一氧化氮（NO）含量检测试剂盒说明书-可见分光光度法UPLC-MS-4524

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可见分光光度法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×2瓶-20℃保存试剂二液体6mL×1瓶2-8℃保存显色液A液液体20mL×1瓶2-8℃保存显色液B液液体20mL×1瓶2-8℃保存标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：12.5mL融；2、显色液：临用前按照实验所需用量按A液：B液=1:1充分混匀，现配现用；3、标准品：10μmol/mL亚硝酸钠。产品说明：（Nitric22 3 3 NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO-和NO-，本法利用硝酸还原酶特异性将NO-还原成NO-，在酸性条件下，NO22 3 3 3NO NO-332NO- NR32

NO-2NO-+4-Aminobenzenesulfonamide2

H+ DiazoniumSaltDiazoniumSalt+N-(1-Naphthyl)-Ethylenediamine RedAzoDyes(550nm)技术指标：最低检出限：0.0004μmol/mL线性范围：0.00078-0.1μmol/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。需自备的仪器和用品：1mL/操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）::5~100.2g1.0mL加入提4℃，12000rpm15min（10001.0mL液（15min30min550nm3．标准液的稀释：将标准品用蒸馏水稀释至0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.0015625μmol/mL标准液。:序号）标准液体积（µL）蒸馏水体积（µL）稀释后浓度（µmol/mL）11010090012120018000.130.1100010000.0540.05100010000.02550.025100010000.012560.0125100010000.0062570.00625100010000.00312580.003125100010000.0015625备注：实验中每个标准管需500µL标准溶液。（在1.5mLEP）试剂名称（μL）空白管测定管标准管蒸馏水600-100标准液--500样本-500-试剂一-100-漩涡混匀，置于37℃恒温培养箱/水浴锅中准确水浴60min试剂二100100100漩涡混匀，室温静置5min，3500rpm离心10min，取上清液待测上清液500500500显色液50050050010min1mL1mL550nm下测定吸光值A，AA测定、AΔA=A-AΔA=A-A1-2次。三、NO含量计算以各个标准溶液的浓度为x轴（x，μmol/mL），其对应的ΔA标准为y轴（y，ΔA标准），绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μmol/mL）。NONO含量（μmol/mgprot）=x×V样÷(V样×Cpr)=x÷CprNO（μmo