、链霉素至终浓度100u/mL和100ug/mL0.22umX50滤膜过滤（负压泵抽吸），4℃冰箱保存。DMEM培养液19小牛、胎牛血清灭活55℃水浴箱30分钟，置4℃冰箱保存灭活前放于-20℃冰箱保存待用临用前加入DMEM液中小牛、胎牛血清灭活20平滑肌细胞原代培养方法动物：大鼠150～180g，2～3只平滑肌细胞原代培养方法动物：大鼠150～180g，2～3只21操作步骤大鼠颈椎脱臼致死固定操作步骤大鼠颈椎脱臼致死22消毒胸腹部大组织镊、组织剪切开胸腹部皮肤另一组织镊、组织剪切开胸腹部，并切除部分胸壁以利暴露眼科镊和眼科弯剪分离胸腹主动脉并放入盛有Hank’s液的细胞培养皿中，转入无菌室。或先用生理盐水漂洗，再放Hank’s液中，转入无菌室消毒胸腹部23眼科直镊和弯镊去除血凝块和血管外膜层。放入另一盛有Hank’s液的细胞培养皿中，剪去血管外的小分支眼科直镊和弯镊去除血凝块和血管外膜层。24放入含20%胎牛血清的DMEM中，眼科直剪剪开血管腔，以眼科弯镊轻轻擦拭内膜层，以去除内皮细胞放入另一含20%胎牛血清的DMEM中，用眼科弯剪剪碎血管组织至1mm放入含20%胎牛血清的DMEM中，眼科直剪剪开血管腔，以眼科25用吸管把组织块转入玻璃培养皿中，均匀贴壁，组织块的间距为0.5cm用吸管把组织块转入玻璃培养皿中，均匀贴壁，组织块的间距为0.26盖好瓶盖，轻轻翻转培养瓶，让瓶底朝上，并向瓶内注入适量培养液，于37ºC孵箱内放置4～5小时，使得组织块干涸，并与瓶底贴附将培养瓶慢慢翻转平放，使组织块完全浸入培养液中，继续静置3～5天，切勿移动。待有细胞从组织块周围游离出后换液盖好瓶盖，轻轻翻转培养瓶，让瓶底朝上，并向瓶内注入适量培养液27平滑肌细胞传代传代时间：大部分组织块长出细胞晕，并与相邻细胞晕相接触时就可以传代平滑肌细胞传代传代时间：大部分组织块长出细胞晕，并与相邻细胞28传代步骤：倒掉培养瓶中的培养液用D-Hank’s液洗两遍加2-3滴0.25%胰蛋白酶消化液，平放培养瓶，在倒置纤微镜下观察细胞消化情况，可见到细胞质回缩，细胞间隙增大时迅速翻转培养瓶，使细胞脱离消化液传代步骤：29注意：初次传代对胰酶敏感，加入消化液30s，即消化充分，以后2分钟左右注意：30细胞消化完成后，用吸管反复抽吸打散细胞中止消化：加入DMEM培养液3滴管，用吸管反复吹打瓶壁细胞离心：1500X5分钟倒掉液体，加D-Hank’s液洗一次，再加10mLDMEM培养液，用吸管抽吸吹打分散细胞，分装于2个培养瓶。在倒置纤微镜下可见圆形细胞。放入细胞培养箱中培养细胞消化完成后，用吸管反复抽吸打散细胞31血管平滑肌细胞的冻存和复苏冻存时间：较早期传代，以防细胞因为传代次数过多而造成细胞衰老或发生改变，以保持实验条件的一致性。冻存方法：冻存前24小时更换培养液，冻存时要将密闭好的冻存管依次放于：4ºC2小时-20ºC2.5小时液氮表面2小时浸入液氮血管平滑肌细胞的冻存和复苏冻存时间：较早期传代，以防细胞因为32培养细胞的鉴定1、形态学鉴定：用相差显微镜常规观察细胞生长形态以及生长规律。并依据常规制作电镜标本进行观察

电镜观察结果：细胞形态不规则，胞浆内有肌丝，纵向排列，有密区，具备平滑肌细胞特征培养细胞的鉴定1、形态学鉴定：332、免疫组织化学鉴定：特异性鼠抗α－平滑肌肌动蛋白单克隆抗体，采用SP法对细胞爬片进行免疫组织化学染色免疫组织化学鉴定结果：镜下观察到细胞爬片，可见细胞浆内大量平行阳性染色胞核不着色。所有细胞染色，结果均为阳性2、免疫组织化学鉴定：3456、书不仅是生活，而且是现在、过去和未来文化生活的源泉。——库法耶夫

