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文档简介
3/3植物细胞工程综合大实验植物细胞工程综合大实验(一)
——培养基配制和无菌操作
一、实验目的与要求
熟练掌握器皿的洗涤
MS培养基的配制分装
培养基和物品的高压灭菌
实验室的消毒灭菌
植物材料的取材及流水冲洗
无菌操作
材料的培养观察
二、实验原理
植物细胞的全能性。
三、仪器设备与器具
电子天平、移液枪、冰箱、高压锅、超净工作台、
三角瓶、烧杯、容量瓶、培养皿、搪瓷缸、镊子、
解剖刀、酒精灯、试剂瓶、玻璃棒、线绳、pH试纸、封口膜、试管刷、洗涤剂、打火机等。
四、实验材料
彩云阁茎段(用于诱导愈伤组织)
茎节(用于诱导芽)
五、实验方法与步骤
(一)器皿的洗涤
一般器皿
有培养物但未污染的器皿
有培养物且污染的器皿
(二)MS培养基的配制分装
1、MS培养基母液的配制
母液A-F,每组配制A-E100ml、F50ml
0.1%升汞的配制
75%酒精的配制
6-BA
NAA
2、MS培养基的配制
按每人配制100ml,分5小瓶。
过程如下;每组按1L配制,先取容器内加70%的蒸馏水;
加入蔗糖30g/L;量取母液A-F;加入PGR(自己设计);用容量瓶定容;用0.1-1NNAOH或HCl调整pH5.6-5.8;每人分100ml;加琼脂粉8g/L;分装到5个小三角瓶中、封口。
(三)培养基和物品的高压灭菌
培养基、无菌水(每组至少5瓶)、空瓶(每组至少2个)、烧杯(每组至少1个)、培养皿(每组至少一套)、接种工具(2套),包好或者分好以备高压灭菌。
高压锅的使用。
(四)实验室的消毒灭菌
75%的酒精擦拭超净工作台内表面,新洁尔灭水进行超净工作台外表面、培养架表面、墙壁及其他房间表面的擦拭。
(五)植物材料的取材及流水冲洗
选取适宜的彩云阁茎节及茎段,切割成适宜大小后放在流水下冲洗。
(六)无菌操作
演示。
(七)材料的培养观察
接种完的材料放在培养室的培养架上进行培养。培养初期每天观察一次,持续1周。之后每2-3天观察一次。
统计指标:
污染率(%)=(污染的外植体个数/接种外植体的总数)×100%。
愈伤组织诱导率(%)=(长愈伤外植体个数/接种外植体总数)×100%。
芽诱导率(%)=(长芽外植体个数/接种外植体的总数)×100%。(八)结果与分析
植物细胞工程综合大实验(二)
——继代、最佳PGR种类和浓度配比
一、实验目的与要求
确定外植体最佳消毒时间、掌握初次继代方法、茎段诱导愈伤组织和茎节诱导芽阶段PGR种类与浓度配比的筛选
二、实验原理
植物细胞的全能性。
三、仪器设备与器具
电子天平、移液枪、冰箱、高压锅、超净工作台、三角瓶、烧杯、容量瓶、培养皿、搪瓷缸、镊子、解剖刀、酒精灯、试剂瓶、玻璃棒、线绳、pH试纸、封口膜、试管刷、洗涤剂、打火机等。
四、实验材料
彩云阁茎段(用于诱导愈伤组织)茎节(用于诱导芽)
五、实验方法与步骤
(一)器皿的洗涤
(二)MS培养基的配制分装
1、彩云阁茎段诱导愈伤组织的培养基
每人配制5瓶,PGR种类和浓度配比自己设计。
2、彩云阁茎节诱导芽的培养基
每人配制5瓶,PGR种类和浓度配比自己设计。
3、继代培养基
每人配制1瓶,PGR种类和浓度配比自己选择确定。
(三)培养基和物品的高压灭菌
请自己准备。
(四)实验室的消毒灭菌
(五)植物材料的取材及流水冲洗
(六)无菌操作
自己确定材料的消毒灭菌时间。
(七)材料的培养观察
每种处理,统计指标:
污染率(%)=(污染的种子个数/接种种子的总数)×100%。
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