第二章新药开发的质量标准概论课件

第三节原料药及制剂鉴别一、原料药鉴别依据药典进行的药物分析主要有三大项：鉴别、检查和含量测定。药物的鉴别试验（identificationtest）是用于鉴别药物的真伪，在药物分析中属首项工作，只有证实被分析的药物是真的，才有必要接着进行检查、含量测定。

第三节原料药及制剂鉴别一、原料药鉴别1（一）鉴别的项目

（1）性状药物的性状反映了药物特有的物理性质，一般包括外观、嗅、味、溶解度以及物理常数等。

（2）一般鉴别试验（generalidentificationtest）以药物的化学结构及其物理化学性质为依据，通过化学反应来鉴别药物真伪的。（3）专属鉴别试验（specificidentificationtest）根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性的不同，选用某些特有的灵敏定性反应，来鉴别药物真伪的。（一）鉴别的项目（1）性状药物的性状反映了药物特有的物理2（二）鉴别试验条件鉴别试验是以所采用的化学反应或物理特性产生的明显的易于觉察的特征变化为依据。因此，能影响鉴别试验判定结果的特征变化的因素都是应当精心选择和严格控制的。也就是说，鉴别试验应该是在规定条件下完成的，否则鉴别试验的结果是不可信的。（二）鉴别试验条件鉴别试验是以所采用的化学反应或物理特性产生3（1）溶液的浓度。主要指被鉴别药物的浓度，及所用试剂的浓度。（2）溶液的温度。温度对化学反应的影响很大，一般温度每升高10℃，可使反应速度增加2-4倍。（3）溶液的酸碱度。许多鉴别反应都需要在一定酸碱度的条件下才能进行。（4）干扰成分的存在。在鉴别试验中，如药物结构中的其它部分或药物制剂中的组分也可参加反应，产生干扰，应选择专属性更高的鉴别反应将其消除或将其分离。（5）试验时间。（1）溶液的浓度。主要指被鉴别药物的浓度，及所用试剂的浓度。4（三）鉴别试验的灵敏度（1）反应灵敏度和空白试验反应的灵敏度（sensitivity）：在一定条件下，能在尽可能稀的溶液中观测出尽可能少量的供试品，反应对这一要求所能满足的程度。

空白试验（blanktest）：所谓空白试验，就是在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂同样加入进行的试验。（三）鉴别试验的灵敏度（1）反应灵敏度和空白试验5（2）提高反应灵敏度的方法在实际工作中，常采用以下措施来提高反应的灵敏度。1）加入与水互不相溶的有机溶剂在鉴别试验中，如生成物具有颜色并颜色很浅时，可利用加入少量与水互不相溶的有机溶剂，浓集有色生成物，使有机溶剂中颜色变深，易于观测。2）改进观测方法例如，将目视观测溶液的颜色，改为可见分光光度法；将观测生成沉淀改为比浊度法等。（2）提高反应灵敏度的方法6二、药物的一般鉴别试验（一）鉴别方法1.化学鉴别法2.光谱鉴别法3.色谱鉴别法二、药物的一般鉴别试验（一）鉴别方法7（一）鉴别方法1.化学鉴别法（1）干法将供试品加适当试剂在规定的温度条件下（一般是高温）进行试验，观测时所发生的特异现象。1）焰色试验：常用干法，利用某些元素所具有的特异焰色，可鉴别它们为哪一类盐类药物。