57、生命不可能有两次，但许多人连一次也不善于度过。——吕凯特

58、问渠哪得清如许，为有源头活水来。——朱熹

59、我的努力求学没有得到别的好处，只不过是愈来愈发觉自己的无知。——笛卡儿

60、生活的道路一旦选定，就要勇敢地走到底，决不回头。——左拉56、书不仅是生活，而且是现在、过去和未来文化生活的源泉。—35人的差异在于业余时间大鼠血管平滑肌细胞的培养大鼠血管平滑肌细胞的培养人的差异在于业余时间大鼠血管平滑肌细胞的培养大鼠血管平滑肌细胞的培养本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!相关帮助需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网biomean进行咨询，期待您的加入小学是学习语言的最佳年龄段，我们要抓住这一教育的契机，及时开展口语训练，并探索有效的途径和方法，让每一位学生都乐于交际，善于表达。目前农村小学存在着教师不懂教，学生不会说、不敢说、说不好的弊端，因此教师要改革小学语文口语交际教学模式，开发口语交际的训练途径，用各种方法引导学生学会倾听，乐于表达，提高学生口语交际的能力。1.创设情境进行口语交际训练新大纲提出这样的要求：“要在课内外创设多种多样的交际情境，让每个学生无拘无束地进行口语交际”。这是口语交际训练的一条重要途径。学生口语交际能力，是在具体情境的实践中培养出来的，特别是小学生，他们年龄小、注意力易分散、形象思维占主要优势，没有具体的情境，学生就不可能承担有实际意义的交际任务，也不可能有双向互动的实践过程，因此，在教学中教师要为学生创设情境训练学生的口头表达能力。1.1实物创设情境；小学生智能发展尚处于低级阶段，他们观察事物往往比较粗略，因此，在教小学生说话时，要教会他们观察。直观形象的实物展示，能很快吸引学生的注意力，易于学生观察，引起学生口语交际的欲望，激发他们口语交际的热情。如第六册语文课本中有口语交际“说家乡”，教师把一幅幅家乡的山水画、果园、田野、建筑、风情世俗等熟悉的画面呈现于学生面前，学生个个眼前一亮，随着教师的相机点拨，人人有话想说、有话可说，学生根据自己喜欢的话题到“家乡的景”“家乡的人”“家乡的建筑”“家乡的风情”小组中交流，然后每小组留下一人，其他成员带着本组交流成果分别到其他小组分享，这样学生入情入境地进行口语交际，达到良好的训练效果。1.2表演创设情境；儿童是用形象、色彩来思维的，儿童只有通过表演，再现生活情景，从中感受、体验形象，观察、思维、想象和表达能力才得到最充分的发展。如苏教版二年级上册练习4的口语交际“买文具”，这是小学生社会交际活动中常见的买卖交易，具有浓厚的生活气息，买卖双方本着各自的立场说话、做事，教师设计两个层次的问题：“售货员没搭理你，怎么说？”“要求调换商品，怎么说？”，让学生在小组内扮演交际的主人公张小雨和售货阿姨的对话情景：张小雨走进文具店，没有称呼说“我要买一支钢笔”，售货员阿姨没有搭理张小雨，“阿姨，我要买一支钢笔”，售货员阿姨随手拿了一支笔递给张小雨说“六元伍角一支”，张小雨看了看“这支笔不好，换一支吧，阿姨”“你想要什么档次的笔？”