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文档简介
专题1基因工程乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷)转抗寒基因的番茄转基因抗虫棉抗虫棉普通棉必修2基因工程,又叫基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说,就是按照人们的意愿,把一生物的某种基因提取出来,加以修饰改造,然后放到另一种生物的细胞里,定向改造生物的遗传性状。基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的基因产物剪切→拼接→导入→表达基因重组第1节问题探讨手术刀缝合针运输工具培育抗虫棉需要哪些基本工具?1’2’3’4’5’脱氧核苷酸的结构12仔细观察各限制酶识别的特定序列有何特点?限制酶的识别序列限制酶所识别的序列的特点是:呈现碱基互补对称,无论是6个碱基还是4个碱基,都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。
黏性末端黏性末端EcoRI限制酶的切割
被限制酶切开的DNA两条单链的切口,带有几个伸出的核苷酸,他们之间正好互补配对,这样的切口叫黏性末端。SmaI只能识别CCCGGG序列,并在C和G之间切开。中轴线SmaI限制酶的作用在G与C之间切割平末端平末端SmaI限制酶的切割当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时,切开的DNA两条单链的切口,是平整的,这样的切口叫平末端。你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗?原核生物易受自然界外源DNA的入侵,但生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制,以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细菌的一种防御性工具,当外源DNA侵入时,会利用限制酶将外源DNA切割掉,以保证自身的安全。所以,限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效,从而达到保护自身的目的。寻根问底为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA?通过长期的进化,细菌中含有某种限制酶的细胞,其DNA分子中不具备这种限制酶的识别切割序列,或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上,使限制酶不能将其切开。这样,尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断,并且可以防止外源DNA的入侵。18类型来源功能相同点差别E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶大肠杆菌T4噬菌体恢复磷酸二酯键只能连接黏性末端能连接黏性末端和平末端(效率较低)阅读课本第5页“分子缝合针”——DNA连接酶的相关内容,填写下表自主学习两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来DNA连接酶的缝合作用可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来,注意:DNA连接酶可连接双链DNA中的DNA单链缺口,但不能连接单链DNA!DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来,但效率较低DNA连接酶的缝合作用都能催化形成磷酸二酯键都是蛋白质
不需要需要形成完整的重组DNA分子形成DNA的一条链基因工程DNA复制DNA连接酶与DNA聚合酶的比较只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上,形成一个磷酸二酯键在两个DNA片段之间形成两个磷酸二酯键
限制性核酸内切酶、DNA连接酶、解旋酶和DNA聚合酶区别作用于a(
键)的酶有:作用于b(
键)的酶有:EcoRⅠ将不同种来源的DNA片段连接起来生物A基因片段生物B基因片段酶切……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……不同来源的DNA片段混合……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……?载体的作用载体的必要条件载体的种类阅读课本第6页“分子运输车”——运载体的相关内容,填写下表自主学习1)能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。2)具多个限制酶切点,以便与外源基因连接。3)具有某些标记基因,便于进行鉴定和选择。4)必须是安全的,对受体细胞无害。5)载体DNA分子应大小适中,以便于提取和操作1)作为运载工具,将目的基因导入受体细胞中2)在受体细胞内对目的基因进行大量复制①细菌的质粒②病毒:λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。有标记基因的存在,可用含青霉素的培养基鉴别。有切割位点能复制并带着插入的目的基因一起复制质粒——裸露的、结构简单的、独
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