最新基因工程的原理课件

基因工程的原理基因工程的原理1基因工程的概念基因工程的别名基因拼接技术或DNA重组技术操作环境操作对象操作水平基本过程结果

基因工程是指按照人们的愿望，将一种生物的基因在体外剪切，并与特殊的运载工具进行拼接，然后导入另一种生物体内进行扩增，并使之表达产生所需蛋白质的技术。定向的改造生物的遗传性状。DNA重组技术或基因拼接技术生物体外基因DNA分子水平剪切→拼接→导入→表达定向的改造了生物的性状_________________的培育成功，宣告了基因工程的诞生。双重抗性大肠杆菌基因工程的概念基因工程的别名基因拼接技术或DNA重组技术操作2最新基因工程的原理课件3最新基因工程的原理课件4最新基因工程的原理课件5最新基因工程的原理课件6最新基因工程的原理课件7最新基因工程的原理课件8AB限制酶作用是A处还是B处？A处T1234512345AAB限制酶作用是A处还是B处？A处T1234512349思考：某DNA分子被限制性内切酶Ⅰ切后形成1个DNA片段，有1000个碱基对，该DNA分子若被限制性内切酶Ⅱ切后形成2个DNA片段，分别有600个碱基对和400个碱基对，若该DNA分子同时被限制性内切酶Ⅰ和Ⅱ切割后形成2种DNA片段，分别有600个碱基对和200个碱基对。问：该DNA分子有何特点？限制性内切酶Ⅰ有几个酶切位点？限制性内切酶Ⅱ有几个酶切位点？该DNA为环状1个2个思考：某DNA分子被限制性内切酶Ⅰ切后形成110GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGCTTAAAATTCG双链断开不同来源的DNA片段结合GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGAATTC111、种类：E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶

磷酸二酯键

二、基因缝纫针：DNA连接酶2、作用部位：3、作用条件：两个DNA分子末端的碱基互补配对。4、功能：将两个DNA分子“缝合”起来，恢复被限制性内切酶切开了的磷酸二酯键。1、种类：E·coliDNA连接酶磷酸二酯键二、基因缝12可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·co13GCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCG二、基因缝纫针：DNA连接酶GCTTAAAATTCGGCTTAA14GCTTAAAATTCG二、基因缝纫针：DNA连接酶GCTTAAAATTCG二、基因缝纫针：D15连接酶的部位：磷酸二酯键，不是氢键GCTTAAAATTCG磷酸二酯键磷酸二酯键重组DNA二、基因缝纫针：DNA连接酶连接酶的部位：磷酸二酯键，不是氢键GCTTAAAA16DNA连接酶与DNA聚合酶比较DNA聚合酶DNA连接酶相同不同作用对象模板形成磷酸二酯键单个脱氧核苷酸DNA片断需要不需要DNA连接酶与DNA聚合酶比较DNA聚合酶DNA连接酶相同不17（1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；（2）具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；（3）具有某些标记基因，便于进筛选运载体是否进入受体细胞。（如荧光蛋白基因、抗四环素基因、抗氨苄青霉素基因）（4）对受体细胞无害质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等三、基因运输车：载体2、载体必须具备的条件：1、常用的载体有：（1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；质粒，λ噬菌体的衍生18常用的载体：质粒能复制并带着插入的目的基因一起复制有限制性内切酶切割位点有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别常用的载体：质粒能复制并带着插入的目的基因一起复制有限制性内19习题:已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉素的基因,现探讨某细菌的质粒中有无标记基因或标记基因是什么?请设计实验、预期实验结果，并得出相应的实验结论对照组：不添加抗生素实验组1：添加一定浓度的四环素实验组2：添加一定浓度的氨苄青霉素实验组3：添加一定浓度的四环素和氨苄青霉素对照组实验组1实验组2实验组3结论预期一++++预期二++——预期三+—+—预期四+———既含有抗四环素基因也含有抗氨苄青霉素基因只含有抗四环素基因只含有抗氨苄青霉素基因既不含有抗四环素基因也不含有抗氨苄青霉素基因+：存活—：死亡习题:已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉素的基因,现探讨201、关于限制酶的说法中，正确的是（）A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNAD．限制酶只存在于原核生物中课堂巩固2、DNA连接酶催化的反应是()A．DNA复制时母链与子链之间形成氢键B．黏性末端碱基之间形成氢键C．两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接D．A、B、C都不正确1、关于限制酶的说法中，正确的是（）课堂巩固2、DN213、作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件及理由是()A、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因B、具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达C．具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件D、能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选3、作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件及理由是(224、质粒是基因工程最常见的载体，它的主要特点是()①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④是蛋白质 ⑤是环状RNA ⑥是环状DNA ⑦能“友好”地“借居”A、①③⑤⑦B、②④⑥C．①③⑥⑦D．②③⑥⑦4、质粒是基因工程最常见的载体，它的主要特点是()235、在受体细胞中能检测出目的基因是因为()A、目的基因上有标记B、质粒具有某些标记基因C、重组质粒能够复制D．以上都不正确5、在受体细胞中能检测出目的基因是因为()24（1）识别_____的脱氧核苷酸序列；（2）并在___________把双链DNA分子“切割”开。切开的化学键为___________，形成___________。主要从_____生物中分离纯化