，“中档的吧，笔尖细点的”。“你看，这支笔可以吗？”“阿姨，请您多拿几款给我挑选，行吗？”，售货员阿姨拿了几支笔给张小雨，张小雨挑选到满意的笔付了钱，说“谢谢阿姨！”。学生在表演的情境中轻松愉快、循序渐进、步步深入地进行口语交际训练，既顺应了学生的认识规律和能力发展的过程，又有效地培养了学生良好的说话态度和语言习惯。2.联系生活进行口语交际训练培养学生的口语交际能力仅仅依靠课内是远远不够的，还必须引导学生运用课内学到的口语交际知识，积极主动地在平时的社会生活中进行实践。而丰富多彩的生活又给口语交际教学提供了活水源泉。因此，教师要主动帮助学生巧搭口语交际的“舞台”，创设富有时代感和浓郁的生活情趣的语境，让学生在多姿多彩的生活“舞台”中观察、表达，在活动中发展学生的口语交际能力。如苏教版四年级上册练习2的口语交际“介绍我的朋友”，让学生把朋友带到自己家中，向爸爸妈妈介绍朋友的年龄、家庭住址、兴趣爱好、学习、特长等情况，通过这种生活实践式的说话训练，让我真正看到了学生语言表达能力的提高，也让他们学会了在生活中交际。3.激励评价进行口语交际训练口语交际课上，要重视学生有兴趣，才有交流的动机，他们需要老师常用肯定和表扬的方式来保护他们的自尊心，激发他们的上进心，如苏教版三年级上册的口语交际“介绍我的小制作”，让学生把自己制作的过程跟大家说一说，不管学生讲得是否有条理，只要他（她）想说、敢说，老师要耐心地听学生发言，不要轻易打断学生的思路；要善于发现学生微小的进步及时肯定，不要轻易挑剔学生这个词“不规范”，那个词“有毛病”，即使某个词说错了，也要允许或提醒他重新换个词再说。小学生初练口语，往往语无伦次，更需要老师的细心呵护。总之，口语交际是人人必需掌握的工具，生活就是口语交际的内容。我们老师应培养和提高学生口语交际能力的多种切入点，创设宽松、愉悦的交际环境，让学生创造性地说练，学生的口语交际能力一定会不断提高，从而提高学生的综合素质。德育工作是学校教育的核心和关键，是全面发展教育的重要组成部分。特别是在我们农村小学，由于相对贫穷落后，好多父母外出务工，加上小学生年龄小自我约束力差，在这种家庭德育教育滞后的情况下，就贪玩了，厌学了，也任性妄为了。在这种环境下，德育工作在农村教育中就显得尤为重要。由于受人文素质和地理环境的影响，农村的德育比起城市搞起来要难，在现实生活中，我们农村学校的教育很难融入到家庭教育和社会环境中。比如，在学校教育中，同学们能互相关心、热爱劳动，而回到家里则衣来伸手，饭来张口，一切劳动都有家长来承包，不懂得关心父母和长辈，成为了小皇帝。学校教育大打折扣。由此可见，如何对农村学生开展道德教育，使德育的实效性更能显现出来是摆在我们面前的一个不容忽视的问题。下面就我几十年的德育工作，总结出以下几种方法：一、言传身教影响学生，使学生知道应该做什么，不该做什么记的《中国青年报》上看到过这样一段话：“一个孩子，从小崇拜爸爸妈妈。一上学就开始崇拜老师，不再崇拜家长。原因一个是老师知识多了，更重要的是，孩子从人格上不再崇拜父母，因为父母说话总不算数，或者家长自己说的，却经常做不到。”这一段话说得是比较中肯的。在工作中我总是严格要求自己，注意自己的一言一行，平时我要求学生不迟到、不早退，那么我本人在工作中首先就早来晚走，经常深入班级。