2）加热分解：在适当的温度条件下，加热使供试品分解，生成有特殊气味的气体。

（一）鉴别方法8（2）湿法系指将供试品和试剂在适当的溶剂中，于一定条件下进行反应，发生易于观测的化学变化，如颜色、沉淀、气体、荧光等。

1)呈色反应鉴别法2)沉淀生成反应鉴别法

3)荧光反应鉴别法4)气体生成反应鉴别法（2）湿法系指将供试品和试剂在适当的溶剂中，于一定条件下进91)呈色反应鉴别法三氯化铁呈色反应---酚羟基或水解后产生酚羟基；异羟肟酸铁反应---多为芳酸及其酯类、酰胺类；茚三酮呈色反应---脂肪氨基；重氮化-偶合显色反应---芳伯氨基或能产生芳伯氨基；氧化还原显色反应及其它颜色反应。水杨酸三氯化铁紫色甲硝唑NaOH溶液微温紫红色2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇1)呈色反应鉴别法三氯化铁呈色反应---酚羟基或水解后产生102)沉淀生成反应鉴别法与重金属离子的沉淀反应在一定条件下，药物和重金属离子反应，生成不同形式的沉淀；与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应多为生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐；其它沉淀反应。甲硝唑NaOH溶液微温稀盐酸过量NaOH橙红色紫红色黄色沉淀石杉碱甲碘化铋钾乙醇溶解橙黄色沉淀2)沉淀生成反应鉴别法与重金属离子的沉淀反应在一定条件下113)荧光反应鉴别法药物本身可在可见光下发射荧光；药物溶液加硫酸使呈酸性后，在可见光下发射荧光；药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其它反应后，发射荧光。乙醇溶解绿色荧光双嘧达莫紫外硫酸橙红色炔雌醚黄绿色荧光水红色沉淀3)荧光反应鉴别法药物本身可在可见光下发射荧光；乙醇溶解绿124)气体生成反应鉴别法大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气；化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体；含碘有机药物经直火加热，可生成紫色碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生乙酸乙酯的香味。加热NaOH溶液浑浊水合氯醛氯仿加水硫酸盐酸可卡因苯甲酸甲酯加热冷却苯甲酸结晶4)气体生成反应鉴别法大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以13硫酸3-5滴富马酸亚铁50mg间苯二酚100mg暗红色半固体状水25ml溶解过滤取滤液1ml水10ml橙红色绿色荧光NaOH试液红色荧光（E）-2-丁烯二酸亚铁盐硫酸富马酸亚铁间苯二酚暗红色半水溶解取滤液水橙红色NaOH试14水杨酸三氯化铁甲硝唑NaOH溶液微温稀盐酸过量NaOH橙红色紫红色黄色沉淀紫色石杉碱甲碘化铋钾乙醇溶解加热NaOH溶液浑浊橙黄色沉淀水合氯醛乙醇溶解绿色荧光双嘧达莫氯仿加水硫酸盐酸可卡因苯甲酸甲酯加热冷却苯甲酸结晶水杨酸三氯化铁甲硝唑NaOH溶液微温稀盐酸过量NaOH橙红色152.光谱鉴别法

（1）紫外光谱鉴别法常用的方法有：

1)标准品对照法；

2)规定吸收波长法；

3)规定吸收波长和相应的吸收度法；

4)规定吸收波长和吸收系数法；

5)规定吸收波长和吸收度比值法。

（2）红外光谱鉴别法红外光谱法是一种专属性很强、应用较广（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。

2.光谱鉴别法（1）紫外光谱鉴别法163.色谱鉴别法（1）薄层色谱鉴别法（2）高效液相色谱鉴别法一般规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱条件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。含量测定方法为内标法时，可要求供试品溶液和对照品溶液色谱图中药物峰保留时间与内标物峰的保留时间比值应相同。（3）气相色谱鉴别（4）纸色谱鉴别法3.色谱鉴别法（1）薄层色谱鉴别法17三、原料药结构确证研究的基本内容包括结构确证方案的确定、样品的要求、药物的名称、结构式、理化常数、结构确证经常使用的方法或手段及其目的和意义、不同结构类型药物的不同要求、综合解析等方面进行了说明。常用的分析测试方法有紫外可见吸收光谱（简称：紫外光谱）、红外吸收光谱（简称“红外光谱”）、核磁共振谱、质谱、比旋度、X-射线单晶衍射（简称：单晶X-衍射）或/和X-射线粉末衍射（简称：粉末X-衍射）、差示扫描量热法、热重等。三、原料药结构确证研究的基本内容包括结构确证方案的确定、样品18不同药物的研究方法一般药物手性药物不含金属元素的有机盐类或复合物金属盐类和络合物半合成药物多晶型药物含有结晶水或结晶溶剂的药物合成多肽药物和多糖类药物多组份药物其它