一、基因手术刀：__________1、来源：2、功能：

二、基因缝纫针：_________1、功能：恢复被限制性内切酶切开了的__________。2、DNA连接酶与DNA聚合酶比较有何异同？三、基因运输车：_______2、载体必须具备的条件？1、常用的载体有：________温故知新原核特定回文特异性位点磷酸二酯键限制性内切酶DNA连接酶载体磷酸二酯键质粒黏性末端（1）识别_____的脱氧核苷酸序列；（2）并在______25下图为DNA分子的切割和连接过程。(1)EcoRI是一种

酶，其识别序列是

，切割位点是

与

之间的

键。切割结果产生的DNA片段末端形式为

。(2)不同来源DNA片段结合，在这里需要的酶应是

，此酶的作用是在

与

之间形成

键，而起“缝合”作用的。限制性内切GAATTC鸟嘌呤脱氧核苷酸

腺嘌呤脱氧核苷酸

磷酸二酯黏性末端DNA连接酶鸟嘌呤脱氧核苷酸

腺嘌呤脱氧核苷酸

磷酸二酯下图为DNA分子的切割和连接过程。(1)EcoRI是一种 26一、目的基因的获得二、重组载体的构建三、重组载体的导入和筛选探究2：基因工程的一般程序是怎样的？四、目的基因的表达和鉴定一、目的基因的获得二、重组载体的构建三、重组载体的271、目的基因：基本操作步骤一、目的基因的获得在基因操作中使用的外源基因。它是编码蛋白质的结构基因，如胰岛素基因、干扰素基因。2、获得目的基因的方法：（1）直接分离法——（2）人工合成法a.鸟枪法b.反转录法c.化学合成法（3）其他方法：从基因文库获得、PCR扩增1、目的基因：基本操作步骤一、目的基因的获得在基因操作中28①分离程序：用限制性内切酶将完整的DNA分子切成适当长度的片段，然后通过检测的方法挑选出所需要的基因。用限制酶切断成许多片段a.鸟枪法(散弹射击法）核酸探针：是用放射性同位素或其它标记物标记的核酸单链，具有非常特意的核苷酸序列，能与DNA互补链结合，可用于特定的基因检测。②检测方法：应用核酸探针③扩增：用PCR仪扩增①分离程序：用限制性内切酶将完整的DNA分子切成适当长度的片29b.反转录法c.化学合成法双链DNA(即目的基因)合成单链DNA(cDNA)目的基因的mRNA逆转录酶mRNA的核苷酸序列蛋白质的氨基酸序列结构基因的核苷酸序列化学合成推测推测目的基因b.反转录法c.化学合成法双链DNA合成单链DNA(cDNA30质粒目的基因限制酶DNA连接酶重组DNA二、重组载体的构建质粒目的基因限制酶DNA连接酶重组DNA二、重组载体的构建31基因表达载体的构建——核心质粒DNA分子一个切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种限制酶目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。二、重组载体的构建基因表达载体的构建——核心质粒DNA分子一个切口两个切口DN32二、重组载体的构建基因表达载体的组成：b、目的基因a、启动子c、终止子d、标记基因e、复制原点二、重组载体的构建基因表达载体的组成：b、目的基因a、启动子331、1997年，科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中表达成功。请据右下图回答问题。(1)此图表示的是采取__________合成基因的方法获取__________基因的过程。(2)图中①DNA是以为_________模板，形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的目的基因。(3)图中③代表