有的学生自习时坐不住凳子，我就在这个时间到教室里备课、改作业，这样做既保持了自习纪律，又为那些坐不住凳子的学生作了“示范”。应该说，教师的一举一动都潜移默化地影响着学生。从老师的身上，学生们会无形中感到什么是应该做的，什么是不应该做的他们会自觉地遵守学校的各项规章制度，自觉地约束好自己、管理好自己。二、既做慈母，又做严父作为教师，我们不仅要真心诚意地把你的爱心奉献给有些学生时，使他们克服缺点、改正毛病。更要应用情感教育进行教学。如对那些平时比较散漫、不够遵守纪律的学生应耐心地给他们讲道理;对他们的生活也特别关心，有的学生生病时我从家里给他们拿药、买营养品;有的学生家庭困难，我毫不吝惜地资助他们生活费。可是，对学生同时应有严格要求。在《现代汉语词典》中就有“慈”是母亲，“严”是父亲的解释。而老师，尤其是班主任，则应该既要当好母亲，又要做好父亲，也就是对学生既要慈爱，又要严管。正如小树的成长，既需要浇灌，也需要修剪。实际上，慈爱是爱，严管又何尝不是爱呢？古人云：“君子爱人以德，小人爱人以姑息。”我们教师都应该是君子。因此在情感教育的前提下，对那些经常犯错误的学生，我总是让他们严格遵守《小学生守则》和《小学生日常行为规范》，并配以灵活的措施。这样才能让学生们感到他们是生活在充满温暖而又有秩序的集体中。三、教育学生树立远大的理想，并为自己理想的实现而努力帮助学生们树立远大理想，并且引导他们为实现自己的理想而奋斗是教师义不容辞的责任。但是，对“理想”这个诱人的字眼儿，谈起来容易，要实现起来就困难了。作为教师，既要用理想激发学生们去刻苦学习，又要帮助他们克服前进道路上的障碍。对于每位小学生来说，他们的思想容易波动，情绪不够稳定，遇到困难犹豫徘徊，这些虽然属于正常现象，但却很容易影响他们的学习积极性，那么教师就要经常给他们讲述学习的目的，激发他们拼搏进取，让他们清楚刻苦学习是实现理想的重要途径。四、利用我们中华民族的传统美德去影响学生的实际行为中华民族有着悠久的传统美德，很多名人、伟人他们在立德修身、治国安邦方面有着感人的故事。像疏食淡饭不改其志的孔子，威武不屈、忠贞如一的苏武，忧乐天下的范仲淹，万古忠义的岳武穆等等。把这些可歌可泣的人物历史事迹讲给学生们听，在思想上培养他们高尚的道德情操，引导他们走向人生正道。当然这些人物事迹却代替不了学生们的实际行动，作为德育工作者就是要让学生把传统美德教育与社会现实有机地结合起来，培养出有健康的、高尚的品德、有上进心的一代新人。五、把严肃的纪律与活泼的班风结合起来一个班级具有严肃的纪律是每个学生顺利学习的保证，而活泼的班风又能使每个学生以更加愉快的心情，饱满的热情投入到学习中去。严肃的纪律与活泼的班风，二者缺一不可。在一个积极上进的班集体中，每个学生会更加遵守纪律。所以在我担任班主任时，总要与同学们制定一个切实可行，让每一名学生没有理由不执行的班规，一旦有人违背这个班规，将要受到严肃的批评。与此同时，我又千方百计地创造一个活泼的班风，鼓励同学们积极参加学校组织的各项有意义活动。如演讲比赛、体育竞赛，学雷锋活动。这些活动，丰富了学生们的学习生活，促进了他们学习成绩的提高，培养了他们的集体荣誉感。学校德育是一项系统的复杂的多环节密切配合的工作。任何环节的疏忽都会使德育效果大打折扣，我们做农村德育工作者更要有师德之心、师德之范、师德之行，这样才能搞好我们农村学校的德育工作，才能使农村学校的德育工作开出一片蓝天，赢来一片曙光。