【生物】第四章生物产品代谢调控发酵机制课件

第四章生物产品代谢调控发酵机制本章主要内容：氨基酸代谢调控机制核酸与核苷酸代谢调控机制抗生素代谢调控机制1第四章生物产品代谢调控发酵机制第四章生物产品代谢调控发酵机制本章主要内容：氨基酸代谢§1氨基酸代谢调控机制

代谢控制发酵是用遗传学或其他生物化学的方法，人为地在DNA分子水平上改变和控制微生物的代谢，打破微生物正常的代谢调节，使有用产物大量生成和积累。氨基酸发酵和核酸发酵是典型的代谢控制发酵。2第四章生物产品代谢调控发酵机制§1氨基酸代谢调控机制代谢控制发酵是用遗传学或其他生物化谷氨酸与瓜氨酸、鸟氨酸、精氨酸同属于谷氨酸族氨基酸，其合成途径是首先由-酮戊二酸生成谷氨酸，再进一步合成鸟氨酸、瓜氨酸、精氨酸一、谷氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸、精氨酸生物

合成途径及其代谢调节机制葡萄糖→→→谷氨酸→鸟氨酸→瓜氨酸→精氨酸3第四章生物产品代谢调控发酵机制谷氨酸与瓜氨酸、鸟氨酸、精氨酸同属于谷氨酸族氨基酸，其合成途谷氨酸属“非必需”氨基酸，是体内代谢的基本氨基酸之一。在谷氨酰胺合成酶催化下，能与氨反应生成谷氨酰胺由尿排出，起到解除氨毒作用；它还参与脑内蛋白质和糖代谢，促进氧化过程，改善中枢神经系统的功能；在体内它能转化为丙酮或葡萄糖，因而升高血糖，减少糖原异生，从而减少脂肪分解，减少酮体。1.谷氨酸族氨基酸生物合成途径及代谢调节机制谷氨酸的功能4第四章生物产品代谢调控发酵机制谷氨酸属“非必需”氨基酸，是体内代谢的基本氨基酸之一。1.谷肝昏迷预防；防止癫痫；减轻酮尿症和酮血症；胃酸不足；一种脑营养剂；食品保鲜剂。药物保健品食品L-谷氨酸的用途5第四章生物产品代谢调控发酵机制肝昏迷预防；药物保健品食品L-谷氨酸HMP途径谷氨酸代谢途径6第四章生物产品代谢调控发酵机制HMP途径谷氨酸代谢途径6第四章生物产品代谢调控发酵机制由葡萄糖生物合成谷氨酸的代谢途径7第四章生物产品代谢调控发酵机制由7第四章生物产品代谢调控发酵机制EMP途径HMP途径TCA循环DCA循环CO2固定由葡萄糖生成谷氨酸的总反应式：C6H12O6+NH3+O2→C5H9O4N+CO2+3H2O代谢途径：8第四章生物产品代谢调控发酵机制EMP途径HMP途径由葡萄糖生成谷氨酸的总由二羧酸和三羧酸生成谷氨酸9第四章生物产品代谢调控发酵机制由二羧酸和三羧酸生成谷氨酸9第四章生物产品代谢调控发酵机制研究证明：谷氨酸生产菌种存在EMP途径的全部酶和HMP途径有关的酶TCA循环中的柠檬酸、顺乌头酸、异柠檬酸能定量地生成谷氨酸，其相应的酶与谷氨酸合成有关以醋酸和乙醇为原料进行谷氨酸发酵时，DCA循环是C4二羧酸的唯一补充来源；但是以葡萄糖为原料时，在谷氨酸生成期此循环应关闭谷氨酸菌存在CO2固定生成草酰乙酸的PEP羧化酶和苹果酸酶，与谷氨酸得率正相关10第四章生物产品代谢调控发酵机制研究证明：谷氨酸生产菌种存在EMP途径的全部酶和HMP途大肠杆菌及枯草芽孢杆菌等从谷氨酸到精氨酸生物合成途径及调节机制11第四章生物产品代谢调控发酵机制大肠杆菌及枯草芽孢杆菌等从谷氨酸到精氨酸生物合成途径及调节机谷氨酸生产菌及酵母菌等从谷氨酸到精氨酸生物合成及代谢调节机制12第四章生物产品代谢调控发酵机制谷氨酸生产菌及酵母菌等从谷氨酸到精氨酸生物合成及代谢调节机制在黄色短杆菌中谷氨酸、天冬氨酸生物合成的调节机制2.谷氨酸代谢调节机制①谷氨酸脱氢酶②-酮戊二酸脱氢酶③磷酸烯醇丙酮酸羧化酶④柠檬酸合成酶NH4+13第四章生物产品代谢调控发酵机制在黄色短杆菌中谷氨酸、天冬氨酸生物合成的调节机制2.谷氨酸在微生物的代谢中，Glu比Asp优先合成；合成过量时则抑制谷氨酸脱氢酶，使代谢转向合成Asp；Asp过量时反馈抑制PEP羧化酶的活力，停止合成草酰乙酸。NH4+的导入不仅仅证明Glu是氮素同化发酵，它还会抑制Glu生成的逆反应，因此当NH4+存在时，葡萄糖的消耗速度很快，Glu的生成很高；但是当生物素充足时，NH4+几乎不影响糖代谢。14第四章生物产品代谢调控发酵机制在微生物的代谢中，Glu比Asp优先合成；NH4+的导入Glu生产菌大多是生物素缺陷型，发酵时控制生物素亚适量，使细胞变形拉长，改变了细胞膜的通透性引起代谢失调使Glu得以积累。生物素贫乏时，细胞内的Glu含量少而且容易析出，而培养基中积累大量的Glu；生物素丰富时，培养基中几乎不积累Glu，而细胞内却含有大量的Glu，且不易被析出。这说明生物素对细胞膜通透性有重要影响。15第四章生物产品代谢调控发酵机制Glu生产菌大多是生物素缺陷型，发酵时控制生物素亚适生物16第四章生物产品代谢调控发酵机制16第四章生物产品代谢调控发酵机制表面活性剂拮抗作用部位油酸缺陷型遗传阻碍部位糖质或醋酸为碳源的磷脂合成途径甘油缺陷型的遗传阻碍部位石蜡为碳源的磷脂合成途径细菌细胞Glu排出控制机制17第四章生物产品代谢调控发酵机制表面活性剂拮抗作用部位油酸缺陷型遗传阻碍部位糖质或醋酸为碳源丧失或有微弱的-酮戊二酸脱氢酶活力，使-酮戊二酸不能继续氧化；CO2固定能力强，使四碳二羧酸全部由CO2固定反应提供，而不走乙醛酸循环；谷氨酸脱氢酶的活力很强，并丧失谷氨酸对谷氨酸脱氢酶的反馈抑制和反馈阻遏，同时，NADPH2再氧化能力弱，这会使-酮戊二酸到琥珀酸的过程受阻；有过量的NH4+存在，-酮戊二酸经氧化还原共轭氨基化反应而生成谷氨酸却不形成蛋白质，从而分泌泄漏于菌体外；同时，谷氨酸生产菌应不利用体外的谷氨酸，使谷氨酸成为最终产物。3.谷氨酸高产菌模型特征18第四章生物产品代谢调控发酵机制丧失或有微弱的-酮戊二酸脱氢酶活力，使-酮戊二酸不能继续从前图还可以看出：生产菌株还应该具有生物素合成缺陷、油酸合成缺陷和甘油合成缺陷等特点。19第四章生物产品代谢调控发酵机制从前图还可以看出：19第四章生物产品代谢调控发酵机制-生物素缺陷型-油酸缺陷型-甘油缺陷型-温度敏感缺陷型-其它缺陷型当前Glu生产中的几种缺陷型：20第四章生物产品代谢调控发酵机制-生物素缺陷型当前Glu生产中的几种缺陷型：20第四章生物谷氨酸——味精工业生产

