药物定量分析与分析方法验证课件

药物定量分析与分析方法验证课件1基本要求

一、掌握定量分析方法验证的效能指标。二、熟悉定量分析样品的前处理方法。三、了解定量分析样品的前处理方法的进展及在药物分中的应用。返回基本要求一、掌握定量分析方法验证的效能指标。返2

第一节

定量分析样品的前处理方法

一、概述

1.为什么要对定量分析的样品进行前处理？

含卤素有机药物R-X（F，Cl,Br,I）

金属有机药物R-O-Me（有机酸或酚的含金属有机药物金属盐；结合不牢固）

有机金属药物R-Me

（结合牢固）

2.常用的处理方法不经有机破坏的分析方法药物分析中常用的分析方法经有机破坏的分析方法第一节定量分析样品的前处理方法3二、不经有机破坏的分析方法（一）直接测定法例如：富马酸亚铁

溶于热稀矿酸，采用铈量法，邻二氮菲作指示剂

二、不经有机破坏的分析方法4（二）经水解后测定法

1.直接回流后测定法例如：三氯叔丁醇的含量测定

CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH(CH3)2CO+3NaCl+HCOONa+2H2ONaCl+AgNO3AgCl+NaNO3AgNO3+NH4SCNAgSCN+NH4NO3

2.用硫酸水解后测定法例如：硬脂酸镁的含量测定

Mg(C17H35COO)2+H2SO4

MgSO4+2C17H35COOH

H2SO4+2NaOHNa2SO4

+2H2O

△（二）经水解后测定法△5（三）经氧化还原后测定法

1.碱性还原后测定例如：泛影酸的含量测定

2.酸性还原后测定例如：碘番酸的含量测定Zn还原后银量法

（三）经氧化还原后测定法63.利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量

（1）含锑药物例如：葡萄糖酸锑的含量测定

Sb5++2KISb3++2K+

++I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6

（2）含铁药物2Fe3++2KI2Fe2++2K++I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6H+3.利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量7

三、经有机破坏的分析方法

湿法破坏

药物分析中常用的有机破坏的方法有干法破坏

HNO3-HClO4法氧瓶燃烧法(一)湿法破坏HNO3-H2SO4法

H2SO4-硫酸盐法

HNO3-H2SO4-HClO4法；H2SO4-H2O2；H2SO4-KMnO4(二)干法破坏加Na2CO3或MgO以助灰化；温度控制在420℃

三、经有机破坏的分析方法8(三)氧燃瓶燃烧法(oxygenflaskcombustionmethod)1.仪器装置500ml,1000ml,2000ml,磨口、硬质玻璃锥形瓶2.称样固体样；液体样要求详见P683.燃烧分解操作法4.吸收液的选择用于X、S、Se等的鉴别、检查、含量测定时多数是H2O或H2O-NaOH；少数为H2O-NaOH-H2O2.(三)氧燃瓶燃烧法(oxygenflaskcombu9应用示例：碘苯酯的测定返回应用示例：碘苯酯的测定返回10第二节定量分析方法特点

一、容量分析法（一）容量分析法的特点

操作简单、快速；比较准确（RSD＜0.2%）；仪器普通易得。第二节定量分析方法特点一、容量分析法11（二）容量分析法的计算问题

1.滴定度（T）的概念每1mlmol溶液相当于被测物质的量(mg)2.滴定度的计算aA+bBcC+dD

T=M×b/a×B

3.百分含量的计算（1）直接滴定法D%=V×F×T/W×100%

F=实际标定的浓度/规定的浓度

（2）间接滴定法（回滴定法；剩余滴定法）

D%=（VO–VB)×F×T/W×100%（二）容量分析法的计算问题12

二、光谱分析法

（一）紫外-可见分光光度法（200nm～760nm)灵敏度高，可达10-4g/ml～10-7g/ml1.特点准确度高，SRD（%）为2%～5%仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用范围广。2.朗伯-比耳定律A=ECLE1%1cm=ε×10/M二、光谱分析法13

