基因工程和细胞工程测试题【实用文档】doc

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高二生物《基因工程和细胞工程》测试题姓名班级基因工程和细胞工程测试题【实用文档】doc文档可直接使用可编辑，欢迎下载（时间:90分钟分数：１0０分）一．选择题(本大题包括２5题，每题2分，共50分。每题只有一个选项符合题意。）１.以下说法正确的是()ﻫA．所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列

B.质粒是基因工程中惟一的运载体ﻫC．运载体必须具备的条件之一是:具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接

D.质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器２。植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理不相符的是（）A。纤维素酶、果胶酶处理和胰蛋白酶处理—-酶的专一性B．植物组织培养和动物细胞培养——细胞的全能性C．植物体细胞杂交和动物细胞融合——生物膜的流动性D。紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养——细胞分裂３.有关基因工程的叙述正确的是（）ﻫＡ.限制性内切酶只在获得目的基因时才用B．重组质粒的形成在细胞内完成

Ｃ.质粒都可作运载体Ｄ.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料4。能克服远缘杂交障碍培育农作物新品种的技术是（）A.基因工程B。组织培养C.诱变育种D。杂交育种5．下列关于动物细胞培养的叙述,正确的是(）A.培养人的效应Ｔ细胞能产生单克隆抗体B。培养人的Ｂ细胞能够无限地增殖C。人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株D．用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞６．PCR技术扩增DＮA,需要的条件是()①目的基因 ②引物ﻩ③四种脱氧核苷酸④DＮA聚合酶等⑤mＲＮAﻩ⑥核糖体A、①②③④Ｂ、②③④⑤C、①③④⑤D、①②③⑥７．以下对DNA的描述，错误的是()Ａ．人的正常T淋巴细胞中含有人体全部遗传信息B.同种生物个体间DNＡ完全相同C.DNA的基本功能是遗传信息的复制与表达D。一个DＮＡ分子可以控制多个性状8。蛋白质工程中直接需要进行操作的对象是()A.氨基酸结构B.蛋白质空间结构C.肽链结构D.基因结构9．细胞工程的发展所依赖的理论基础是（)Ａ。DNＡ双螺旋结构模型的建立B．遗传密码的确立及其通用性的发现Ｃ.生物体细胞全能性的证明D。遗传信息传递的“中心法则"的发现10．下列不是基因工程中的目的基因的检测手段的是:(）A。分子杂交技术B.抗原—抗体杂交C.抗虫或抗病的接种D.基因枪法1１.在以下４种细胞工程技术中，培育出的新个体中，体内遗传物质均来自一个亲本的是（）A.植物组织培养B．单克隆抗体C。植物体细胞杂交Ｄ.细胞核移植12．动物细胞融合与植物细胞融合相比特有的是(）A.基本原理相同Ｂ.诱导融合的方法类Ｃ．原生质体融合D．可用灭活的病毒作诱导剂13。下列哪一项属于克隆（）A.将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DＮA分子中B．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内Ｃ。将鼠骨髓细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞D．将某种瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系１4。在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸46０个)放入ＰCＲ仪中扩增4代,那么,在ＰＣＲ仪中放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数至少应是（）A．6４0ﻩB．810０ C．600D。864015．下列属于动物细胞培养与植物组织培养主要区别的是()A。培养基成分不同B．动物细胞培养不需要在无菌条件下进行C．动物细胞可以传代培养,而植物细胞不能D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株1６。用于核移植的供体细胞一般都选用(）A.受精卵B.传代10代以内的细胞C。传代10~５0代以内的细胞D．处于减数分裂第二次分裂中期的次级卵母细胞17.下面对动物细胞融合技术及意义的叙述，不合理的是（）A．将来有可能通过此方法来生产白细胞介素B。通过克服远源杂交不亲和现象来获得新物种C。有助于对细胞这一生命单位的更为科学的认识D。融合本身与生物膜的流动性直接相关18.下列不属于动物细胞工程应用的是(）A.大规模生产干扰素.用于抵抗病毒引起的感染B.为大面积烧伤的病人提供移植的皮肤细胞C.大规模生产食品添加剂、香料等D。利用胚胎移植技术,加快优良种畜的繁殖19．