12345678910一般情况下，应采用原料药制备工艺中产品的精制方法对样品进行精制，并采用质量标准中的方法测其纯度和杂质，供试样品的纯度应大于99.0%，杂质含量应小于0.5%。不同药物的研究方法一般药物手性药物不含金属元素的有机盐类或复19药物元素组成紫外吸收光谱红外吸收光谱粉末X-衍射质谱核磁共振结构确证研究的一般内容药物元素组成紫外吸收光谱红外吸收光谱粉末X-衍射质谱核磁共振20四、制剂的鉴别(一)性状制剂的性状项下，应依次描述样品的外形和颜色，如片剂是什么颜色的压制片，或包衣片(包薄膜衣或糖衣)除去包衣后，片芯的颜色，片子的形状，如异形片(长条形，椭圆形，三角形等)也应描述，片面有无印字或刻痕或有商标记号等也应如实记述。胶囊剂内容物的颜色、形状，是否有粘连，结块等均应记述。四、制剂的鉴别(一)性状21注射液一般应为澄明液体(水溶液)，但也有混悬液或粘稠性溶液，都要特别描述清楚，对注射液的颜色应根据颜色色号相应描述，以黄色标准比色液为基础，浅于1号或稀释一倍的1号的为“无色”，浅于2号的为“几乎无色”，浅于4号的为“微黄色”，浅于6号的为“淡黄色”，浅于8号的为“黄色”。贮藏过程如性状有变化，应予以说明。注射液一般应为澄明液体(水溶液)，但也22（二）鉴别制剂的鉴别试验，其方法要求同原料药，所以除尽可能采用与原料药相同的方法外。注意：①由于多数制剂中均加有辅料，不宜用原料药性状项下的物理常数作为鉴别，也不宜直接用红外吸收光谱作为鉴别，必要时应增订能与同类药或化学结构近似药物相区别的鉴别试验；（二）鉴别制剂的鉴别试验，其方法要求同原料药，所以除尽可能采23②有些制剂的主药含量甚微，必须采用灵敏度较高，专属性较强，操作较简便的方法，如薄层色谱法等；③由于制剂中辅料的干扰，应分离除去。常用的方法是用溶剂将主药提取出来后。除去溶剂，残留物照原料项下鉴别；②有些制剂的主药含量甚微，必须采用灵敏度较高，专属性较强，操24④由于制剂的含量测定采用紫外分光光度法，可用含量测定的最大可吸收波长或特定波长下吸收度或吸收度比值作鉴别。采用气相色谱法或高效液相色谱法测定含量时，也可以其保留时间作为鉴别；⑤对异构体药物应有专属性强的鉴别试验，制剂的鉴别试验如采用原料药项下的鉴别时，其文字叙述应根据不同的剂型如何除去辅料进行描述。④由于制剂的含量测定采用紫外分光光度法，可用含量测定的最大可25第二章新药开发的质量标准概论课件26鉴别

鉴别条件、灵敏度、鉴别方法鉴别27第三节原料药及制剂鉴别一、原料药鉴别依据药典进行的药物分析主要有三大项：鉴别、检查和含量测定。药物的鉴别试验（identificationtest）是用于鉴别药物的真伪，在药物分析中属首项工作，只有证实被分析的药物是真的，才有必要接着进行检查、含量测定。