3.仪器校正和检定

波长校正用汞灯中较强谱线237.38,253.65,275.28,296.73,313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm与576.96nm

或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm进行校正。吸收度的检定：用K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4液至1000ml

波长(nm)235(最小)257(最大)313(最小)350(最大)

E1%1cm124.5144.048.62106.6

杂散光检查：试剂浓度(g/ml)测定波长透光率(%)

NaI1.00220nm＜0.8NaNO25.00340nm＜0.83.仪器校正和检定144.对溶剂的要求:220～240nm241～250nm251～300nm300nm以上溶剂+吸收池A＜0.41＜0.20＜0.10＜0.05

5.测定方法要求供试品溶液的A应在0.3～0.7对照品比较法：Cx=(Ax/Ar)Cr;含量%=Cx×D/W×100%

常用方法吸收系数法：含量%=(E1%1cm

)x/(E1%1cm

)r×100%

计算分光光度法：VA的三点校正法4.对溶剂的要求:15（二）荧光分光光度法

灵敏度高，可达10-10g/ml～10-12g/ml

在低浓度进行测定，防止F与C不成正比及自熄灭作用1.特点用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减灵敏度高，但干扰因素多。

制备荧光衍生物，可提高其灵敏度和选择性。用样品量少，操作简单，方法快速，应用范围较广。

（二）荧光分光光度法162.荧光分析仪有二个单色光器—激发单色光器与发射单色光器；且激发光源、样品池和检测器成直角。3.含量测定常用的方法对照品比较法:Ci=(Ri-Rib)/(Rr-Rrb)×Cr

Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。2.荧光分析仪有二个单色光器—激发单色光器与发射17

三、色谱分析法

按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱方法分类按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；HPLC。（一）HPLC法1.对HPLC仪器一般要求色谱柱、流动相按品种项下要求。色谱柱的理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)22.系统性试验分离度：R=2（tR1–tR2)/(W1+W2);要大于1.5拖尾因子：T=W0.05h/2d1

应在0.9～1.05

18内标法加校正因子测定供试品中主成分含量3.测定方法

标准曲线法

外标法测定供试品中主成分含量外标一点法应用示例：RP-HPLC法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用标准曲线法如头孢拉丁；头孢羟氨苄；头孢唑啉钠用外标一点法内19

（二）GC法1.对GC仪器一般要求载气为氮气；色谱柱为填充或毛细管柱色谱柱的理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)22.系统性试验分离度：R=2（tR1–tR2)/(W1+W2);要大于1.5拖尾因子：T=W0.05h/2d1

应在0.9～1.05

20内标法加校正因子测定供试品中主成分含量

3.测定方法

标准曲线法

外标法测定供试品中主成分含量外标一点法应用示例：Ch.P(2000)收载的月桂卓酮、维生素E及其片剂、注射剂、甲酚皂溶液等均采用GC法中的内标法加校正因子测定含量。返回

21

第三节药品质量标准分析方法验证一、准确度

是指用该方法测定结果与真实值接近的程度，用回收率表示（一）含量测定方法的准确度1.原料药可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确度的另一方法测定的结果进行比较。2.制剂要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。

具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3,共9个数据来评价回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC发时，一般回收率可达98%～102%；容量法可达99.7%～100.3%

第三节药品质量标准分析方法验证22（二）数据要求

回收率%=（测定平均值—空白值）/加入量×100%要求制备高、中、低三浓度的样品，各测定3次。应报告已知加入量的回收率，或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。（二）数据要求23二、精密度

是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果之间的接近程度。

（一）精密度表示方法1.偏差(deviation,d)d=测得值-平均值=Xi-X

2.标准偏差（standarddeviation,SD或S）

S=[(∑Xi–X)2/(n-1)]1/23.相对标准差(relativestandarddeviation,RSD)也称变异系数(coefficientofvariation,CV)RSD=标准偏差/平均值×100%=S/X×100%药物定量分析与分析方法验证课件24（二）重复性、中间精密度及重现性1.重复性在相同条件下,由一个分析人员测定所得结果的精密度.2.中间精密度在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。3.重现性在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。（二）重复性、中间精密度及重现性1.重复性在25（三）数据要求