科学家用小鼠骨髓癌细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞,经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓癌细胞融合的是（)A．经过免疫的B淋巴细胞B．不经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞D．不经过免疫的B淋巴细胞20．生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生"将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易成为“复生"野驴的方法是（）Ａ.将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术,经脱分化、再分化，培育成新个体B。将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体C。取出野驴的体细胞的细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体D。将野驴的基因导入家驴的受精卵中,培育成新个体21．与植物体细胞杂交密切相关的下列叙述中,错误的是（)A.利用离心、振动、电刺激等诱导B。利用聚乙二醇（PEG）等试剂诱导C．克服远缘杂交不亲和的障碍Ｄ。快速繁殖、培育无病毒植物22.关于细胞全能性的理解错误的是(）A。大量的科学事实证明,高度分化的植物体细胞仍具有全能性Ｂ.细胞内含有个体发育所需全部基因是细胞具有全能性的内在条件C。通过植物组织培养得到的试管苗或人工种子,是植物细胞在一定条件下表现全能性的结果D.通过动物细胞培养获得细胞株或细胞系,表明了动物体细胞也具有全能性２3。细胞分化是生物界普遍存在的一种生命现象，下列不正确的是（)A．老年动物体内也有细胞的分化B．分化是基因在特定的时间和空间条件下选择性表达的结果C。愈伤组织的形成是离体的植物细胞分化的结果D．分化后的不同细胞中mRNA的种类和数量不一定相同24．某同学在学习“细胞工程”时，列表比较了动、植物细胞工程的有关内容。错误的是(）选项项目植物细胞工程动物细胞工程Ａ主要技术手段植物组织培养、植物细胞培养、植物体细胞杂交等动物细胞培养和融合、细胞核移植、单克隆抗体的制备等Ｂ特殊处理方法机械法去除细胞壁胰蛋白酶处理、制细胞悬浮液Ｃ细胞融合方法物理方法、化学方法物理方法、化学方法、生物方法D应用人工种子、无病毒植株等单克隆抗体等25．下列有关生物工程方面的叙述中，不正确的是 （） A．叶肉细胞离体培养时,经再分化过程可形成胚状体、丛芽或不定根ﻩＢ．培养动物细胞时应选用无菌的血浆 Ｃ．被去掉细胞壁的植物细胞是原生质层ﻩD。基因工程、细胞工程都能克服远缘物种杂交之间障碍12３4５67８9101112１3１４1５161718１９202１2223２425二、非选择题(共50分，除特殊标注外，每空１分)26.（7分)资料显示，近十年来，PCＲ技术（DNA聚合酶链式反应技术)成为分子生物实验的一种常规手段,其原理是利用DNA半保留复制的特性，在试管中进行ＤNＡ的人工复制（如下图）,在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使分子生物实验所需的遗传物质不再受限于活的生物体。请据图回答：（1)加热至94℃的目的是使ＤNA样品的键断裂,这一过程在生物体细胞内是通过_____＿＿酶的作用来完成的。通过分析得出新合成的DNA分子中，A=T，C=G，这个事实说明ＤＮＡ分子的合成遵循。（2）新合成的DNA分子与模板ＤＮA分子完全相同的原因是___和。(3）通过ＰCR技术使DＮA分子大量复制时，若将一个用15N标记的模板DＮA分子(第一代）放入试管中，以1４N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制到第五代时，含１５N标记的DNA分子单链数占全部DNＡ总单链数的比例为。（４）ＰCR技术不仅为遗传病的诊断带来了便利，而且改进了检测细菌和病毒的方法。若要检测一个人是否感染了艾滋病病毒，你认为可以用PCR扩增血液中的（）Ａ.白细胞ＤNAB．病毒蛋白质Ｃ。血浆抗体Ｄ.病毒核酸2７.(５分)右图是利用基因工程办法生产人白细胞干扰素的基本过程图,据图回答（1）①过程需要_____________＿＿酶的参与。（2)②物质是从大肠杆菌分离出的__。其化学本质是＿＿__＿______＿＿_＿_，它必须能在宿主细胞中_________＿__。（３)③过程表明目的基因___＿_____＿____＿。28。(5分）动物细胞的培养常用于生理、病理、药理等方面的研究。右图示动物细胞培养的部分过程:(1）图示中A与B处理所用的物质是＿.(２）在细胞的分裂增殖过程中,为了确定DNA合成的时间长短，加入以3Ｈ标记的（腺嘌吟、鸟嘌吟、胞嘧啶、胸腺嘧啶)。（3)图中分装的过程称为_＿_＿__＿_培养，成活的细胞叫作_______，一般能传40~５0代,其遗传物质____（改变、不变).2９.（10分)下图是植物组织培养的简略表示.请据此回答：(1）①表示＿_＿＿___＿_____＿_＿__＿_，它能被培养成④的根本原因是_____＿＿_＿________.ﻫ(2)②表示_____＿__＿_,它的细胞特点是_＿＿_______＿_____＿_＿_＿________________。（3）若想制作人工种子，应该选用(填编号）____＿___＿＿。