味精是Glu单钠盐，学名：-氨基戊二酸一钠，商品中有一分子结晶水COOHCNH2CH2CH2COOHCOONa·H2OCNH2CH2CH2COOHL-谷氨酸L-谷氨酸钠（味精）HH21第四章生物产品代谢调控发酵机制谷氨酸——味精工业生产味精是Glu单钠盐，学名：-氨4.生产工艺流程：淀粉葡萄糖糖蜜稀释蜜配料种子罐发酵罐玉米浆糖蜜磷酸二氢钾硫酸镁无菌空气Fe2+、Mn2+NH3菌种22第四章生物产品代谢调控发酵机制4.生产工艺流程：淀粉葡萄糖糖蜜等电提取中和除铁脱色浓缩、结晶离心干燥味精发酵罐Na2CO323第四章生物产品代谢调控发酵机制等电提取中和除铁脱色浓缩、结晶离心干燥味谷氨酸族氨基酸的生物合成，是由葡萄糖开始，经EMP途径、HMP途径、TCA循环、DCA循环和CO2固定等，首先合成谷氨酸，再从谷氨酸依次经鸟氨酸、瓜氨酸生物合成精氨酸。谷氨酸→N-乙酰谷氨酸→→→鸟氨酸→瓜氨酸→→精氨酸GluOrnCitArg5.鸟氨酸发酵机制24第四章生物产品代谢调控发酵机制谷氨酸族氨基酸的生物合成，是由葡萄糖开始，经EMP途径、HM鸟氨酸发酵与瓜氨酸发酵的遗传缺陷位置(谷氨酸棒杆菌为生产菌)25第四章生物产品代谢调控发酵机制鸟氨酸发酵与瓜氨酸发酵的遗传缺陷位置25第四章生物产品代谢选育瓜氨酸缺陷型（Cit－）菌株，即丧失鸟氨酸转氨甲酰酶，解除精氨酸的反馈抑制；向发酵液中提供瓜氨酸或精氨酸（亚适量），缺陷型才能生长；在瓜氨酸缺陷型（Cit－）的基础上，再选育精氨酸结构类似物抗性突变株（如选育抗精氨酸氧肟酸ArgHx和抗D-精氨酸等），就能遗传性的解除精氨酸的反馈调节。鸟氨酸生产菌选育模型26第四章生物产品代谢调控发酵机制选育瓜氨酸缺陷型（Cit－）菌株，即丧失鸟氨酸转氨甲酰酶，解6.瓜氨酸生物合成与发酵机制（讨论）27第四章生物产品代谢调控发酵机制6.瓜氨酸生物合成与发酵机制（讨论）27第四章生物产品代鸟氨酸发酵与瓜氨酸发酵的遗传缺陷位置(谷氨酸棒杆菌为生产菌)28第四章生物产品代谢调控发酵机制鸟氨酸发酵与瓜氨酸发酵的遗传缺陷位置28第四章生物产品代谢精氨酸发酵不能用阻断代谢流和营养缺陷型来进行，而应用抗反馈调节突变株，选育抗L-精氨酸结构类似物突变株（如D-ArgR、ArgHx等），解除精氨酸自身调节，使精氨酸积累。7.精氨酸生物合成与发酵机制29第四章生物产品代谢调控发酵机制精氨酸发酵不能用阻断代谢流和营养缺陷型来进行，而应用抗反馈调二、天冬氨酸、赖氨酸、苏氨酸、蛋氨酸