应报告S或SD、RSD和可信限。用统计学的可信性分析(t或f）。（三）数据要求26

三、专属性是指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性。

（一）鉴别反应应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分的样品均应呈现负反应。三、专属性27（二）含量测定和杂质测定色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说明专属性。

图中应注明各组分的位置，色谱法中分离度应符合要求。在能获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对结果的干扰。在杂质和降解物不能获得的情况下，可用以验证方法和药典方法进行对照；也可用对试样加速破坏的方法，比较两种方法。（二）含量测定和杂质测定28四、检测限（limitofdetection,

LOD)是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量，是限度检验指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。（一）常用的方法

1.非仪器分析目视法用已知浓度被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。2.仪器分析方法

UV法：LOD=f.3S空=C样/A样×

3S空

Flu法：LOD=f.3S空=C样/(F样-F空)×

3S空

GC和HPLC法：

LOD=S/N=2或3

四、检测限（limitofdetection,L29（二）数据要求应附测试图，说明测试过程和检测限结果。（二）数据要求30

五、定量限（limitofquantitation,

LOQ)

是指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求

LOQ.常用信噪比法确定定量限，一般以S/N=10时相应的浓度进行测定。五、定量限（limitofquantitatio31

六、线性

是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。

UV法：首先制备一个标准系列，浓度点n=5;A=0.3～.0.7

建立回归方程C=aA+b;r＞0.9999。HPLC法：制备一个标准系列，浓度点n=5～7;以C对h或A或与内标物的峰面积之比，建立回归方程r＞0.9999。药物定量分析与分析方法验证课件32七、范围

是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限度或量的区间。

原料药和制剂含量测定：范围应为测试浓度的80%-～120%。

制剂含量均匀度检查：范围应为测试浓度的70%-～130%。

溶出度或释放度中的溶出量测定：范围应为限度的±20%。七、范围原料药和制剂含量测定：范围应为测试33

八、耐用性

是指在测定条件下有效的变动时，测定结果不受影响的承受

程度。典型的变动因素有：被溶液的稳定性、样品提取次数、时间等。HPLC法变动因素有：流动相组成与pH，色谱柱，柱温，流速等。

GC法变动因素有：色谱柱，固定相，担体、柱温、进样口和检测器温度等。八、耐用性34

分析方法效能指标的具体应用：1.用于鉴别试验的方法：只要求专属性、耐用性，其余不要求。2.用于原料药中杂质测定和制剂中降解产物测定的方法：①用于定量：除了检测限不要求外，其余七项指标均要求。②限度检查：除检测限、专属性、耐用性要求外，其余不要求。3.原料、制剂及溶出度测定：不要求检测和定量限，其余均要求。返回分析方法效能指标的具体应用：返回35

第四节

生物样品分析方法的基本要求

一、常用样品的种类、采集和贮张二、生物样品分析前处理技术三、定量分析方法验证

返回第四节生物样品分析方法的基本要求返回36练习与思考[A型题]

1．药品的鉴别是证明A．未知药物的真伪B．已知药物的真伪C．已知药物的疗效D．药物的纯度E．药物的稳定性2．相对标准差表示的应是A．准确度B．回收率C．精密度D．纯净度E．限度练习与思考[A型题]1．药品的鉴别是证明2．相对373．用移液管量取的25ml溶液，应记成A．25mlB．25.0mlC．25.00mlD．25.000mlE．25±1ml4．以下三个数字0.5362、0.0014、0.25之和应为A．0.79B．0.788C．0.787D．0.7876E．0.83．用移液管量取的25ml溶液，应记成385．表示两变量指标A与C之间线性相关程度常用A．相关规律B．比例常数C．相关常数D．相关系数E．精密度6．减小偶然误差的方法是A．做空白试验B．做对照实验C．做回收试验D．增加平行测定次数E．选用多种测定方法5．表示两变量指标A与C之间线性相关程度常用39[B型题]