(4）若①是花药，则④是＿＿_＿______________＿_,这项技术可用_______＿_＿____＿___上。ﻫ（5)若①是胡萝卜的根尖细胞，则培养的④的叶片的颜色是＿__＿＿____＿,这说明根尖细胞___＿＿___。ﻫ(６)若利用此技术制造治疗烫伤的药物—－—-紫草素,培养将进行到（填编号)____＿_＿_＿.3０。(8分）科学家通过基因工程培育抗虫棉时，需要从苏云金芽孢杆菌中提取出抗虫基因，“放入”棉花的细胞中与棉花的DＮA结合起来并发挥作用,请回答下列有关问题：

(1)从苏云金芽孢杆菌中切割抗虫基因所用的工具是＿_，此工具主要存在于中,其特点是____＿_＿______＿＿＿_。(2分）

（2）进行基因操作一般要经过的四个步骤是______＿_______＿__________＿___＿、___＿＿__＿________＿＿_____、____＿________＿___＿____、____＿_＿______＿____＿_＿_________＿＿_＿__＿__________＿＿。３1.（9分）下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。（1）技术是单克隆抗体技术的基础.(2）根据培养基的用途分类，图中HＡT培养基属于______培养基.(2分）(３)单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是_＿_.(4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外,还可以采用。（5)选出的杂交瘤细胞具备的_＿＿_＿___特点。（2分）(6）淋巴细胞是由动物体中的__＿___细胞分化、发育而来.32.(6分）下图①~⑤列举了五种作物育种方法，请回答相应问题:(1)第①种方法属于常规育种,一般从Ｆ２开始选种，这是因为______＿_＿__＿＿_＿__＿__。（2）在第②种方法中，若只考虑F1中分别位于ｎ对同源染色体上的n对等位基因,则利用其花药离体培育成的幼苗的基因型，在理论上应有＿＿_＿__＿_种类型。（3）第③种方法中使用秋水仙素的作用是促使染色体加倍,其作用机理是_＿＿＿_＿__＿_。（４）第④种方法中发生的变异一般是基因突变。卫星搭载的种子应当选用刚萌发的而非休眠的种子,原因是______＿＿_＿___＿____＿____。（5）第⑤种方法属于基因工程。采用这种方法培育出的新品种可以表达丙种微生物的某些遗传信息，其表达过程是＿＿＿_＿_＿____________＿。该遗传工程得以实现的重要理论基础之一是,无沦是真核生物还是原核生物，它们在合成蛋白质的过程中，决定氨基酸的___________都是相同的。高二生物《基因工程和细胞工程》测试题一．选择题(本大题包括2５题,每题2分，共５０分。每题只有一个选项符合题意。)123456７８９1０１11213CＢＤAＤＡBＤCDＡＤD1415161７18１92０２122２3２４25BＡBＢCACDDCＢＣ二、非选择题（共50分，除特殊标注外，每空1分）2６。（７分）（1）氢，解旋，碱基互补配对原则。(2）DＮA分子中独特的双螺旋结构(或以模板DNA分子的一条链为模板进行半保留复制)复制过程中严格遵循碱基互补配对原则。(3）1/1６。（４)D２7．（５分)(１)限制性内切酶(２)质粒;DNＡ；复制并稳定地保存（3)在大肠杆菌内表达2８．(5分）(１）胰蛋白酶（２)胸腺嘧啶（3)传代细胞株不变2９。（10分）(1）离体的植物器官、组织、细胞（或外植体）;植物细胞具有全能性(2)愈伤组织;细胞排列疏松，高度液泡化，无定形状态，色浅（3）③(4）单倍体植株；单倍体育种（５）绿色；含有能表达叶绿体的基因（6)②3０.(8分）３１.（９分）（1）动物细胞培养（微生物培养)(2)选择(2分)（3）特异性强，灵敏度高(4）灭活的病毒(５)在体外大量增殖,分泌特异性抗体(2分)（６）骨髓；造血干32．(6分)(１）从Ｆ２开始发生性状分离（2）２n（3）秋水仙素抑制纺锤体的形成(４）种子萌发后进行细胞分裂,ＤNＡ在复制过程中容易受到外界因素的影响发生基因突变(5）密码子基因工程试题A一、名词解释(每题2分,共２0分）１、转染:２、质粒不亲和性:３、cDNA文库:4、RACＥ：5、基因工程：６、RT—PCＲ7、插入失活:８、S-Ｄ序列：９、穿梭质粒载体:1０、多克隆位点:二、选择题(每题1分,共15分）1（）基因工程操作的三大基本元件是:（I供体ＩI受体IＩI载体IV抗体V配体）AI+ＩＩ+ＩＩＩＢI+ＩII＋ＩVCII+ＩIＩ+IＶDII＋IV+ＶＥIII+IＶ+V２（)基因工程的单元操作顺序是A增，转，检，切,接B切，接，转,增，检C接，转,增，检，切Ｄ检,切，接，增，转E切，接，增，转，检3(）生物工程的上游技术是Ａ基因工程及分离工程Ｂ基因工程及发酵工程C基因工程及酶工程Ｄ基因工程及细胞工程E基因工程及蛋白质工程4（）下列对逆转录酶描述正确的是：Ａ依赖于ＲNA的ＤNA聚合酶或称为RNA指导的DNA聚合酶B依赖于cDNＡ的ＤNA聚合酶或称为cDNA指导的ＤNA聚合酶C依赖于ＤNＡ的DＮA聚合酶或称为DNA指导的DNA聚合酶Ｄ依赖于RNA的ＲNA聚合酶或称为rNA指导的RＮA聚合酶５(）下列对限制性内切酶描述正确的是Ａ限制性内切酶可识别任一的DNA序列B使用限制性内切酶时，有时可出现星活性Ｃ限制性内切酶可识别碱基数不超过5个D限制性内切酶切割碱基序列产生都是黏性末端6（）Ｔ4—DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是A2＇—OH和5'－ＰＢ２'-ＯＨ和3'－PC3'－OH和2'－PＤ3＇-OH和5'-PE5＇—ＯＨ和3＇-Ｐ7（)下列有关连接反应的叙述,错误的是Ａ连接反应的最佳温度为1２—1６Ｂ连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于１0％C连接反应缓冲体系的ATＰ浓度不能高于1mMD连接酶通常应过量２-5倍EDTT在反应中可加也可不加８()下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?A质粒B黏粒C酵母人工染色体(YAC）Dλ噬菌体9(）载体的功能是（I运送外源基因高效进入受体细胞ＩI为外源基因提供复制能力IＩI为外源基因提供整合能力）AＩBＩ＋ＩICI+IIIＤIＩ+IIIEI+ＩI＋IIＩ10（）考斯质粒（coｓmｉd)是一种A天然质粒载体Ｂ由入-DＮA的cos区与一质粒重组而成的载体C能裂解受体细胞的烈性载体Ｄ具有溶原性质的载体Ｅ能在受体细胞内复制并包装的载体１1(）下列有关基因的描述，错误的是A蛋白质是基因表达唯一的产物B基因是DNＡ链上具有编码功能的片段Ｃ基因也可以是RNＡD基因突变不一定导致其表达产物改变结构１2（)关于ｃＤNA的最正确的提法是:Ａ同mRNA互补的单链DＮAＢ同mRNA互补的双链ＤNAＣ以mRNA为模板合成的双链DNAＤ以上都正确1３()某一重组ＤNA（6。2ｋb)的载体部分有两个SｍaI酶切位点。用ＳmaI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合,该重组分子插入片段上的SｍaI酶切位点共有A5个Ｂ4个C3个D２个14（）同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在,电泳时，它们的迁移速率是：AOCDNA>SCDNP>LＤNＡBＳCDNA〉LDNA>OCDＮACLＤNA>OCDNA〉SＣDNＡDSＣDNＡ＞ＯＣDＮA〉LDNA１５（)cDNA法获得目的基因的优点是A成功率高Ｂ不含内含子C操作简便D表达产物可以分泌Ｅ能纠正密码子的偏爱性三、简答题（每题5分,共２5分）1、什么是包涵体?2、PCR反应体系包括哪些内容?