第三节原料药及制剂鉴别一、原料药鉴别28（一）鉴别的项目

（1）性状药物的性状反映了药物特有的物理性质，一般包括外观、嗅、味、溶解度以及物理常数等。

（2）一般鉴别试验（generalidentificationtest）以药物的化学结构及其物理化学性质为依据，通过化学反应来鉴别药物真伪的。（3）专属鉴别试验（specificidentificationtest）根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性的不同，选用某些特有的灵敏定性反应，来鉴别药物真伪的。（一）鉴别的项目（1）性状药物的性状反映了药物特有的物理29（二）鉴别试验条件鉴别试验是以所采用的化学反应或物理特性产生的明显的易于觉察的特征变化为依据。因此，能影响鉴别试验判定结果的特征变化的因素都是应当精心选择和严格控制的。也就是说，鉴别试验应该是在规定条件下完成的，否则鉴别试验的结果是不可信的。（二）鉴别试验条件鉴别试验是以所采用的化学反应或物理特性产生30（1）溶液的浓度。主要指被鉴别药物的浓度，及所用试剂的浓度。（2）溶液的温度。温度对化学反应的影响很大，一般温度每升高10℃，可使反应速度增加2-4倍。（3）溶液的酸碱度。许多鉴别反应都需要在一定酸碱度的条件下才能进行。（4）干扰成分的存在。在鉴别试验中，如药物结构中的其它部分或药物制剂中的组分也可参加反应，产生干扰，应选择专属性更高的鉴别反应将其消除或将其分离。（5）试验时间。（1）溶液的浓度。主要指被鉴别药物的浓度，及所用试剂的浓度。31（三）鉴别试验的灵敏度（1）反应灵敏度和空白试验反应的灵敏度（sensitivity）：在一定条件下，能在尽可能稀的溶液中观测出尽可能少量的供试品，反应对这一要求所能满足的程度。

空白试验（blanktest）：所谓空白试验，就是在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂同样加入进行的试验。（三）鉴别试验的灵敏度（1）反应灵敏度和空白试验32（2）提高反应灵敏度的方法在实际工作中，常采用以下措施来提高反应的灵敏度。1）加入与水互不相溶的有机溶剂在鉴别试验中，如生成物具有颜色并颜色很浅时，可利用加入少量与水互不相溶的有机溶剂，浓集有色生成物，使有机溶剂中颜色变深，易于观测。2）改进观测方法例如，将目视观测溶液的颜色，改为可见分光光度法；将观测生成沉淀改为比浊度法等。（2）提高反应灵敏度的方法33二、药物的一般鉴别试验（一）鉴别方法1.化学鉴别法2.光谱鉴别法3.色谱鉴别法二、药物的一般鉴别试验（一）鉴别方法34（一）鉴别方法1.化学鉴别法（1）干法将供试品加适当试剂在规定的温度条件下（一般是高温）进行试验，观测时所发生的特异现象。1）焰色试验：常用干法，利用某些元素所具有的特异焰色，可鉴别它们为哪一类盐类药物。

