血库操作规程课件

血库操作规程朱士伟2015-3-26目录ABO血型鉴定（玻片法、试管法）标准操作规程 5RhD血型鉴定（玻片法、试管法）标准操作规程 9ABO血型正反定型及RhD血型（微柱凝胶卡式法）标准操作规程 11交叉配血试验（盐水法）标准操作规程 15凝聚胺交叉配血试验标准操作规程 17交叉配血试验（微柱凝胶卡式法）标准操作规程 19新生儿溶血病（HDN）血型血清学检查标准操作规程 22不规则抗体筛选标准操作规程 26孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程 29医用低速离心机（X5型）标准操作规程 31低速离心机（160C型）标准操作规程 33HHW型电热恒温水浴箱标准操作规程 35HYC-360型医用冷藏箱标准操作规程 36200型血液冷藏箱标准操作规程 38低温保存箱标准操作规程 40FYQ型免疫微柱孵育器标准操作规程 42TD-3A血型血清学用离心机标准操作规程 43WGH-I数码恒温解冻箱标准操作规程 44HXC-608型医用血液冷藏箱标准操作规程 45PH-A恒温摆动保存箱标准操作规程 47LX-18X血小板运输箱标准操作规程 48GZR-II型高频热合器标准操作规程 50XS生物显微镜标准操作规程 51室内质控标准操作规程 52血库室间质评标准操作规程 60血库配制自备试剂的标准操作规程 63血标本接收及处理标准操作程序 65血液入库操作规程 66血液储存操作规程 67血液出库操作规程 69病毒灭活冰冻血浆、冷沉淀凝血因子复溶操作规程 70血液报废操作规程 71实验室医疗废弃物处理操作规程 72