基本反应过程是什么？3、限制性核酸内切酶的活性受哪些因素影响?４、作为基因工程载体必须具备的基本条件是什么？5、基因工程诞生的理论基础是什么?四、论述题（每题10分，共40分）1简述载体构建的一般过程2大肠杆菌作为基因工程受体菌的优点和缺点是什么？3如何有效地提高外源基因的表达效率？４试述３′ＲACE技术原理和方法基因工程试题标准答案及评分标准A一、选择题（每题1分,共15分）1、A2、A3、Ａ4、A5、B6、D7、Ｅ8、C9、E1０、B１１、A12、C１3、D１4、Ｂ15、B二、名词解释(每题2分，共２0分）1、转染:专指感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体ＤＮA分子的生命过程。2、质粒不亲和性：在没有选择压力的情况下，两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中稳定地共存的现象.3、cＤNA文库：是指某生物某一发育时期所转录形成的cDＮA片段与某种载体连接而成的克隆的集合。4、RACE：是一种通过PCR进行ｃDNＡ末端快速克隆的技术,是以mRNA为模板反转录成cDNＡ第一链后用ＰCR技术扩增出某个特异位点到3，或5,端之间未知序列的方法。5、基因工程：在分子水平上的进行的遗传操作,指将一种或多种微生物的基因或基因组提取出来,或人工合成基因，按着人们的愿望,进行严密的设计，经过体外加工重组,转移到另一种生物体的细胞内，使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术。６、RT-PCR:先用逆转录酶作用于mRNA,以寡聚ｄT为引物合成cDNA第一链,然后用已知一对引物,扩增嵌合分子,这种方法称为逆转录PＣR7、Ｉｎsertiｎactｉon：即插入失活，基因工程载体上的某些选择标记基因常常含某种或某几种限制性内切酶的单一酶切位点，在该位点用相应的限制性内切酶处理，并将外源DNA片段插入该位点，则插入的外源DNA片段将破坏原有基因的读码框,往往导致原有的选择标记基因无法翻译表达，或即使翻译表达,形成的也是丧失了原有生物活性的蛋白质，这一现象称为插入失活。。8、S—D序列：在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上,含有一个转译起始密码子及同1６S核糖体RNA3，末端碱基互补的序列，该序列最初由Ｓhiｎe、Daｌgarｎo发现，故后来命名为Shine—Dalgarno序列，简称Ｓ-D序列。9、穿梭质粒载体：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记,因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。１0、ＭCＳ:指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段。三、简答题（共２5分，每题5分)1、什么是包涵体？重组蛋白在胞内表达时，常常以不溶性蛋白聚集成的晶状物形式存在，这种晶状体即包涵体。包涵体的形成是外源蛋白的高效表达时的普遍现象，这是由于肽链折叠过程中部分折叠的中间态发生了错误聚合，而不是形成成熟的天然态或完全解链的蛋白。2、PＣR反应体系包括哪些内容?基本反应过程是什么?PCR反应体系所要求的条件：a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的ＤNA引物（约20个碱基左右）。ｂ、具有热稳定性的酶如:TaｇDNA聚合酶。c、dNTP。d、作为模板的目的DＮA序列,Ｅ无菌水，F，缓冲液PＣR反应体系的基本反应过程:预变性、变性、退火、延伸、复延伸。3、限制性核酸内切酶的活性受哪些因素影响？⑴酶的纯度。⑵DＮＡ样品的纯度。⑶DNA的甲基化程度。⑷酶切反应的温度与时间。⑸ＤNA分子的构型。⑹限制性核酸内切酶的反应缓冲液。4、作为基因工程载体必须具备的基本条件是什么?①能在宿主细胞内进行独立和稳定的自我复制②具有合适的限制内切酶位点③具有合适的选择标记基因5、基因工程诞生的理论基础是什么?是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明。理论上的三大发现：①证实了DＮA是遗传物质②揭示了DNＡ分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理③遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定技术上的三大发明：①限制核酸内切酶的发现与DNA切割②DNＡ连接酶的发现与DNA片段的连接③基因工程载体的研究与应用四、问答题(每题10分,共40分)１简述载体构建的一般过程A目的基因分析(１）ORＦ分析（2)酶切位点分析B载体选择与分析(1）多克隆位点分析(2）抗性标记分析(3)启动子与其他筛选标记分析C连接体系与连接时间确定2大肠杆菌作为基因工程受体菌的优点和缺点是什么?优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉,基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚，对其基因表达调控的分子机理也比较了解,而且历经二十年的基因工程实践,大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系,有多种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。缺点：在通常情况下，细菌的RNＡ聚合酶不能识别真核的启动子；许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰,如正确的折叠和组装，而细菌中通常并没有这样的修饰机制，从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白;外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别，并被当做“异已分子”降解掉.3如何有效地提高外源基因的表达效率？⑴提高启动子强度⑵缩短启动子同克隆基因间距离⑶高效的翻译起始序列⑷高效的转录终止区⑸提高质粒拷贝数及稳定性⑹用以下方法提高翻译水平:①调整SD序列与AＵG间的距离②用点突变的方法改变某些碱基③增加mRNA的稳定性的⑺减轻细胞的代谢负荷：①诱导表达②表达载体的诱导复制⑻提高表达蛋白的稳定性，防止其降解：①克隆一段原核序列，表达融合蛋白②采用某种突变菌株③表达分泌蛋白质4试述3′RＡCE技术原理和方法PCR用于扩增代表mRNA转录物某一单位点与其3′或5′末端之间区域的部分ｃDNA称为快速扩增cDNA末端技术.如果已敿目的mRNA的一片段链内短序列，据此或设计基因特异引物,用原先存在的poｌy（A)尾（3′末端)或附加的同聚尾(5′末端）互补的序列做末端引物,就可以获得从未知末端直到已知区域的部分cDＮA序列。为获得３′末端cDNA克隆，mRNＡ反转录时需用杂合引物（ＱT)。QＴ由17个核苷酸长的ｏｌｉg（dT)及特定的3５个核苷酸序列（QI-ＱO）构成，前者被命名为锚定引物。为获得5′末端部分cDＮA克隆需用基因特异引物，产物第一链产物，可用末端脱氧核苷酸转移酶及dAＴP加poly（A）尾.通过QT引物和反转录使用的上游基因特异引物生成第二链ｃDNA。基因工程细胞工程知识点汇总一、基因工程

