天然药物分离方法

FractionationMerhodsofNaturalDrugs天然药物分离方法（2）大孔树脂吸附法沈阳药科大学中药学院天然药物教研室王乃利概述中药有效成分的不断阐明中药现代化的要求当前用于中药纯化的主要技术：

溶剂法：沉淀法：

色谱法：大孔吸附树脂、离子交换树脂、聚酰胺、葡聚糖凝胶等

超临界流体萃取法：超滤法：结晶法：一、树脂简介1、常用树脂的类型凝胶树脂大孔树脂离子交换树脂2、离子交换树脂离子交换树脂的种类种类活性基团1强酸性磺酸基(SO3H)2弱酸性磷酸基(PO3H2)、羧酸基(COOH)3强碱性Ⅰ型：三甲基胺(-N+(CH3)3)Ⅱ型：二甲基乙醇胺(N+(CH3)2C2H4OH4弱碱性伯氨基(-NH2)、仲氨基(-NHR)、叔氨基(-NR2)5两性强碱＋弱酸弱碱＋弱酸3、大孔吸附树脂目前国产树脂的主要类型致孔剂：甲苯、石蜡、溶剂汽油、煤油、碳醇、聚乙烯醇等国产大孔吸附树脂的主要型号、性能、生产企业

型号性能生产企业D-101非极性天津晶莹提取树脂有限责任公司D-201弱极性天津晶莹提取树脂有限责任公司D-301极性天津晶莹提取树脂有限责任公司HPD-100非极性河北沧州宝恩化工有限公司HPD-300弱极性河北沧州宝恩化工有限公司HPD-600极性河北沧州宝恩化工有限公司X-5非极性南开大学化工厂AB-8弱极性南开大学化工厂NKA-9极性南开大学化工厂三菱化学的大孔吸附树脂聚苯乙烯系列合成树脂：Diaion:HP20,HP21Sepabeads:SP825,SP850Sepabeads:SP70,SP700修饰的聚苯乙烯系列合成树脂:Sepabeads:SP207异丁烯系列合成树脂:Diaion:HP2MG大孔吸附树脂的主要理化性质颜色：白色、乳白色至微黄物理化学性质稳定，不溶于任何酸、碱及有机溶剂，加热不溶，可在150℃以下使用含水量：60～80％堆积密度：0.6～0.9影响树树脂性性能的的主要要因素素及国国产树树脂存存在的的主要要问题题交联度度比表面面积吸附容容量粒度分分布强度二、大大孔吸吸附树树脂的的预处处理1、树树脂预预处理理的方方法回流提提取法法渗漉法法水蒸气气蒸馏馏法2、树树脂预预处理理的溶溶剂乙醇丙酮异丙醇醇2～5％盐盐酸2～5％氢氢氧化化钠3、渗渗漉法法纯化化树脂脂色谱柱柱：不不锈钢钢柱；；径高高比为为1:3～～1:7装柱：：湿法法装柱柱洗脱溶溶剂：：①乙醇醇→2～5％盐盐酸→→2～～5％％NaOH→→水②甲醇醇→2～5％盐盐酸→→2～～5％％NaOH→→水③混合合溶剂剂→2～5％盐盐酸→→2～～5％％NaOH→→水洗脱方方法：：①乙醇醇法：：乙醇醇浸泡泡12h→→2BV洗脱→→浸泡泡3～～5h→→2BV洗洗脱→→浸泡泡3～～5h→→3～～5BV洗洗脱→→浸泡泡3～～5h→→3～～5BV洗洗脱→→2～～3BV盐盐酸浸浸泡2～4h→→洗洗脱→→水洗洗脱→→2～～3BVNaOH浸浸泡2～4h→→洗洗脱→→水洗洗脱②混合合溶剂剂法：：混合溶溶剂浸浸泡12h→→2BV洗脱→→浸泡泡3～～5h→→2BV洗洗脱→→浸泡泡3～～5h→→3～～5BV洗洗脱→→2～～3BV盐盐酸浸浸泡2～4h→→洗洗脱→→水洗洗脱→→2～～3BVNaOH浸浸泡2～4h→→洗洗脱→→水洗洗脱③新方方法：：乙醇浸浸泡3～5h→→3～5BV乙醇洗洗脱→→2～3BV盐酸酸浸泡泡2～～4h→→洗脱脱→水水洗脱脱→2～3BVNaOH浸泡泡2～～4h→→洗脱脱→水水洗脱脱三、大大孔吸吸附树树脂的的再生生再生溶溶剂的的选择择①乙醇醇：50％％→95％％②甲醇醇：50％％→100％③异丙丙醇：：④丙酮酮：50％％→100％⑤碱性性乙醇醇溶液液：⑥2～～5％％盐酸酸：⑦2～～5％％NaOH：洗脱方方法①正洗洗脱：：②逆流流洗脱脱：四、