5、样本采集及处理用一次性EDTA-K2真空采血管抽取静脉血1ml，将标示有患者姓名、性别、年龄、住院号、病室/门急诊、床号等信息的标签贴在标本管上，由医护人员或专门人员将患者标本送交血库。6、操作步骤6.1玻片法（正定型）6.1.1分型血清l滴于鉴定卡内，再各加受检者5％红细胞悬液1滴，混和。6.1.2将鉴定卡不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应。6.2试管法（正定型）6.2.1取洁净小试管2支，分别标明抗A，抗B，用滴管分别加抗A、抗B分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混合。6.2.2反定型：另取洁净小试管3支，分别标明A，B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A，B和O型5%试剂红细胞悬液1滴，混合。立即以1000r/min离心1min。6.2.3将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。7、结果判断：凝集为阳性（+），不凝集为阴性（-）8、干扰：8.1分型血清质量性能符合要求，用毕后应放冰箱保存，以免细菌污染。8.2试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤1次，以除去存在于红细胞中的抗体及可溶性抗原。8.3试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。8.4操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。8.5按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温（20～24℃）内进行试验，37℃可使反应减弱。8.6离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防止假阳性或假阴性结果。8.7观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。8.8判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。9、凝强度判断:观察结果应仔细，首先注意有无凝集，再按下述情况说明凝集强度：9.14＋：红细胞凝聚成一大块，血清透明清晰。9.23＋：红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。9.32＋：红细胞凝集分散成多个小块，可见游离红细胞。9.41＋：肉眼可见大颗粒，周围有较多红细胞。9.5±：镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多红细胞。9.6混合凝集视场（MF,mixedfield）：镜下可见数个红细胞凝集，大多数红细胞分散分布为MF。阴性（－）：镜下未见凝集，红细胞均匀分布。ABO血型正反定型及RhD血型（微柱凝胶卡式法）标准操作规程4.2原理：本试验采用排阻层析原理，即在微柱凝胶介质中，红细胞抗原与相应抗体结合，形成红细胞免疫复合物，在一定离心条件下，该复合物不能通过凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中；如无相应抗体结合，则不能形成红细胞免疫复合物，在一定离心条件下，分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。ABO血型基础血型 抗原 与抗血清反应 与A1，B细胞反应 抗-A 抗-B 抗-A,B A1 BA A ++++ 0 ++++ 0 +/++++B B 0 ++++ ++++ +/++++ 0AB AB ++++ ++++ ++++ 0 0O H 0 0 0 +/++++ +/++++8、操作程序：8.1工作准备：8.1.1将0.8%A、B型试剂红细胞悬液室温平衡。准备样本，标记卡。8.1.20.8%样本红细胞制备：将8μl压积红细胞加到1ml生理盐水中充分混匀。8.1.3将50μlA1、B标准反定细胞加入血型卡的第5-6管中，将待检者血浆或血清50μl加到血型卡的第5-6管中。将0.8%样本红细胞分别加入到血型卡的第1-4管中，各50μl。8.1.4将血型卡放入血型血清学专用离心机离心5分钟后，判断结果，并作好记录。医疗机构临床用血管理办法4+ 3+ 2+ 1+ +/- - 溶血双群12.8质控（ctl）为阳性时，请先用生理盐水洗细胞，再做血型。12.9严格按标准程序操作可检出弱抗原，血型亚型。12.10某些药物，疾病可导致弱阳性及正反定型不符。12.11细菌及异常血清蛋白可影响结果。12.12禁用严重溶血标本，它会强烈干扰结果的判读。严禁使用非抗凝血标本配制红细胞悬液，以免出现假阳性结果。12.13被酶处理过的红细胞会产生非特异性凝集，禁用被污染的标本和材料。12.14卡配套的专用离心机，以确保结果的准确。交叉配血试验（盐水法）标准操作规程4.2原理：天然类血型抗体与对应红细胞抗原相遇，在室温下的盐水介质中出现凝集反应。通过离心，观察受血者血清与供血者红细胞以及受血者红细胞与供血者清之间有无凝集现象，判断供血、受血者之间有无ABO血型不合的情况。5、样本采集及处理血样本为血浆（EDTA-K2抗凝）。抽取受血者静脉血3~4ml，3000转/分离心2分钟，分离出血浆，并将红细胞配成2%盐水悬液。将供血者血样以同样方法分离血清（血浆），并配制2%红细胞悬液。配血所用受血者血样必需是输血前3天内的。6、操作步骤：6.1取洁净小试管2支，1支标明受血者血清（PS）+供血者细胞（DC）；另1支标明供血清（DS）+受血者细胞（PC）。6.2按标记主侧管放受血者血清1滴，加供血者红细胞悬液1滴。次侧管放供血者血清1滴，加受血者红细胞悬液1滴，混匀，以1000r/min离心1min，轻轻侧动试管，观察结果。6.3观察结果：先观察试管上层液有无溶血，再斜持试管轻轻侧动或轻轻弹动，观察管底反应物有无凝集（必要时用显微镜观察）。冬季室温较低，应将试管保温，以防冷凝集素引起的凝集反应。7、结果判断：ABO同型配血，主侧和次侧均无溶血、无凝集表示无输血禁忌，可以输血。异型配血时，主测无凝集，次测凝集，无溶血，可以输给少量。输异型血时，如次测不凝集，不可以输血，应重新复查血型或追查其原因。凝聚胺交叉配血试验标准操作规程4.2原理：针对不规则抗体的检出及鉴定多采用红细胞的凝聚反应试验，而凝聚反应试验的成效则与分布红细胞表面之电荷以及抗体的亲和性息息相关。凝聚胺法是利用低离子介质（LIM）来降低介质的离子强度，进而减少红细胞之间距，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体发生特异性结合；接着加入凝聚胺（polybrene）此种多价阳离子聚合物来中和红细胞上的阴性电荷，使细胞间发生非特异性凝聚；最后加入重悬液，使之中和由凝聚胺所引起之非特异凝聚，倘若没有凝聚发生，则判定为阴性；若有凝集，则得知存在特殊性之抗原抗体反应，则判定为阳性。6、试剂：台湾贝索的试剂盒：1)低离子溶液（LIM）2)聚凝胺溶液（POLYBRENE）3)悬浮液（RESUSPENDING）7、操作步骤7.1取试管两支,分别标明主次侧管,主侧管加入受血者血清两滴,再加入2~5%献血者红细胞悬液1滴,次侧管反之。7.2每支试管中加入0.7mlLIM液,混匀;再各加入2滴POLYBRENE液,混匀。7.33400转离心10秒，弃上清液，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。7.4轻摇试管，目测红细胞有无凝集，若无凝集则必须重作。7.5加2滴resuspeneing液，轻摇试管混合并同时观察结果。10、注意事项10.1可以用含EDTA之血浆代替血清使用。10.2若病人血清含肝素多，如洗肾患者，则应加入双倍量的Polybrene液和肝素。10.3试剂使用前，应恢复室温再做。10.4在冬天气温极低的情况下，操作交叉配血试验，由于某些病人血清可能含有冷凝集素等因素而导致假阳性结果出现。若有怀疑，建议在最后滴加RESUSPENDING液时将试管立即置于370C水浴中,轻轻转动试管混合,并在30秒内观察结果。0.8%-1%样本红细胞制备：加20μl样本压积红细胞悬浮于2ml0.9%的生理盐水中。红细胞悬液的配制悬液浓度（%） 压积红细胞（滴） 盐水（滴）2

12ml（40）510.8ml（16）1010.4ml（8）201