(一）基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计,通过体外DNＡ重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在ＤＮA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DＮＡ重组技术。（一）基因工程的基本工具1.“分子手术刀"——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。（２）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性.（3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2。“分子缝合针"——DNＡ连接酶(1)两种ＤNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。②区别:E·ｃoliＤNＡ连接酶来源于T４噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而Ｔ４DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低.(2)与DＮＡ聚合酶作用的异同:

DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端,形成磷酸二酯键。3．“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组ＤNA的鉴定和选择。（2)最常用的载体是ﻫ质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子.（３)其它载体:

噬菌体的衍生物、动植物病毒（二)基因工程的基本操作程序

第一步：目的基因的获取ﻫ1.目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。

2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。３.PCR技术扩增目的基因（1)原理:DNＡ双链复制（2）过程:第一步:加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到5５~60℃，引物结合到互补DＮＡ链；第三步:加热至70~７５℃,热稳定DNＡ聚合酶从引物起始互补链的合成。ﻫ第二步：基因表达载体的构建1。目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。2．组成：目的基因+启动子＋终止子＋标记基因(１)启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RＮA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出ｍRNA，最终获得所需的蛋白质。（２)终止子：也是一段有特殊结构的DＮA片段，位于基因的尾端。(3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。

第三步：将目的基因导入受体细胞_1．转化的概念:是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2．常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等.将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。将目的基因导入微生物细胞：３.重组细胞导入受体细胞后,筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。

第四步：目的基因的检测和表达１。首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因,方法是采用ＤNA分子杂交技术。２．其次还要检测目的基因是否转录出了ｍRNA，方法是采用用标记的目的基因作探针与ｍRNA杂交。３．最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原—抗体杂交。4.有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。ﻫ(三)基因工程的应用ﻫ1．植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。ﻫ２.动物基因工程:提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。

3。基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用.

（四）蛋白质工程的概念ﻫ蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础,通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求.(基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质)

二、细胞工程

（一）植物细胞工程ﻫ１．理论基础（原理）：细胞全能性2．植物组织培养技术(１)过程:离体的植物器官、组织或细胞―――→愈伤组织―――→试管苗――→植物体

(2）用途：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产。ﻫ（3）地位:是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。

3．植物体细胞杂交技术(1）过程:ﻫﻫ（2)诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等。化学法一般是用聚乙二醇(PEG）作为诱导剂.

(3)意义:克服了远缘杂交不亲和的障碍。（二）动物细胞工程ﻫ１.动物细胞培养

（1)概念:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖.ﻫ（2)动物细胞培养的流程:取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。

（３)细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制.ﻫ(4)动物细胞培养需要满足以下条件ﻫ①无菌、无毒的环境:培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素,以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液,防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。

②营养：合成培养基成分:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。

③温度：适宜温度:哺乳动物多是36.5℃＋0.5℃;pH:７。2～7.４。ﻫ④气体环境：95％空气＋5%CＯ２。O２是细胞代谢所必需的，ＣO２的主要作用是维持培养液的pH。（5）动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。

2。动物体细胞核移植技术和克隆动物ﻫ（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）.