，它往往含

基因，以便对目的基因的检测。人工目的

信使RNA

重组DNA分子

标记

1、1997年，科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠34受体细胞导入方法微生物细胞Ca处理法动物受精卵显微注射法植物体细胞农杆菌转化法、基因枪法植物受精卵花粉管通道法、基因枪法转化——目的基因导入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程受体细胞稳定表达三、重组载体的导入和筛选2+受体细胞导入方法微生物细胞Ca处理法动物受精卵显微注射法35

大肠杆菌细胞最常用的转化方法是:（1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。（2）使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。（3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。

大肠杆菌细胞最常用的转化方法是:36农杆菌介转化法（导入植物体细胞）花粉管通道法（导入植物受精卵）显微注射法（导入动物受精卵）农杆菌介转化法花粉管通道法显微注射法37筛选出获得目的基因的重组细胞四环素抗性基因氨苄青霉素抗性基因通过转化，有的细胞可能导入了重组载体，利用选择性培养基就可以把它们筛选出来。筛选出获得目的基因的重组细胞四环素氨苄青霉通过转化，有的细胞381、基因表达基因表达指基因组中某基因在细胞中转录为mRNA和翻译成蛋白质的过程。基因表达的改变预示着细胞在分子水平上的变化。它往往是细胞形态功能变化之前的变化。DNARNAProtein转录翻译四、目的基因的表达和鉴定基因工程成功的标志：目的基因表达，进而产生相应的性状1、基因表达基因表达指基因组中某基因在细胞中基因表达的改39——检查是否成功四、目的基因的表达和鉴定——检查是否成功四、目的基因的表达和鉴定40从苏云金芽苞杆菌中提取抗虫基因从土壤农杆菌中提取带有选择性标记的质粒同一种限制酶处理抗虫基因与质粒结合形成重组质粒将重组质粒导入土壤农杆菌(农杆菌转化法导入)筛选将土壤农杆菌与棉花细胞混合培养侵染重组质粒将抗虫基因导入棉花细胞并整合到棉花的DNA上植物组织培养获得抗虫棉抗虫棉的培育流程图从苏云金芽苞杆菌中提取抗虫基因从土壤农杆菌中提取带有选择性标41基因工程的基本原理概念图基因工程的基本原理概念图42下图为利用生物技术获得动物乳腺反应器和抗虫棉的过程，据图回答：⑴在基因工程中，A表示

，如果直接从苏云金杆菌中获得抗虫基因，①过程使用的酶区别于其他酶的特点是

，B表示

。

⑵在研究过程中，研究人员首先从相关基因组中获取了目的基因，并采用

技术对目的基因进行了扩增，然后将目的基因与质粒等载体组合形成了重组载体。在重组载体的构建过程中需要的工具酶

。

目的基因识别特定的核苷酸序列，并且在特定的位点上切割DNA分子重组DNA

PCR

限制性内切酶、DNA连接酶

下图为利用生物技术获得动物乳腺反应器和抗虫棉的过程，据图回答43

⑶基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个完整的基因表达载体至少包括哪些部分?

。

⑷将目的基因导入受体细胞的过程中，在③过程中一般是采用

方法，在②过程中一般采用

方法，受体细胞一般是

。

⑸由于转基因表达产物存在于山羊的乳汁中，检测其体内是否出现药用蛋白，在分子水平上的检测方法及结果是什么?

