免疫血清课件

抗原是指能刺激机体免疫系统产生免疫应答而生成抗体和致敏淋巴细胞等免疫应答产物，并能与之发生特异性结合的物质。

抗体是在抗原物质的刺激下，由浆细胞产生的,能与相应抗原特异性结合，并具有多种生物学功能的球蛋白。通常，人们又将抗体称为免疫球蛋白

[血清学检验基础知识

]抗原的基本性质。（1）异源物质：在正常情况下，只有异体物质进入体内才可能具有免疫原性。一般说，这种异体物质必须是动物机体产生抗体的细胞所未接触过的异物；不同种属的异体抗原称之为异种抗原。同种间不同个体的某些成分，也有一定的抗原性，此类同种动物不同个体的抗原称之为异体抗原。在特殊情况下，自身组织也会产生免疫原性而导致自身免疫病，此类抗原称之为自身抗原。抗原的基本性质2）分子物质：抗原的免疫原性与分子量的大小密切相关，通常情况下，具有免疫原性的物质，分子量须在10000以上。因大分子的胶体物质在体内留存时间越长，越有利于持续刺激机体产生特异性免疫。分子量小于5000的物质，免疫原性往往很弱；分子量在1000以下的小分子物质为半抗原，通常没有免疫原性，但与载体结合后可以获得免疫原性。1、初次反应：抗原初次进入机体后，需要经过一定的潜伏期，才产生抗体，其长短与抗原的性质有关，如菌苗等颗粒性经过5~7天血液中出现抗体，类毒素等血液性抗原，则在2~3周才有抗体出现。初次反应产生的抗体少，持续的时间也短。2、再次反应：机体当再次接受相同抗原注射后，经过阴性期后，抗体大量增加。比初次高达100-1000倍。血清学反应

抗原和相应抗体之间在一定条件下可发生免疫学反应。在体外，抗体主要存在于血清中，因此抗原和抗体之间发生特异性结合的反应又称为血清学反应

[血清学检验基础知识

]血清学反应的一般特点

1、抗原抗体的结合具有特异性

在血清学反应中，只有抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）才能结合。

2、抗原抗体是分子表面的结合

并且是可逆的。

抗原抗体发生结合后，复合物相当稳定，但是有可逆性。经分离后重新得到的抗原或抗体的性质仍不改变。

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]血清学反应的一般特点

3、抗原抗体按一定的分子比例结合

只有在分子比例合适时才会出现可见反应。若两者比例不合适，即抗体过剩或抗原过剩，都不能形成大块复合物，因而不能出现可见反应。在结合中，一般认为抗原是多价的，抗体是二价的。4、高敏感性

[血清学检验基础知识

][目的与内容]目的：学习和掌握免疫血清的制备方法，为凝集反应和沉淀反应准备凝集素和沉淀素。内容：抗大肠杆菌血清(凝集素)的制备。[操作步骤

]1、抗原的制备(1)取37℃恒温培养24h的LB大肠杆菌斜面。(2)每支斜面菌种中加入5mL0.3%甲醛液，小心地把菌苔洗下制成菌液。(3)用无菌清洁吸管，吸取以上菌液，注入装有玻璃珠的无菌瓶内，振荡10~25min，分散菌块制成菌悬液。(4)将含菌悬液的血清瓶置于60℃的水浴箱中水浴1h，并不时摇动，把菌杀死。(5)将菌悬液重新接种至牛肉膏蛋白胨斜面培养基中，37℃培养24～48h，如有菌生长，则要在60℃水温中再处理。若无菌生长则进行OD值测定其含菌量。耳缘静脉注射。将家兔放在家兔固定箱内，一手轻轻拿起耳朵，用碘酒棉花球在耳外侧边缘静脉处消毒，然后用酒精棉球涂擦，并用手指轻轻弹几下静脉血管，使其扩张。消毒细菌悬液瓶塞后，用无菌注射器及5号针头吸取菌液，沿着静脉平行方向刺入静脉血管，并慢慢注入菌液，注射完毕，用干棉球按压住注射处，然后拨出针头，并压迫血管注射处片刻，以防止血液向外溢出。[操作步骤]4、试血：通常于最后一次注射后7~11d，从兔耳缘静脉抽取2mL血，分离析出血清，用试管凝集反应测定抗血清效价。效价合格即可大量采血，如效价不高，可继续注射抗原免疫，提高效价。[操作步骤]5、采血：采血分为心脏采血和颈动脉放血。心脏采血：使免疫家兔仰卧于台上，四肢固定。用左手探明心脏博动最明显处，用碘酒棉球与酒精棉球消毒后，右手握消毒过的20mL注射器和B19号针头，在上述部位的肋骨间隙与胸部呈45°角刺入心脏，微微抽取针筒，此时可发现血液涌入注射器中便可徐徐抽取血液。2.5kg家兔一次可取血20~30mL。取血完毕后，用消毒棉球按压进针处迅速拨出针头，进针处用棉球继续压住。并马上将所采的血液注入无菌大试管内，斜放，待血液凝固后，置于37℃恒温箱中30min，使血清充分析出，然后放入4~6C冰箱中。[操作步骤]颈动脉采血：将免疫家兔固定于兔台上，用少量乙醚麻醉，剪去颈部的毛，然后用碘酒棉球和酒精棉球消毒。沿正中线将颈部皮肤切开到锁骨间，拨开肌膜，暴露出气管，在气管深侧处找到搏动的颈动脉。小心地将颈动脉和迷走神经剥离分开4~5cm。用镊子拉出颈动脉，用丝线扎紧血管的离心端，在血管的向心端用止血钳夹住。然后用眼科剪在丝线与止血钳之间的血管上剪一个V型小切口，将弯咀眼科镊自切口插入，使其张开，同时将一小玻管插入，用丝线扎紧，以防玻管脱漏。玻管另一端接入一条胶管，胶管通入大试管(或大离心管)内，然后将止血钳慢慢松开，使血液流入试管，直至动物死亡，无血液流出为止。。[操作步骤](4)抗血清分离与保存：取凝固血液于4000r/min，离心20min，获得抗血清(即凝集素)。加入石炭酸或硫柳汞使其浓度分别达到0.5%或0.01