1～4A．1.23B．1.22C．2.54D．2.53E．2.511．1.22522．2.53513．2.53484．2.5068ACDE[B型题]1～4ACDE40

5～8A．空白试验B．对照试验C．回收试验D．鉴别试验E．检测试验5．以同量的溶剂替代供试品同法进行测定试验6．在供试液中加入已知量的标准物或已知量的被测物后，同法进行测定试验7．用已知量的纯物质作为试样，同法进行测定试验8．取少许水杨酸，加水溶解，加三氯化铁试液，显紫堇色ACDB5～8ACDB41[X型题]1．药物分析方法的效能指标有

A．检测限B．耐用性C．准确度D．专属性E．代表性2．对药物中杂质进行检查时，要求所用的检查方法应具有

A．耐用性B．专属性C．检测限D．准确度E．线性与范围[X型题]1．药物分析方法的效能指标有423．用碘量法测定维生素C原料药时，要求碘量法应具备

A．专属性B．定量限C．精密度

D．粗放度E．线性

4．系统误差来源于

A．分析方法B．所用试剂

C．操作者D．所用仪器

E．工作环境

3．用碘量法测定维生素C原料药时，要求碘量法应具备

A．435．消除系统误差的方法为

A．校正所用的仪器B．作对照实验C．做空白试验D．做预试验E．做回收试验6．以下所列仪器哪些使用前需进行校正

A．滴定管B．量瓶C．量杯D．移液管E．碘量瓶5．消除系统误差的方法为447．中国药典（2000年版）在正文部分的检查项下应包括

A．药物的真伪B．有效性C．均一性D．纯度要求E．安全性8．进行药品检验时，要从大量样品中取出少量样品应考虑取样的

A．多样性B．真实性C．代表性D．科学性E．可靠性7．中国药典（2000年版）在正文部分的检查项下应包括45谢谢大家聆听！药物定量分析与分析方法验证课件46药物定量分析与分析方法验证课件47基本要求

一、掌握定量分析方法验证的效能指标。二、熟悉定量分析样品的前处理方法。三、了解定量分析样品的前处理方法的进展及在药物分中的应用。返回基本要求一、掌握定量分析方法验证的效能指标。返48

第一节

定量分析样品的前处理方法

一、概述

1.为什么要对定量分析的样品进行前处理？

含卤素有机药物R-X（F，Cl,Br,I）

金属有机药物R-O-Me（有机酸或酚的含金属有机药物金属盐；结合不牢固）

有机金属药物R-Me

（结合牢固）

2.常用的处理方法不经有机破坏的分析方法药物分析中常用的分析方法经有机破坏的分析方法第一节定量分析样品的前处理方法49二、不经有机破坏的分析方法（一）直接测定法例如：富马酸亚铁

溶于热稀矿酸，采用铈量法，邻二氮菲作指示剂

二、不经有机破坏的分析方法50（二）经水解后测定法

1.直接回流后测定法例如：三氯叔丁醇的含量测定

CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH(CH3)2CO+3NaCl+HCOONa+2H2ONaCl+AgNO3AgCl+NaNO3AgNO3+NH4SCNAgSCN+NH4NO3

2.用硫酸水解后测定法例如：硬脂酸镁的含量测定

Mg(C17H35COO)2+H2SO4

MgSO4+2C17H35COOH

H2SO4+2NaOHNa2SO4

+2H2O

△（二）经水解后测定法△51（三）经氧化还原后测定法

1.碱性还原后测定例如：泛影酸的含量测定

2.酸性还原后测定例如：碘番酸的含量测定Zn还原后银量法

（三）经氧化还原后测定法523.利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量

（1）含锑药物例如：葡萄糖酸锑的含量测定

Sb5++2KISb3++2K+

++I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6

（2）含铁药物2Fe3++2KI2Fe2++2K++I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6H+3.利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量53