人的差异在于业余时间大鼠血管平滑肌细胞的培养大鼠血管平滑肌细36大鼠血管平滑肌细胞的培养课件大鼠血管平滑肌细胞的培养课件38大鼠血管平滑肌细胞的培养课件39大鼠血管平滑肌细胞的培养课件40细胞培养方法组织块培养法消化培养法器官培养法细胞培养方法组织块培养法41结合生化和化学手段把已经剪切成较小体积的组织进行进一步分离，制成细胞悬液。主要有：胰蛋白酶法胶原酶法EDTA法结合生化和化学手段把已经剪切成较小体积的组织进行进一步分离，42细胞培养方法组织块培养法消化培养法器官培养法细胞培养方法组织块培养法43从供体取得器官或器官组织块后，不进行组织分离而直接在一定环境中培养，保持其原有器官细胞的结构和联系并生存。从供体取得器官或器官组织块后，不进行组织分离而直接在一定环境44体外培养细胞的分型贴附型:细胞贴附在支持物上生长悬浮型：不贴附于支持物，呈悬浮生长体外培养细胞的分型贴附型:细胞贴附在支持物上生长45细胞培养实验室培养用品细胞培养液、培养基准备细胞培养实验室准备46“无菌”大鼠血管平滑肌细胞的培养课件47细胞培养实验室无菌操作区（无菌操作室、超净台）孵育区制备区储藏区清洗和消毒灭菌区细胞培养实验室无菌操作区（无菌操作室、超净台）48培养试剂的配制Hank’s液(单位g)CaCl20.14KCl0.4KH2PO40.06MgSO4.7H2O0.10NaCl8.0NaHCO30.35Na2HPO4.12H2O0.12D-glucose1.0Phenolred0.01培养试剂的配制Hank’s液49将CaCl2先溶解在100mL的ddH2O中，其它成分溶在750mL的ddH2O中，混匀（用磁力搅拌器搅拌至溶解），定容至1000mL。高压蒸气消毒10分钟，4℃冰箱保存。将CaCl2先溶解在100mL的ddH2O中，其它成分溶在50D-Hank’s液（单位：g）KCl0.40KH2PO40.06NaCl8.0NaHCO30.35Na2HPO4.12H2O0.08Phenolred0.02D-Hank’s液（单位：g）51将以上成分溶于900mLddH2O中，充分混匀，加ddH2O至1000mL。高压蒸气消毒10分钟，4℃冰箱保存。将以上成分溶于900mLddH2O中，充分混匀，加ddH252青霉素、链霉素液配制青霉素80万U加Hank’s液至80mL，终浓度1万u/mL链霉素100万U（相当于1g）加Hank’s液至100mL，终浓度10mg/mL分装后至-20℃冰箱保存。青霉素、链霉素液配制53DMEM培养液900mLddH2O于1000mL容器中，将DMEM粉1包倒入容器中，盛粉袋用50mLddH2O分次冲洗，也倒入容器，磁力搅拌溶解。加NaHCO3调PH至7.2加青、链霉素至终浓度100u/mL和100ug/mL0.22umX50滤膜过滤（负压泵抽吸），4℃冰箱保存。DMEM培养液54小牛、胎牛血清灭活55℃水浴箱30分钟，置4℃冰箱保存灭活前放于-20℃冰箱保存待用临用前加入DMEM液中小牛、胎牛血清灭活55平滑肌细胞原代培养方法动物：大鼠150～180g，2～3只平滑肌细胞原代培养方法动物：大鼠150～180g，2～3只56操作步骤大鼠颈椎脱臼致死固定操作步骤大鼠颈椎脱臼致死57消毒胸腹部大组织镊、组织剪切开胸腹部皮肤另一组织镊、组织剪切开胸腹部，并切除部分胸壁以利暴露眼科镊和眼科弯剪分离胸腹主动脉并放入盛有Hank