荧光分析测定维生素c课件

荧光分析法测定维生素C维生素C及维生素C的测定原理荧光分析法测定维生素C实验荧光分析法测定维生素C应用讲解人：贺政轩一、维生素C及维生素的测定原理1.1维生素C

维生素C又名抗坏血酸,是维持机体正常生理功能的重要维生素之一,而人体不能自身合成，只能从食物和药物中摄取，因此，食品、药物中维生素C的分析具有重要意义。1.2维生素C测定方法

维生素C的测定常用的方法有光度法

、电化学法、滴定法、酶法、色谱法等。

本实验提出了一种新的测定维生素C的荧光分析方法：维生素C被Cu2

+氧化为脱氢

抗坏血酸，再与苯甲酸及十六烷基三甲基溴化铵产生荧光协同增敏作用，通过对体系荧光强度的测定进行维生素C的定量分析。二、荧光分析法测定维生素C实验

1实验1.1主要仪器与试剂

分子发光仪:LS-55型

酸度计:pH-211型

榨汁机:CW-JE04型

电热恒温水浴锅:HH.SY11-Ni1型

CuSO4溶液:2.0×10-3gm/L

十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)溶液:6.0×10-4g/mL苯甲酸溶液：1.0×10-4gm/L

维生素C标准储备液:5.0×10-4g/mL,2～8℃（避光保存）；

维生素C标准溶液:1.0×10-5g/mL,2～8℃（避光保存）；

NaOH-邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液:pH=6.0；

2结果与讨论

2.1激发光谱和发射光谱

取3.0mL维生素C标准溶液,按实验方法进行操作,分别在290～330nm、360～460nm内扫描得到激发光谱和发射光谱如图1、图2所示。从图1、图2中可看出,当激发波长为308nm,发射波长为408nm时体系的荧光强度最大,试剂空白的荧光值比较低且稳定,故本实验选择激发波长为308nm,发射波长为408nm。

1—Cu2

++BA+缓冲溶液+CTMAB;2—Cu2

++BA+维生素C+缓冲溶液+CTMAB1—Cu2

++BA+缓冲溶液+CTMAB;2—Cu2

++BA+维生素C+缓冲溶液+CTMAB激发光谱发射光谱2.2试剂加入顺序

按照实验方法操作,在各试剂加入量相同的情况下,试验了试剂的不同加入顺序对荧光强度的影响。试验结果表明,当所加试剂顺序依次为CuSO4溶液、苯甲酸溶液、维生素C标准溶液、NaOH-邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液时,体系的荧光强度最大，因此选用此加入顺序为最佳试剂加入顺序。2.3

缓冲溶液

溶液的pH值对体系荧光强度有较大的影响，试验了不同的pH值对荧光强度的影响。由pH值—荧光强度的曲线可知,

当pH

值为5.9

～

6.2

时,荧光强度达到最大值且比较稳定,因此确定最佳pH值为

6.0。缓冲溶液的种类对体系的荧光强度也有一定的影响。试验了以下几种pH

值为6.0

的缓冲溶液:NaOH-KH2PO4、KH2PO4-硼砂、KH2PO4-Na2HPO4、NaOH-邻苯二甲酸氢钾、Na2HPO4-柠檬

酸、NaOH-柠檬酸钠、HAc-NaAc等。试验结果表明,当所加的缓冲溶液为NaOH-邻苯二甲酸氢钾时,荧光强度最大且稳定。因此本实验选择NaOH-

邻苯二甲酸氢钾为缓冲溶液,其最佳用量为5.0mL。2.4

加热温度和加热时间

试验了不同温度对体系荧光强度的影响。结果表明,

当加热温度为35℃时，既有利于提高体系反应速度，又不使反应物与产物结构受到破坏。改变加热时间进行试验,结果发现，在35℃水浴中加热30min，体系荧光强度达到最大值且相对稳定。

2.5

硫酸铜和苯甲酸的用量其它条件不变，试验了硫酸铜和苯甲酸的用量对体系荧光强度的影响。结果表明，当硫酸铜的用量为0.6mL、苯甲酸的用量为2.0mL

时，体系荧光强度最大。2.6

表面活性剂

分别试验了十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)、十二烷基磺酸钠及β

-环糊精对体系荧光强度的影响。结果表明,表面活性剂对体系的荧光强度有一定的增敏效果，其中CTMAB

对体系的增敏效果最好。进一步试验了CTMAB

的用量对体系的荧光强度的影响,

当CTMAB

的用量为2.0mL

时,

体系荧光强度最大。

样品测定结果列于表3表3

样品测定结果(n

=3)。由表3可知，用荧光分析法测定维生素C药片、西红柿和果珍中维生素C的含量，回收率为96.

7%～

100.5%准确度较高。表3样品测定结果(n=3)

荧光分析法测定维生素C具有操作简单,精密度高,检出限低等优点,该法可以应用于水果、蔬菜和药物中维生素C的检测,适于推广。利用某些物质受光照射时所发生的荧光特性和强度，进行物质的定性分析或定量分析的方法，称为荧光光谱分析。使激发光的波长和强度保持不变，而让荧光物质所发生的荧光通过发射单色器照射于检测器上，调节发射单色器至各种不同波长处,由检测器测出相应的荧光强度，然后以荧光波长为横坐标，荧光