2）加热分解：在适当的温度条件下，加热使供试品分解，生成有特殊气味的气体。

（一）鉴别方法35（2）湿法系指将供试品和试剂在适当的溶剂中，于一定条件下进行反应，发生易于观测的化学变化，如颜色、沉淀、气体、荧光等。

1)呈色反应鉴别法2)沉淀生成反应鉴别法

3)荧光反应鉴别法4)气体生成反应鉴别法（2）湿法系指将供试品和试剂在适当的溶剂中，于一定条件下进361)呈色反应鉴别法三氯化铁呈色反应---酚羟基或水解后产生酚羟基；异羟肟酸铁反应---多为芳酸及其酯类、酰胺类；茚三酮呈色反应---脂肪氨基；重氮化-偶合显色反应---芳伯氨基或能产生芳伯氨基；氧化还原显色反应及其它颜色反应。水杨酸三氯化铁紫色甲硝唑NaOH溶液微温紫红色2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇1)呈色反应鉴别法三氯化铁呈色反应---酚羟基或水解后产生372)沉淀生成反应鉴别法与重金属离子的沉淀反应在一定条件下，药物和重金属离子反应，生成不同形式的沉淀；与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应多为生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐；其它沉淀反应。甲硝唑NaOH溶液微温稀盐酸过量NaOH橙红色紫红色黄色沉淀石杉碱甲碘化铋钾乙醇溶解橙黄色沉淀2)沉淀生成反应鉴别法与重金属离子的沉淀反应在一定条件下383)荧光反应鉴别法药物本身可在可见光下发射荧光；药物溶液加硫酸使呈酸性后，在可见光下发射荧光；药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其它反应后，发射荧光。乙醇溶解绿色荧光双嘧达莫紫外硫酸橙红色炔雌醚黄绿色荧光水红色沉淀3)荧光反应鉴别法药物本身可在可见光下发射荧光；乙醇溶解绿394)气体生成反应鉴别法大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气；化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体；含碘有机药物经直火加热，可生成紫色碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生乙酸乙酯的香味。加热NaOH溶液浑浊水合氯醛氯仿加水硫酸盐酸可卡因苯甲酸甲酯加热冷却苯甲酸结晶4)气体生成反应鉴别法大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以40硫酸3-5滴富马酸亚铁50mg间苯二酚100mg暗红色半固体状水25ml溶解过滤取滤液1ml水10ml橙红色绿色荧光NaOH试液红色荧光（E）-2-丁烯二酸亚铁盐硫酸富马酸亚铁间苯二酚暗红色半水溶解取滤液水橙红色NaOH试41水杨酸三氯化铁甲硝唑NaOH溶液微温稀盐酸过量NaOH橙红色紫红色黄色沉淀紫色石杉碱甲碘化铋钾乙醇溶解加热NaOH溶液浑浊橙黄色沉淀水合氯醛乙醇溶解绿色荧光双嘧达莫氯仿加水硫酸盐酸可卡因苯甲酸甲酯加热冷却苯甲酸结晶水杨酸三氯化铁甲硝唑NaOH溶液微温稀盐酸过量NaOH橙红色422.光谱鉴别法

（1）紫外光谱鉴别法常用的方法有：

1)标准品对照法；

2)规定吸收波长法；

3)规定吸收波长和相应的吸收度法；

4)规定吸收波长和吸收系数法；

5)规定吸收波长和吸收度比值法。

（2）红外光谱鉴别法红外光谱法是一种专属性很强、应用较广（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。

2.光谱鉴别法（1）紫外光谱鉴别法433.色谱鉴别法（1）薄层色谱鉴别法（2）高效液相色谱鉴别法一般规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱条件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。含量测定方法为内标法时，可要求供试品溶液和对照品溶液色谱图中药物峰保留时间与内标物峰的保留时间比值应相同。（3）气相色谱鉴别（4）纸色谱鉴别法3.色谱鉴别法（1）薄层色谱鉴别法44三、原料药结构确证研究的基本内容包括结构确证方案的确定、样品的要求、药物的名称、结构式、理化常数、结构确证经常使用的方法或手段及其目的和意义、不同结构类型药物的不同要求、综合解析等方面进行了说明。常用的分析测试方法有紫外可见吸收光谱（简称：紫外光谱）、红外吸收光谱（简称“红外光谱”）、核磁共振谱、质谱、比旋度、X-射线单晶衍射（简称：单晶X-衍射）或/和X-射线粉末衍射（简称：粉末X-衍射）、差示扫描量热法、热重等。三、原料药结构确证研究的基本内容包括结构确证方案的确定、样品45不同药物的研究方法一般药物手性药物不含金属元素的有机盐类或复合物金属盐类和络合物半合成药物多晶型药物含有结晶水或结晶溶剂的药物合成多肽药物和多糖类药物多组份药物其它

12345678910一般情况下，应采用原料药制备工艺中产品的精制方法对样品进行精制，并采用质量标准中的方法测其纯度和杂质，供试样品的纯度应大于99.0%，杂质含量应小于0.5%。不同药物的研究方法一般药物手性药物不含金属元素的有机盐类或复46药物元素组成紫外吸收光谱红外吸收光谱粉末X-衍射质谱核磁共振结构确证研究的一般内容药物元素组成紫外吸收光谱红外吸收光谱粉末X-衍射质谱核磁共振47四、制剂的鉴别(一)性状