大大孔吸吸附树树脂在在新药药研究究中的的应用用1、适适用的的新药药类型型中药有有效成成分的的粗分分和精精制单味中中药有有效部部位的的制备备中药复复方有有效部部位的的制备备注意：：①性质质相似似成分分可混混煎后后一起起制备备②各味味药所所含成成分性性质差差别较较大的的复方方应单单独提提取后后，再再制备备③单味味药有有效成成分性性质差差别较较大的的应分分别制制备2、成成分的的类型型与树树脂的的选择择脂溶性性成分分包括括甾体体类、、二萜萜、三三萜、、黄酮酮、木木脂素素、香香豆素素、生生物碱碱等：：应选择择非极极性或或弱极极性的的树脂脂，如如D101、AB-8、、HPD100等皂苷和和生物物碱苷苷类成成分：：应选择择弱极极性或或极性性树脂脂，如如D201、D301、、HPD300、HPD600、、AB-8、NKA-9等黄酮苷苷、蒽蒽醌苷苷、木木脂素素苷、、香豆豆素苷苷等：应选择择合成成原料料中加加有甲甲基丙丙烯酸酸甲酯酯或丙丙烯氰氰的树树脂，，如D201、、D301、HPD600、、NKA-9等等环烯醚醚萜苷苷类成成分：：应选择择极性性树脂脂，如如D301、HPD600、、NKA-9等等3、树树脂用用于新新药研研究应应考察察的内内容(1)树树脂型型号的的选择择①比吸附附值考考察②分离离性能能考察察(2)药材材－树树脂比比例的的考察察(3)色谱谱柱的的径高高比考考察(4)洗脱脱溶剂剂的考考察(5)吸附附流速速和洗洗脱流流速考考察(6)收集集洗脱脱液量量考察察(7)树脂脂的使使用寿寿命考考察(8)工艺艺放大大试验验4、树树脂分分离条条件的的正交交试验验表头的的设计计因素药药材材－树树脂色色谱柱柱洗洗脱脱流速速收收集集洗脱脱水平比比例例径径高比比BV/h液液量11:11:31321:21:52531:31:737实例一一：某某中药药中苯苯乙醇醇苷类类成分分的分分离、、精制制该中药药所含含的成成分：：苯乙乙醇苷苷类、、环烯烯醚萜萜及其其苷类类、木木脂素素及其其苷类类、多多元醇醇、水水溶性性生物物碱、、单糖糖、双双糖、、氨基基酸等等1、树树脂型型号的的考察察2、树树脂用用量和和吸附附次数数的考考察3、洗洗脱液液乙醇醇浓度度的考考察乙醇浓浓度20％％40％60％％80％洗脱量量9倍倍5倍4倍3倍检出杂杂质脂脂溶性性脂脂溶溶性成分成成分4、收收集洗洗脱液液量的的考察察第一次次洗脱脱第二次次洗脱脱洗脱溶溶剂水水洗洗脱40％％乙醇醇洗脱脱收集量45TLC检测未未检出出糖难难检出苯乙乙醇苷洗脱溶剂水水洗洗脱40％％乙醇洗脱脱收集量34TLC检测未未检出出糖难难检出苯乙乙醇苷实例二、某某中药中黄黄酮苷类成成分的分离离、精制1、树脂型型号的考察察3、洗脱条条件的正交交试验5、成品中中有机残留留物的限量量检查检查方法：：气相色谱法法检查成分：：应根据树脂脂合成中所所接触的有有机成分确确定检查成成分测定方法：：顶空进样或或溶剂法含量限度：：苯：2ppm；其它：20ppm方法学考察察：①溶剂的气气相色谱检检测②基线噪音音和最低检检测限的测测定③对照品的的测定④供试品的的测定标准的书写写格式①色谱条件件和系统适适用性试验验②对照品溶溶液的制备备③供试品溶溶液的制备备④测定法⑤起草说明明五、大孔吸吸附树脂在在中药及植植物提取物物生产中的的应用1、槐花米米中黄酮苷苷类成分的的分离、纯纯化槐花花穗9.9kgMeOH提取36LHP20吸附MeOH溶溶解50％-10L+100%-10LLH-20吸附MeOH溶解CHP20P吸附50%EtOH流份份ODS层析分离45%MeOH洗脱脱3`,4`,5`,7`-四四羟基黄酮酮-3`-葡萄萄糖酸苷2、大孔树树脂在绞股股蓝总皂苷苷精制中的的应用绞股蓝水煎液D101树脂水洗脱弃去95％乙醇醇洗脱收集洗脱液液浓缩得总皂皂苷3、大孔树树脂在贯叶叶金丝桃