。

⑹要确定目的的基因（抗虫基因）导入棉花细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体水平上的鉴定过程：

。目的基因、启动子、终止子、标记基因等部分

农杆菌转化法显微注射技术受精卵

进行抗原—抗体杂交

如果出现杂交带，表明奶牛中出现了抗原蛋白；不出现杂交带，表明奶牛中未出现抗原蛋白让害虫吞食棉花叶，观察害虫是否具有抗虫性状⑶基因表达载体的构建是基因工程的核心，一个完整的基因表达载441.下表关于基因工程中有关基因操作的名词及对应的内容，正确的组合是 2、下列属于获取目的基因的方法的是()①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取③从受体细胞中提取④利用PCR技术⑤利用DNA转录 ⑥人工合成A.①②③⑤B.①②⑤⑥C.①②③④D.①②④⑥1.下表关于基因工程中有关基因操作2、下列属于获取目的基因的453.细菌的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是

A．提高受体细胞在自然环境中的耐药性B．有利于对目的基因是否导入进行检测C．增加质粒分子的分子量D．便于与外源基因连接4.有关基因工程的叙述正确的是A．限制酶只在获得目的基因时才用B．重组质粒的形成是在细胞内完成的C．质粒都可作为运载体D．蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料3.细菌的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工465.哪项不是基因表达载体的组成部分()A.启动子B.终止密码C.标记基因D.目的基因6.下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法()A．基因枪法B．显微注射法 C.农杆菌转化法D．花粉管通道法5.哪项不是基因表达载体的组成部分()47最新基因工程的原理课件48基因工程的原理基因工程的原理49基因工程的概念基因工程的别名基因拼接技术或DNA重组技术操作环境操作对象操作水平基本过程结果

基因工程是指按照人们的愿望，将一种生物的基因在体外剪切，并与特殊的运载工具进行拼接，然后导入另一种生物体内进行扩增，并使之表达产生所需蛋白质的技术。定向的改造生物的遗传性状。DNA重组技术或基因拼接技术生物体外基因DNA分子水平剪切→拼接→导入→表达定向的改造了生物的性状_________________的培育成功，宣告了基因工程的诞生。双重抗性大肠杆菌基因工程的概念基因工程的别名基因拼接技术或DNA重组技术操作50最新基因工程的原理课件51最新基因工程的原理课件52最新基因工程的原理课件53最新基因工程的原理课件54最新基因工程的原理课件55最新基因工程的原理课件56AB限制酶作用是A处还是B处？A处T1234512345AAB限制酶作用是A处还是B处？A处T12345123457思考：某DNA分子被限制性内切酶Ⅰ切后形成1个DNA片段，有1000个碱基对，该DNA分子若被限制性内切酶Ⅱ切后形成2个DNA片段，分别有600个碱基对和400个碱基对，若该DNA分子同时被限制性内切酶Ⅰ和Ⅱ切割后形成2种DNA片段，分别有600个碱基对和200个碱基对。问：该DNA分子有何特点？限制性内切酶Ⅰ有几个酶切位点？限制性内切酶Ⅱ有几个酶切位点？该DNA为环状1个2个思考：某DNA分子被限制性内切酶Ⅰ切后形成158GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGCTTAAAATTCG双链断开不同来源的DNA片段结合GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGGAATTC591、种类：E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶

磷酸二酯键

二、基因缝纫针：DNA连接酶2、作用部位：3、作用条件：两个DNA分子末端的碱基互补配对。4、功能：将两个DNA分子“缝合”起来，恢复被限制性内切酶切开了的磷酸二酯键。1、种类：E·coliDNA连接酶磷酸二酯键二、基因缝60可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·co61GCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCG二、基因缝纫针：DNA连接酶GCTTAAAATTCGGCTTAA62GCTTAAAATTCG二、基因缝纫针：DNA连接酶GCTTAAAATTCG二、基因缝纫针：D63连接酶的部位：磷酸二酯键，不是氢键GCTTAAAATTCG磷酸二酯键磷酸二酯键重组DNA二、基因缝纫针：DNA连接酶连接酶的部位：磷酸二酯键，不是氢键GCTTAAAA64DNA连接酶与DNA聚合酶比较DNA聚合酶DNA连接酶相同不同作用对象模板形成磷酸二酯键单个脱氧核苷酸DNA片断需要不需要DNA连接酶与DNA聚合酶比较DNA聚合酶DNA连接酶相同不65（1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；（2）具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；（3）具有某些标记基因，便于进筛选运载体是否进入受体细胞。（如荧光蛋白基因、抗四环素基因、抗氨苄青霉素基因）（4）对受体细胞无害质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等三、基因运输车：载体2、载体必须具备的条件：1、常用的载体有：（1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；质粒，λ噬菌体的衍生66常用的载体：质粒能复制并带着插入的目的基因一起复制有限制性内切酶切割位点有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别常用的载体：质粒能复制并带着插入的目的基因一起复制有限制性内67习题:已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉素的基因,现探讨某细菌的质粒中有无标记基因或标记基因是什么?请设计实验、预期实验结果，并得出相应的实验结论对照组：不添加抗生素实验组1：添加一定浓度的四环素实验组2：添加一定浓度的氨苄青霉素实验组3：添加一定浓度的四环素和氨苄青霉素对照组实验组1实验组2实验组3结论预期一++++预期二++——预期三+—+—预期四+———既含有抗四环素基因也含有抗氨苄青霉素基因只含有抗四环素基因只含有抗氨苄青霉素基因既不含有抗四环素基因也不含有抗氨苄青霉素基因+：存活—：死亡习题:已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉素的基因,现探讨681、关于限制酶的说法中，正确的是（）A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNAD．限制酶只存在于原核生物中课堂巩固2、DNA连接酶催化的反应是()A．DNA复制时母链与子链之间形成氢键B．黏性末端碱基之间形成氢键C．两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接D．A、B、C都不正确1、关于限制酶的说法中，正确的是（）课堂巩固2、DN693、作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件及理由是()A、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因B、具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达C．具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件D、能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选3、作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件及理由是(704、质粒是基因工程最常见的载体，它的主要特点是()①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④是蛋白质 ⑤是环状RNA ⑥是环状DNA ⑦能“友好”地“借居”A、①③⑤⑦B、②④⑥C．①③⑥⑦D．②③⑥⑦4、质粒是基因工程最常见的载体，它的主要特点是()715、在受体细胞中能检测出目的基因是因为()A、目的基因上有标记B、质粒具有某些标记基因C、重组质粒能够复制D．以上都不正确5、在受体细胞中能检测出目的基因是因为()72（1）识别_____的脱氧核苷酸序列；（2）并在___________把双链DNA分子“切割”开。切开的化学键为___________，形成___________。主要从_____生物中分离纯化

一、基因手术刀：__________1、来源：2、功能：

二、基因缝纫针：_________1、功能：恢复被限制性内切酶切开了的__________。2、DNA连接酶与DNA聚合酶比较有何异同？三、基因运输车：_______2、载体必须具备的条件？1、常用的载体有：________温故知新原核特定回文特异性位点磷酸二酯键限制性内切酶DNA连接酶载体磷酸二酯键质粒黏性末端（1）识别_____的脱氧核苷酸序列；（2）并在______73下图为DNA分子的切割和连接过程。(1)EcoRI是一种