（２)选用去核卵(母）细胞的原因：卵（母)细胞比较大，容易操作；卵（母）细胞细胞质多，营养丰富。（3）体细胞核移植的大致过程是:（4）体细胞核移植技术的应用：ﻫ①加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育；②保护濒危物种,增大存活数量;③生产珍贵的医用蛋白;④作为异种移植的供体;⑤用于组织器官的移植等。ﻫ（5）体细胞核移植技术存在的问题:ﻫ克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等.ﻫ3．动物细胞融合ﻫ(1）动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称为杂交细胞。ﻫ(2）动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同,诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。

（3）动物细胞融合的意义：克服了远缘杂交的不亲和性，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物生物新品种培育的重要手段。

（4）动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用法植物体细胞杂交细胞膜的流动性去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动,ﻫ聚乙二醇等试剂诱导克服了远缘杂交的不亲和性，获得杂种植株动物细胞融合细胞膜的流动性使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外,再加灭活的病毒诱导制备单克隆抗体的技术之一４．单克隆抗体ﻫ（1）抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体.从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。

（２)单克隆抗体的制备过程：ﻫ

（３)杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。ﻫ(４）单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。

（5）单克隆抗体的作用:作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异,并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗,可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。

三、胚胎工程

(一）动物胚胎发育的基本过程ﻫ1、胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术，如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术.经过处理后获得的胚胎，还需移植到雌性动物体内生产后代,以满足人类的各种需求。ﻫ2、动物胚胎发育的基本过程ﻫ（1）受精场所是母体的输卵管上段。

（2)卵裂期：特点：细胞有丝分裂,细胞数量不断增加，但胚胎的总体体积并不增加，或略有减小。ﻫ（3）桑椹胚:特点:胚胎细胞数目达到３2个左右时，胚胎形成致密的细胞团，形似桑椹。是全能细胞。

(4）囊胚:特点：细胞开始出现分化（该时期细胞的全能性仍比较高)。聚集在胚胎一端个体较大的细胞称为内细胞团,将来发育成胎儿的各种组织。中间的空腔称为囊胚腔.ﻫ（5)原肠胚：特点:有了三胚层的分化,具有囊胚腔和原肠腔.ﻫ(二）胚胎干细胞

１、哺乳动物的胚胎干细胞简称ＥS或EK细胞,来源于早期胚胎或从原始性腺中分离出来。

2、具有胚胎细胞的特性,在形态上表现为体积小，细胞核大,核仁明显；在功能上，具有发育的全能性,可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化,可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。ﻫ３、胚胎干细胞的主要用途是：①可用于研究哺乳动物个体发生和发育规律；②是在体外条件下研究细胞分化的理想材料,在培养液中加入分化诱导因子，如牛黄酸等化学物质时,就可以诱导ＥＳ细胞向不同类型的组织细胞分化,这为揭示细胞分化和细胞凋亡的机理提供了有效的手段；③可以用于治疗人类的某些顽疾,如帕金森综合症、少年糖尿病等；④利用可以被诱导分化形成新的组织细胞的特性，移植ＥS细胞可使坏死或退化的部位得以修复并恢复正常功能；⑤随着组织工程技术的发展，通过ES细胞体外诱导分化，定向培育出人造组织器官，用于器官移植，解决供体器官不足和器官移植后免疫排斥的问题.ﻫ（三)胚胎工程的应用1。体外受精和胚胎的早期培养

（1)卵母细胞的采集和培养：主要方法：用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子,然后，从输卵管中冲取卵子,直接与获能的精子在体外受精.第二种方法：从刚屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞；第三种方法是借助超声波探测仪、腹腔镜等直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。采集的卵母细胞，都要在体外经人工培养成熟后,才能与获能的精子受精。ﻫ(2)精子的采集和获能：在体外受精前，要对精子进行获能处理。

(3）受精：获能的精子和培养成熟的卵细胞在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。ﻫ(4)胚胎的早期培养:精子与卵子在体外受精后,应将受精卵移入发育培养液中继续培养,以检查受精状况和受精卵的发育能力.培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分,以及血清等物质。当胚胎发育到适宜的阶段时,可将其取出向受体移植或冷冻保存。不同动物胚胎移植的时间不同。（牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚阶段才能进行移植,小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植，人的体外受精胚胎可在4个细胞阶段移植.）

２．胚胎移植ﻫ（1）胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎,或者通过体外受精及其它方式得到的胚胎,移植到同种的、生理状态相同的其它雌性动物的体内,使之继续发育为新个体的技术。其中提供胚胎的个体称为“供体”，接受胚胎的个体称为“受体”.(供体为优良品种,作为受体的雌性动物应为常见或存量大的品种。）

地位：如转基因、核移植，或体外受精等任何一项胚胎工程技术所生产的胚胎,都必须经过胚胎移植技术才能获得后代，是胚胎工程的最后一道“工序"。

（2）胚胎移植的意义:大大缩短了供体本身的繁殖周期,充分发挥雌性优良个体的繁殖能力。

(3）生理学基础:①动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。

②早期胚胎在一定时间内处于游离状态.这就为胚胎的收集提供了可能。

③受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应。这为胚胎在受体的存活提供了可能。ﻫ④供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系,但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。ﻫ（4)基本程序主要包括:ﻫ①对供、受体的选择和处理。选择遗传特性和生产性能优秀的供体,有健康的体质和正常繁殖能力的受体，供体和受体是同一物种。并用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理。

②配种或人工授精。

③对胚胎的收集、检查、培养或保存。配种或输精后第7天，用特制的冲卵装置，把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来(也叫冲卵).对胚胎进行质量检查,此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段.直接向受体移植或放入-１96℃的液氮中保存。

④对胚胎进行移植。

⑤移植后的检查.对受体母牛进行是否妊娠的检查.

