非发酵菌及检验课件

非发酵革兰阴性杆菌

p335程曦复习疑为伤寒沙门菌感染，应如何进行微生物学检验？Widaltest的定义和结果解释。根据生化反应和O抗原，可将志贺菌属怎样分群？请解释什么是“外斐试验”。内容概述假单胞菌属（铜绿假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌）不动杆菌属（鲍曼不动杆菌）军团菌属

定义：非发酵菌(nonfermenters)革兰阴性杆菌，指一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用糖类的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌。主要特点：

菌属菌种多，在分类学上分别属于不同的科、属和种；大多数不发酵糖类或仅以氧化形式利用糖类；大多数为专性需氧菌；主要存在于外界环境中，大多数为条件致病菌，是目前医院感染的主要病原菌。常见菌属假单胞菌属(Pseudomonas)不动杆菌属(Acinetobacter)窄食单胞菌属(Stenotrophmonas)伯克菌属（Burkholderia）产碱杆菌属(Alcaligenes)无色杆菌属(Achromobacter)莫拉菌属(Moraxella)黄杆菌属(Flavobaterium)艾肯杆菌属(Eikenella)土壤杆菌属(Agrobacterium)黄单胞菌属(Xanthomonas)丛毛单胞菌属(Comamonas)金氏杆菌属(Kingella)食酸菌属（Acidovorax）鉴定系统非发酵菌生化鉴定系统一、分类P335假单胞菌属包括200多个菌种，尤以铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）多见。恶臭假单胞菌生物变种(P.puticabiovars)斯氏假单胞菌（P.stutizeri）曼多辛假单胞菌(P.mendocina)产碱假单胞菌(P.alcaligenes)假产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)三、铜绿假单胞菌（一）细菌特性1.形态染色革兰阴性杆菌，菌体细长，且长短不一，有时呈球杆状或丝状，单个、成对或短链状排列，无芽胞，有荚膜，菌体一端有单鞭毛。普通琼脂平板：菌落圆形、大小不一、边缘不整齐、扁平稍隆起、湿润光滑、常成融合状态。血琼脂平板：菌落大而扁平、有金属光泽、有生姜味，菌落周围有透明溶血环。麦康凯琼脂平板：菌落微小、无色透明，中心常呈绿色。3.生化反应氧化酶＋

O/F试验为氧化型（O）精氨酸双水解酶试验＋硝酸盐还原试验＋。4.抗原构造P338O抗原：

2种，成分分别是外膜蛋白（属特异性）和脂多糖（型特异性）。H抗原黏液抗原（S抗原）菌毛抗原2.所致疾病医院感染的主要病原菌。烧伤创面感染、皮肤感染、肺部感染、泌尿道感染、中耳炎、脑膜炎、心内膜炎、败血症、急性角膜穿孔等。也可引起小儿类似沙门菌和霍乱样的严重腹泻。多重耐药，能天然抗多种药物耐药机制：酶、菌体成分、外排泵、外膜渗透性改变、生物膜等三、其它假单胞菌归属奈瑟氏菌科。根据DNA-DNA杂交和营养特征分为32个基因种，但只有10个基因种16种不动杆菌有菌名，临床常见：基因种1：醋酸钙不动杆菌(A.calcoaceticus)基因种2：鲍曼不动杆菌(A.baumannii)基因种4：溶血不动杆菌(A.haemolyticus)基因种5：琼氏不动杆菌(A.junii)基因种7：约氏不动杆菌(A.johnsonii)基因种8：洛菲不动杆菌(A.1woffi)一、分类1.形态染色

革兰阴性杆菌，多为球杆状，单个存在或成双排列，无芽胞，无鞭毛，粘液型菌株有荚膜。二、细菌特性2.培养特性专性需氧，营养要求不高，最适生长温度为37℃，但有些菌株可在42℃生长。

血琼脂平板：菌落圆形、光滑、边缘整齐、灰白色，多数菌株不溶血，有些β溶血。麦康凯琼脂平板：菌落呈粉红色，但在SS琼脂培养基上只有部分菌株生长。三、临床意义条件致病菌，医院感染的常见病原菌。

可从各种临床标本如血液、尿液、脓液、呼吸道分泌物及脑脊液等中分离出来。鲍曼不动杆菌P342对全部氨基青霉素，第一、二代头孢菌素，第一代喹诺酮类抗生素天然耐药。四、微生物学检验P17235℃18～24h尿液、痰液、脓汁直接涂片革兰染色镜检分离培养（BAP、MAC）可疑菌落全面生化反应动力KIA革兰阴性球杆菌氧化酶阴性阴性最终鉴定底层斜面不变色报告窄食（寡养）单胞菌属P343