三、经有机破坏的分析方法

湿法破坏

药物分析中常用的有机破坏的方法有干法破坏

HNO3-HClO4法氧瓶燃烧法(一)湿法破坏HNO3-H2SO4法

H2SO4-硫酸盐法

HNO3-H2SO4-HClO4法；H2SO4-H2O2；H2SO4-KMnO4(二)干法破坏加Na2CO3或MgO以助灰化；温度控制在420℃

三、经有机破坏的分析方法54(三)氧燃瓶燃烧法(oxygenflaskcombustionmethod)1.仪器装置500ml,1000ml,2000ml,磨口、硬质玻璃锥形瓶2.称样固体样；液体样要求详见P683.燃烧分解操作法4.吸收液的选择用于X、S、Se等的鉴别、检查、含量测定时多数是H2O或H2O-NaOH；少数为H2O-NaOH-H2O2.(三)氧燃瓶燃烧法(oxygenflaskcombu55应用示例：碘苯酯的测定返回应用示例：碘苯酯的测定返回56第二节定量分析方法特点

一、容量分析法（一）容量分析法的特点

操作简单、快速；比较准确（RSD＜0.2%）；仪器普通易得。第二节定量分析方法特点一、容量分析法57（二）容量分析法的计算问题

1.滴定度（T）的概念每1mlmol溶液相当于被测物质的量(mg)2.滴定度的计算aA+bBcC+dD

T=M×b/a×B

3.百分含量的计算（1）直接滴定法D%=V×F×T/W×100%

F=实际标定的浓度/规定的浓度

（2）间接滴定法（回滴定法；剩余滴定法）

D%=（VO–VB)×F×T/W×100%（二）容量分析法的计算问题58

二、光谱分析法

（一）紫外-可见分光光度法（200nm～760nm)灵敏度高，可达10-4g/ml～10-7g/ml1.特点准确度高，SRD（%）为2%～5%仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用范围广。2.朗伯-比耳定律A=ECLE1%1cm=ε×10/M二、光谱分析法59

3.仪器校正和检定

波长校正用汞灯中较强谱线237.38,253.65,275.28,296.73,313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm与576.96nm

或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm进行校正。吸收度的检定：用K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4液至1000ml

波长(nm)235(最小)257(最大)313(最小)350(最大)

E1%1cm124.5144.048.62106.6

杂散光检查：试剂浓度(g/ml)测定波长透光率(%)

NaI1.00220nm＜0.8NaNO25.00340nm＜0.83.仪器校正和检定604.对溶剂的要求:220～240nm241～250nm251～300nm300nm以上溶剂+吸收池A＜0.41＜0.20＜0.10＜0.05

5.测定方法要求供试品溶液的A应在0.3～0.7对照品比较法：Cx=(Ax/Ar)Cr;含量%=Cx×D/W×100%

常用方法吸收系数法：含量%=(E1%1cm

)x/(E1%1cm

)r×100%

计算分光光度法：VA的三点校正法4.对溶剂的要求:61（二）荧光分光光度法

灵敏度高，可达10-10g/ml～10-12g/ml

在低浓度进行测定，防止F与C不成正比及自熄灭作用1.特点用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减灵敏度高，但干扰因素多。

制备荧光衍生物，可提高其灵敏度和选择性。用样品量少，操作简单，方法快速，应用范围较广。

（二）荧光分光光度法622.荧光分析仪有二个单色光器—激发单色光器与发射单色光器；且激发光源、样品池和检测器成直角。3.含量测定常用的方法对照品比较法:Ci=(Ri-Rib)/(Rr-Rrb)×Cr

Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。2.荧光分析仪有二个单色光器—激发单色光器与发射63

三、色谱分析法

按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱方法分类按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；HPLC。（一）HPLC法1.对HPLC仪器一般要求色谱柱、流动相按品种项下要求。色谱柱的理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)22.系统性试验分离度：R=2（tR1–tR2)/(W1+W2);要大于1.5拖尾因子：T=W0.05h/2d1