3.胚胎分割ﻫ（１）概念：是指采用机械方法将早期胚胎切割2等份、4等份等,经移植获得同卵双胎或多胎的技术。ﻫ(２)意义：来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质,属于无性繁殖。ﻫ(3）材料：发育良好，形态正常的桑椹胚或囊胚。（桑椹胚至囊胚的发育过程中，细胞开始分化，但其全能性仍很高，也可用于胚胎分割。）

(4）操作过程:对囊胚阶段的胚胎分割时，要将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。

（四）生物技术的安全性和伦理问题ﻫ1。转基因生物的安全性争论：ﻫ（１）基因生物与食物安全：

反方观点：反对“实质性等同”、出现滞后效应、出现新的过敏原、营养成分改变ﻫ正方观点：有安全性评价、科学家负责的态度、无实例无证据ﻫ(2)转基因生物与生物安全：对生物多样性的影响ﻫ反方观点：扩散到种植区之外变成野生种类、成为入侵外来物种、重组出有害的病原体、成为超级杂草、有可能造成“基因污染”

正方观点：生命力有限、存在生殖隔离、花粉传播距离有限、花粉存活时间有限ﻫ（3)转基因生物与环境安全：对生态系统稳定性的影响

反方观点:打破物种界限、二次污染、重组出有害的病原微生物、毒蛋白等可能通过食物链进入人体

正方观点:不改变生物原有的分类地位、减少农药使用、保护农田土壤环境

２。生物技术的伦理问题ﻫ(1）克隆人：两种不同观点，多数人持否定态度。

否定的理由：克隆人严重违反了人类伦理道德,是克隆技术的滥用;克隆人冲击了现有的婚姻、家庭和两性关系等传统的伦理道德观念;克隆人是在人为的制造在心理上和社会地位上都不健全的人.ﻫ肯定的理由:技术性问题可以通过胚胎分级、基因诊断和染色体检查等方法解决.不成熟的技术也只有通过实践才能使之成熟。

中国政府的态度：禁止生殖性克隆，不反对治疗性克隆。四不原则：不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人的实验。ﻫ(2)试管婴儿：两种目的试管婴儿的区别两种。不同观点，多数人持认可态度。ﻫ否定的理由：把试管婴儿当作人体零配件工厂，是对生命的不尊重;早期生命也有活下去的权利，抛弃或杀死多余胚胎，无异于“谋杀"。

肯定的理由:解决了不育问题,提供骨髓中造血干细胞救治患者最好、最快捷的方法，提供骨髓造血干细胞并不会对试管婴儿造成损伤。ﻫ(3)基因身份证：

否定的理由：个人基因资讯的泄漏造成基因歧视,势必造成遗传学失业大军、造成个人婚姻困难、人际关系疏远等严重后果。ﻫ肯定的理由:通过基因检测可以及早采取预防措施，适时进行治疗，达到挽救患者生命的目的。

3.生物武器ﻫ(1)种类:致病菌、病毒、生化毒剂，以及经过基因重组的致病菌。ﻫ（2)散布方式：吸入、误食、接触带菌物品、被带菌昆虫叮咬等。ﻫ（３)特点:致病力强、多数具传染性、传染途径多、污染面广、有潜伏期、不易被发现、危害时间长等。