(Stenotrophmonas）寡养单胞菌目前5个种，最重要的是嗜麦芽寡养单胞菌（S.maltophilia）。其分类经过了两次改名：假单胞菌属（嗜麦芽假单胞菌）→黄单胞菌属（嗜麦芽黄单胞菌）→窄食单胞菌属（嗜麦芽寡养单胞菌）。一、分类1.形态染色

革兰阴性杆菌，有一端或两端丛鞭毛，多数在三根以上，无芽胞，无荚膜，可产生菌毛。二、细菌特性专性需氧，营养要求不高，最适生长温度35℃，4℃不生长。血琼脂平板：菌落血平板上呈淡紫绿色，有氨味；麦康凯琼脂平板：菌落呈淡黄色。2.培养特性3.生化反应

氧化酶试验－

O/F试验：麦芽糖＋，但葡萄糖氧化分解可阴性硝酸盐还原试验＋赖氨酸脱羧酶＋

DNA酶＋

广泛分布于自然界中，亦可寄居于人的呼吸道和肠道中，为条件致病菌。临床感染标本中，除铜绿假单胞菌之外最常见的非发酵革兰阴性杆菌。

三、临床意义耐药性强对亚胺培南天然耐药

军团菌属P375

（Legionella）

一、分类军团菌科，军团菌属。已命名的菌种共有45种，64个血清型。现已命名了39种军团杆菌，至少19种是人类肺炎的病原。其中最常见病原体为嗜肺军团菌(占病例的85%~90%)。二、细菌特性

1.形态染色革兰阴性杆菌，有端鞭毛或侧鞭毛，动力阳性。无芽胞，无荚膜免疫荧光染色革兰染色菌落扫描电镜图2.培养特性需氧菌，首次分离需5%CO2，营养要求严格，常用培养基为缓冲活性炭-酵母琼脂培养基（BCYE）。生长缓慢，在BCYE上3～5d形成直径1～2mm，圆形凸起、灰白色有光泽的菌落，初期外观呈刻花玻璃样花纹，继续培养消失。军团菌属3.生化反应触酶阳性部分菌株氧化酶阳性液化明胶不分解糖类不还原硝酸盐脲酶阴性嗜肺军团菌能水解马尿酸盐多数菌株β-内酰胺酶阳性4.抵抗力对热和常用化学消毒剂敏感。蒸馏水中可存活100天以上，下水道污水中可存活1年。三、临床意义

广泛存在于水和土壤中，在人工管道的水源中常见，如医院空调器的冷却水、淋浴头和辅助呼吸机等产生的气溶胶颗粒中常有此菌，是医院感染的主要病原菌之一。临床表现多种多样，主要有流感样型（轻症型）、肺炎型（重症型）和肺外感染三种临床类型。最常见的是肺炎型。

军团菌属致病性与免疫性该菌为细胞内寄生菌。

主要致病物质是：微荚膜、菌毛、毒素和多种酶类。通过呼吸道侵入机体嗜肺军团菌病军团菌属微生物学检查与防治原则：

根据病情采集痰液、气管分泌物、血液及病理组织标本等。用荧光抗体染色镜检或培养后做生化鉴定（p247）。定时清洁空调，加强监测消毒用红霉素、庆大霉素等治疗军团菌为细菌性肺炎的前3位病原之一，早已存在于我们生活中，并对人群构成了潜在威胁

军团菌病是1976年在美国费城首次被发现的急性呼吸道传染病，当时在退伍军人大会上暴发流行，导致221人发病，34人死亡。此后，世界上许多国家均有军团菌病的发生，每次暴发都引起世人的广泛关注。世界卫生组织由此把本病列入疾病传报范围。我国自1982年在南京首次证实军团菌病例以来，全国已有多起军团菌病的散发与暴发流行的报道。水是军团菌的自然栖息地

目前，随着百姓生活水平的逐步提高，城市中高层建筑的日益增多，热水管、喷水池、空调、淋浴及加湿器等设备的普及，这些都有可能增加军团菌病的危险性。因而，军团菌病在国际上已被视为“现代生活文明病”。国际化标准组织（ISO）早已把水源中军团菌的检测作为水质标准细菌检验的一部分，世界上许多国家的宾馆、饭店都必须有“军团菌检验合格”的证明。我国也于2006年3月颁布了《公共场所集中空调通风系统卫生规范》，其中明确规定，冷却水、冷凝水中不得检出军团菌。四、微生物学检验血清间接荧光抗体染色、ELISA等直接荧光抗体PCR、DNA探针分离培养BCYE或BCYE＋抗生素血琼脂平板、巧克力琼脂平板增菌培养双相培养基BCYE35℃2.5%CO224h生长（非军团菌）48h后生长革兰染色姬美耐染色革兰阳性菌非