老年性痴呆的细胞模型课件

老年性痴呆的细胞模型汇报人：赵梦岚1.神经细胞.2.神经嵴源细胞.3.神经胶质细胞.4.非神经细胞.5.基因工程细胞

AD细胞模型是在体外进行诱导和建立，与AD动物模型相比较，具有可避免各种干扰因素，实验条件容易控制等优点。6.杂交组织细胞1.神经细胞(1)原代培养的海马神经细胞海马与学习记忆有关，也是发生衰老变化最早部位。AD病理改变最严重的脑区之一是海马。Aβ诱导的AD细胞模型表明细胞发生脂质过氧化较严重,自由基生成增加,细胞出现凋亡改变,与AD发病机制中自由机和细胞凋亡学说相符,再则选用此种细胞类型更贴近实际AD受损细胞。但也存在以下缺陷：①原代细胞培养难度大，周期长。②培养系统不够稳定。③只能模拟出AD的部分病理改变。(2)原代培养的大脑皮质神经细胞大脑皮质是人类高级中枢，是构成脑内复杂突触连接的关键脑区。早已明确，大脑额、顶、颞叶参与学习记忆活动。①Aβ诱导建立AD细胞模型,Aβ导致大脑皮质细胞凋亡②氰化钠诱导原代培养的大脑皮质神经细胞，建立AD细胞模型，观察内源性神经细胞缺氧引起的损伤培养的海马神经元对损伤因素较培养的大脑皮质神经细胞敏感,但皮质神经细胞比海马细胞容易分离和获取,二者出现的生物化学、组织病理学及形态学的改变基本相似。(3)原代培养的小脑颗粒细胞此模型表现为细胞凋亡和Aβ产生增加,较符合AD的病理改变,与前两种原代培养的细胞相比,细胞易获取和培养。小脑是参与学习记忆脑区之一，因此小脑神经细胞也是进行AD研究可取的细胞。降低细胞外钾离子的浓度,诱导建立AD模型,检测细胞Aβ水平,提示原代培养的小脑颗粒神经元发生退行性变可导致Aβ过量产生,而Aβ过量产生又可加重神经元的损伤。缺点为：细胞类型不是AD受损最显著细胞，培养系统缺乏稳定性。(4)NG108-15细胞系NG108-15细胞系是小鼠成神经细胞瘤和大鼠神经胶质瘤的融合杂交系。在两种不同的培养条件下此细胞系可分别处于分裂生长状态和分化成熟状态。NG10815细胞系经培养诱导其分化10d后，加入Aβ1-40，继续培养48h，建立AD细胞模型。用此细胞系建立AD模型，培养系统稳定性较好，又具有神经细胞特性，具有一定的代表性。形态学有无改变有待于进一步的研究。(2)PC12细胞株前面已提出原代培养神经细胞的缺点,为了克服这些缺点,许多学者早已在寻找一种具有神经细胞特性,又可传代的稳定的细胞株。1976年Greene和Tischler成功建立了具有神经特性的PC12细胞株。PC12是从移植的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤单克隆的细胞株。目前PC12细胞株是国际上基本公认在体外进行神经生物，神经化学及神经系统疾病研究理想的模型3.神经胶质细胞AD的重要病理改变之一是含有Aβ的老年斑的形成,神经胶质细胞在AD等神经退行性疾病中起着不容忽视的作用。活化的小胶质细胞和反应性星形胶质细胞与AD患者的老年斑有关,小胶质细胞对老年斑有高度亲和力，参与AD老年斑的形成。神经胶质细胞与AD发病机制有密切关系此种细胞模型培养系统稳定，细胞可以传代培养，大大缩短了实验周期。缺点是不能完全代表神经元的变化情况。5.杂交组织细胞(1)畸胎瘤AD杂交细胞NT2AD患者线粒体DNA突变导致细胞色素C氧化酶（COX）功能障碍，引起生物能量降低和活性氧产物增加，最终导致细胞凋亡。采用DNA结合诱变剂溴化乙锭，选择性的耗尽人畸胎瘤细胞株内源性线粒体DNA，然后与AD患者血小板内的线粒体DNA杂交获取畸胎瘤AD杂交细胞NT2，作为AD细胞模型。此杂交的细胞株可用于研究AD线粒体的电子转移链酶COX活性、静态或动态下钙平衡、自由基、Aβ产生、沉积等变化。NT2畸胎瘤AD杂交细胞株，在细胞和亚细胞水平概括了AD发病机制及病理组织学方面的特异性改变，为进一步研究AD的病理学及治疗学提供了一个较好的体外模型。(2)黑质神经细胞与成神经细胞瘤杂交细胞株MES23.5MES23.5杂交细胞株是由大鼠胚胎中脑细胞与鼠N18TG2成神经细胞瘤细胞融合而成，其表现性状与黑质细胞类似。采用Aβ1-40诱导MES23.5杂交细胞株建立AD细胞模型。此杂交细胞株为研究AD凋亡机制提供良好的模型。6.基因工作细胞株AD是一种只发生在人类的神经退行性疾病，因此限制了其生物学方面的研究。随着生物医学遗传工程技术的发展，体外建立基因工程细胞已成为现实，这一模型的缺点是技术难度大，花费高。（1）COS-1,CV-1,PC12,Hs683,SK-N-SH,A172细胞株:Charles等1989年用克隆的含有编码Aβ氨基酸序列cDNA通过SV40介导,成功的建立了5种可用于AD研究的基因工程细胞株.这5种转基因细胞表现出AD的细胞特性,特别是PC12、SK-N-SH、A172细胞株,具有神经元特性,更适用于进行有关AD研究（2）小鼠海马细胞株HT22:AD患者脑内神经元的死亡主要是凋亡,诱导细胞凋亡因素之一是氧自由基产生增加,发生氧化应激。海马细胞上分布有糖皮质激素受体(GR),因此海马是糖皮质激素主要作用的部位。在一定条件下糖皮质激素有加重海马对某些病理性损害的作用。Behl等用小鼠细胞株HT22通过电穿孔方法转染糖皮质激素反应性荧光酶和β-半乳糖甙酶基因入细胞,获得表达GR的HT22