酶，其识别序列是

，切割位点是

与

之间的

键。切割结果产生的DNA片段末端形式为

。(2)不同来源DNA片段结合，在这里需要的酶应是

，此酶的作用是在

与

之间形成

键，而起“缝合”作用的。限制性内切GAATTC鸟嘌呤脱氧核苷酸

腺嘌呤脱氧核苷酸

磷酸二酯黏性末端DNA连接酶鸟嘌呤脱氧核苷酸

腺嘌呤脱氧核苷酸

磷酸二酯下图为DNA分子的切割和连接过程。(1)EcoRI是一种 74一、目的基因的获得二、重组载体的构建三、重组载体的导入和筛选探究2：基因工程的一般程序是怎样的？四、目的基因的表达和鉴定一、目的基因的获得二、重组载体的构建三、重组载体的751、目的基因：基本操作步骤一、目的基因的获得在基因操作中使用的外源基因。它是编码蛋白质的结构基因，如胰岛素基因、干扰素基因。2、获得目的基因的方法：（1）直接分离法——（2）人工合成法a.鸟枪法b.反转录法c.化学合成法（3）其他方法：从基因文库获得、PCR扩增1、目的基因：基本操作步骤一、目的基因的获得在基因操作中76①分离程序：用限制性内切酶将完整的DNA分子切成适当长度的片段，然后通过检测的方法挑选出所需要的基因。用限制酶切断成许多片段a.鸟枪法(散弹射击法）核酸探针：是用放射性同位素或其它标记物标记的核酸单链，具有非常特意的核苷酸序列，能与DNA互补链结合，可用于特定的基因检测。②检测方法：应用核酸探针③扩增：用PCR仪扩增①分离程序：用限制性内切酶将完整的DNA分子切成适当长度的片77b.反转录法c.化学合成法双链DNA(即目的基因)合成单链DNA(cDNA)目的基因的mRNA逆转录酶mRNA的核苷酸序列蛋白质的氨基酸序列结构基因的核苷酸序列化学合成推测推测目的基因b.反转录法c.化学合成法双链DNA合成单链DNA(cDNA78质粒目的基因限制酶DNA连接酶重组DNA二、重组载体的构建质粒目的基因限制酶DNA连接酶重组DNA二、重组载体的构建79基因表达载体的构建——核心质粒DNA分子一个切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种限制酶目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。二、重组载体的构建基因表达载体的构建——核心质粒DNA分子一个切口两个切口DN80二、重组载体的构建基因表达载体的组成：b、目的基因a、启动子c、终止子d、标记基因e、复制原点二、重组载体的构建基因表达载体的组成：b、目的基因a、启动子811、1997年，科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中表达成功。请据右下图回答问题。(1)此图表示的是采取__________合成基因的方法获取__________基因的过程。(2)图中①DNA是以为_________模板，形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的目的基因。(3)图中③代表

，它往往含

基因，以便对目的基因的检测。人工目的

信使RNA

重组DNA分子

标记

1、1997年，科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠82受体细胞导入方法微生物细胞Ca处理法动物受精卵显微注射法植物体细胞农杆菌转化法、基因枪法植物受精卵花粉管通道法、基因枪法转化——目的基因导入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程受体细胞稳定表达三、重组载体的导入和筛选2+受体细胞导入方法微生物细胞Ca处理法动物受精卵显微注射法83

大肠杆菌细胞最常用的转化方法是:（1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。（2）使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。（3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。

大肠杆菌细胞最常用的转化方法是:84农杆菌介转化法（导入植物体细胞）花粉管通道法（导入植物受精卵）显微注射法（导入动物受精卵）农杆菌介转化法花粉管通道法显微注射法85筛选出获得目的基因的重组细胞四环素抗性基因氨苄青霉素抗性基因通过转化，有的细胞可能导入了重组载体，利用选择性培养基就可以把它们筛选出来。筛选出获得目的基因的重组细胞四环素氨苄青霉通过转化，有的细胞861、基因表达基因表达指基因组中某基因在细胞中转录为mRNA和翻译成蛋白质的过程。基因表达的改变预示着细胞在分子水平上的变化。它往往是细胞形态功能变化之前的变化。DNARNAProtein转录翻译四、目的基因的表达和鉴定基因工程成功的标志：目的基因表达，进而产生相应的性状1、基因表达基因表达指基因组中某基因在细胞中基因表达的改87——检查是否成功四、目的基因的表达和鉴定——检查是否成功四、目的基因的表达和鉴定88从苏云金芽苞杆菌中提取抗虫基因从土壤农杆菌中提取带有选择性标记的质粒同一种限制酶处理抗虫基因与质粒结合形成重组质粒将重组质粒导入土壤农杆菌(农杆菌转化法导入)筛选将土壤农杆菌与棉花细胞混合培养侵染重组质粒将抗虫基因导入棉花细胞并整合到棉花的DNA上植物组织培养获得抗虫棉抗虫棉的培育流程图从苏云金芽苞杆菌中提取抗虫基因从土壤农杆菌中提取带有选择性标89基因工程的基本原理概念图基因工程的基本原理概念图90下图为利用生物技术获得动物乳腺反应器和抗虫棉的过程，据图回答：⑴在基因工程中，A表示

，如果直接从苏云金杆菌中获得抗虫基因，①过程使用的酶区别于其他酶的特点是

，B表示

。

⑵在研究过程中，研究人员首先从相关基因组中获取了目的基因，并采用