(4）禁止生物武器公约及中国政府的态度基因工程测试题一、选择题：1.人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成。通过转基因技术可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是()Ａ.大肠杆菌B．酵母菌C.肺炎双球菌D.乳酸菌２.下列有关基因工程的叙述，正确的是(）A．ＤNA连接酶将碱基对之间的氢键连接起来Ｂ．目的基因导入受体细胞后,受体细胞即发生基因突变C．限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越大D.常用的载体有大肠杆菌、噬菌体和动植物病毒等3．我国科学家运用基因工程技术,将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达，培育出了抗虫棉。下列叙述不正确的是()A。抗虫基因的提取和运输需要专用的工具酶和载体Ｂ.重组ＤNA分子中替换一个碱基对,不一定导致毒蛋白的毒性丧失Ｃ.抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递到近缘作物，从而造成基因污染D.转基因抗虫棉是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的４.如图是获得抗虫棉的技术流程示意图。卡那霉素抗性基因（kanr)常作为标记基因,只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长.下列叙述正确的是（)Ａ。构建重组质粒过程中需要限制性核酸内切酶和DNＡ连接酶Ｂ。愈伤组织的分化产生了不同基因型的植株C.卡那霉素抗性基因（kanr）中有该过程所利用的限制性核酸内切酶的识别位点D.抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传５。上海医学研究所成功培育出第一头携带人白蛋白基因的转基因牛。他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高３0多倍,以下与此有关的叙述中正确的是（）Ａ．“转基因动物”是指体细胞中出现了新基因的动物B．“提高基因表达水平”是指设法使牛的乳腺细胞中含有更多的人白蛋白基因C。只有从转基因牛乳汁中才能获取人白蛋白,是因为人白蛋白基因只在牛乳腺细胞中含有D.转基因牛的肌肉细胞中也有人白蛋白基因,但不发生转录、翻译，不能合成人白蛋白6．下列关于蛋白质工程和基因工程的比较，不合理的是（）A.基因工程原则上只能生产自然界已存在的蛋白质，而蛋白质工程可以对现有蛋白质进行改造,从而制造一种新的蛋白质B．蛋白质工程是在基因工程的基础上发展起来的,蛋白质工程最终还是要通过基因修饰或基因合成来完成Ｃ.当得到可以在-70℃条件下保存半年的干扰素后，在相关酶、氨基酸和适宜的温度、pH条件下，干扰素可以大量自我合成D。基因工程和蛋白质工程产生的变异都是可遗传的７.基因工程是在DNＡ分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中,不进行碱基互补配对的步骤是（）A．人工合成基因B.制备重组DNA分子C.把目的基因导入受体细胞D．目的基因的检测和表达8.已知一双链DNA分子，用限制酶Ⅰ切割得到长度为1２0kｂ（kb：千碱基对)片段；用限制酶Ⅱ切割得到４０ｋb和80kb两个片段；同时用限制酶Ⅰ和限制酶Ⅱ切割时，得到10kｂ、８0ｋb和３0kb3个片段,据此分析该双链ＤNA分子结构及酶切位点情况为（）9．据图所示，有关工具酶功能的叙述不正确的是（）Ａ.限制性核酸内切酶可以切断ａ处，ＤＮＡ连接酶可以连接a处B．DNA聚合酶可以连接a处C.解旋酶可以使b处解开D。连接ｃ处的酶可以为DNA连接酶１0。采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是，人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。以下有关叙述，正确的是(）Ａ．如果人凝血因子基因的核苷酸序列已知,可用人工合成的方法获得该目的基因B.人体细胞中凝血因子基因进入羊受精卵细胞后，其传递和表达不再遵循中心法则Ｃ．在该转基因羊体内，人凝血因子基因存在于乳腺细胞中，而不存在于其他体细胞中D．人凝血因子基因开始转录后,DＮA聚合酶以ＤＮA分子的一条链为模板合成mRNＡ１1。科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠,其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中，在医学研究及相关疾病治疗方面都具有重要意义。下列有关叙述错误的是（)A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞具有全能性B.采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达C。人的生长激素基因能在小鼠细胞内表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用D．转基因小鼠的肝细胞含有人的生长激素基因12。某研究所的研究人员将生长激素基因通过质粒介导进入大肠杆菌细胞内,来表达产生生长激素。已知质粒中存在两个抗性基因:A是抗链霉素基因，B是抗氨苄青霉素基因，且目的基因要插入到基因B中，而大肠杆菌不带有任何抗性基因.下列叙述正确的是（)A.导入大肠杆菌的质粒一定为重组质粒B。RNA聚合酶是构建该重组质粒必需的工具酶C。可用含氨苄青霉素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒Ｄ．在含氨苄青霉素培养基中不能生长,但在含链霉素培养基中能生长的可能是符合生产要求的大肠杆菌班:姓名：选择题答案：题号１2３456789101112答案二、非选择题:１3．如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因,BaｍＨⅠ、HinｄⅢ、SｍaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答:（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用__＿____＿限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含__＿____＿的培养基上进行.(2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是______＿_(填字母代号）。A.启动子B.tetRC．复制原点D.ａmpＲ(3）过程①可采用的操作方法是_＿_＿____(填字母代号）。A。农杆菌转化B.大肠杆菌转化Ｃ.显微注射Ｄ。细胞融合（4)过程②可采用的生物技术是＿__＿______＿_____。（5)对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的＿_＿_＿_＿＿性。（6）为检测人乳铁蛋白是否成功表达,可采用________(填字母代号)技术。A。核酸分子杂交B.基因序列分析C.抗原—抗体杂交D.PCR1４.科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组,并成功地在大肠杆菌中得以表达。但在进行基因工程的操作过程中,需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒,便于重组和筛选.已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GＡＴCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓ＧATC—,据图回答：（1)过程①表示的是采取＿＿_＿__＿____的方法来获取目的基因.(2）根据图示分析，在构建基因表达载体过程中，应用限制酶___________切割质粒，用限制酶＿____＿__＿＿_切割目的基因。用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端通过＿____＿_____原则进行连接.(３）人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为_______＿_______＿_＿_＿。写出目的基因导入细菌中表达的过程_________＿_______＿___＿＿_＿________.（4)将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长，说明大肠杆菌B已导入了____＿_______＿＿______＿_,反之则没有导入。答案解析１.【解析】选Ｂ。A、Ｃ、D为原核细胞,不具有内质网和高尔基体，不能进行肽链的折叠和加工。2。【解析】选Ｃ。DNA连接酶连接的是脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键,不是氢键;目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因重组,不是基因突变；大肠杆菌不能作为基因工程的载体。３．【解题指南】1。知识储备：(1）基因突变对生物性状的影响;(２)目的基因成功表达的标志。2.解题关键:(1)明确碱基替换可能并不会改变蛋白质中氨基酸的种类,也不会改变蛋白质的性质.（２)抗生素抗性基因往往作为标记基因而不是目的基因.【解析】选Ｄ.抗生素抗性基因往往作为基因工程中的标记基因，用来检测目的基因是否导入，而不能用来确定目的基因是否表达.检测转基因抗虫棉是否具有抗虫特性可以让害虫取食棉花叶片,观察害虫是否死亡。４．【解析】选A。质粒与目的基因结合时需要用同一种限制性核酸内切酶切割，用DNA连接酶连接;愈伤组织由相同细胞分裂形成,分化后产生相同基因型的植株；卡那霉素抗性基因作为