应在0.9～1.05

64内标法加校正因子测定供试品中主成分含量3.测定方法

标准曲线法

外标法测定供试品中主成分含量外标一点法应用示例：RP-HPLC法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用标准曲线法如头孢拉丁；头孢羟氨苄；头孢唑啉钠用外标一点法内65

（二）GC法1.对GC仪器一般要求载气为氮气；色谱柱为填充或毛细管柱色谱柱的理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)22.系统性试验分离度：R=2（tR1–tR2)/(W1+W2);要大于1.5拖尾因子：T=W0.05h/2d1

应在0.9～1.05

66内标法加校正因子测定供试品中主成分含量

3.测定方法

标准曲线法

外标法测定供试品中主成分含量外标一点法应用示例：Ch.P(2000)收载的月桂卓酮、维生素E及其片剂、注射剂、甲酚皂溶液等均采用GC法中的内标法加校正因子测定含量。返回

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第三节药品质量标准分析方法验证一、准确度

是指用该方法测定结果与真实值接近的程度，用回收率表示（一）含量测定方法的准确度1.原料药可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确度的另一方法测定的结果进行比较。2.制剂要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。

具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3,共9个数据来评价回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC发时，一般回收率可达98%～102%；容量法可达99.7%～100.3%

第三节药品质量标准分析方法验证68（二）数据要求

回收率%=（测定平均值—空白值）/加入量×100%要求制备高、中、低三浓度的样品，各测定3次。应报告已知加入量的回收率，或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。（二）数据要求69二、精密度

是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果之间的接近程度。

（一）精密度表示方法1.偏差(deviation,d)d=测得值-平均值=Xi-X

2.标准偏差（standarddeviation,SD或S）

S=[(∑Xi–X)2/(n-1)]1/23.相对标准差(relativestandarddeviation,RSD)也称变异系数(coefficientofvariation,CV)RSD=标准偏差/平均值×100%=S/X×100%药物定量分析与分析方法验证课件70（二）重复性、中间精密度及重现性1.重复性在相同条件下,由一个分析人员测定所得结果的精密度.2.中间精密度在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。3.重现性在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。（二）重复性、中间精密度及重现性1.重复性在71（三）数据要求

应报告S或SD、RSD和可信限。用统计学的可信性分析(t或f）。（三）数据要求72

三、专属性是指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性。

（一）鉴别反应应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分的样品均应呈现负反应。三、专属性73（二）含量测定和杂质测定色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说明专属性。

图中应注明各组分的位置，色谱法中分离度应符合要求。在能获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对结果的干扰。在杂质和降解物不能获得的情况下，可用以验证方法和药典方法进行对照；也可用对试样加速破坏的方法，比较两种方法。（二）含量测定和杂质测定74四、检测限（limitofdetection,

LOD)是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量，是限度检验指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。（一）常用的方法

1.非仪器分析目视法用已知浓度被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。2.仪器分析方法

UV法：LOD=f.3S空=C样/A样×

3S空

Flu法：LOD=f.3S空=C样/(F样-F空)×

3S空

GC和HPLC法：

LOD=S/N=2或3

四、检测限（limitofdetection,L75（二）数据要求应附测试图，说明测试过程和检测限结果。（二）数据要求76

五、定量限（limitofquantitation,

LOQ)

是指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求

LOQ.常用信噪比法确定定量限，一般以S/N=10时相应的浓度进行测定。五、定量限（limitofquantitatio77

六、线性

是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。

UV法：首先制备一个标准系列，浓度点n=5;A=0.3～.0.7

建立回归方程C=aA+b;r＞0.9999。HPLC法：制备一个标准系列，浓度点n=5～7;以C对h或A或与内标物的峰面积之比，建立回归方程r＞0.9999。药物定量分析与分析方法验证课件78七、范围

是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限度或量的区间。

原料药和制剂含量测定：范围应为测试浓度的80%-～120%。

制剂