生物合成途径与发酵机制天冬氨酸——Asp，C4H7O4N赖氨酸——Lys，C6H14O2N2苏氨酸——Thr，C4H9O3N蛋氨酸——Met，C5H11O2SN异亮氨酸——Ile，C6H13O2N天冬氨酸与赖氨酸、苏氨酸、蛋氨酸同属于天冬氨酸族的氨基酸30第四章生物产品代谢调控发酵机制二、天冬氨酸、赖氨酸、苏氨酸、蛋氨酸

生物合HMP途径31第四章生物产品代谢调控发酵机制HMP途径31第四章生物产品代谢调控发酵机制①天冬氨酸激酶（AK）②高丝氨酸脱氢酶（HD）③二氢吡啶-2,6-二羧酸（DDP）合成酶④高丝氨酸激酶⑤O-琥珀酰高丝氨酸转琥珀酰酶⑥半胱氨酸脱硫化氢酶⑦苏氨酸脱氨酶⑧天冬氨酸半醛脱氨酶⑨二氢吡啶-2,6-二羧酸（DDP）还原酶1.天冬氨酸族氨基酸的生物合成途径葡萄糖→四碳二羧酸→32第四章生物产品代谢调控发酵机制①天冬氨酸激酶（AK）1.天冬氨酸族氨基酸的生物合成途径葡2.天冬氨酸族氨基酸生物合成的代谢调节机制(1)大肠杆菌中天冬氨酸族氨基酸生物合成的调节机制33第四章生物产品代谢调控发酵机制2.天冬氨酸族氨基酸生物合成的代谢调节机制(1)大肠杆菌中在黄色短杆菌中赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和异亮氨酸生物合成的代谢调节(2)谷氨酸棒杆菌、黄色短杆菌等天冬氨酸族氨基酸的代谢调节机制34第四章生物产品代谢调控发酵机制在黄色短杆菌中赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸(2)谷氨酸棒杆菌、黄优先合成：⑴葡萄糖经酵解途径生成PYR，PYR经CO2固定和氧化脱羧进入TCA循环，生成草酰乙酸，再经氨基化反应生成Asp；⑵Met比Thr、Lys优先合成，Thr比Lys优先合成。天冬氨酸激酶是关键酶，AK是变构酶，具有两个变构部位，可以与终产物Lys和Thr结合，受终产物的反馈控制。35第四章生物产品代谢调控发酵机制优先合成：⑴葡萄糖经酵解途径生成PYR，PYR经CO2在黄色短杆菌、谷氨酸棒杆菌等微生物中，AK是单一的，并且受Lys和Thr的协同反馈抑制，反馈调节易于解除，使育种简单化，所以常常被用作氨基酸发酵育种的出发菌株。黄色短杆菌的AK受Lys和Thr协同反馈情况36第四章生物产品代谢调控发酵机制在黄色短杆菌、谷氨酸棒杆菌等微生物中，AK是单一的，并且受L“代谢互锁”乳糖发酵短杆菌中赖氨酸及其前体物生物合成的代谢调节37第四章生物产品代谢调控发酵机制“代谢互锁”乳糖发酵短杆菌中赖氨酸及其前体物生物合成的代谢调在黄色短杆菌中天冬氨酸与乙酰CoA形成的平衡合成PC平衡合成：Asp和乙酰CoA形成平衡合成，当乙酰CoA合成过量时，能解除Asp对PEP羧化酶的反馈抑制。38第四章生物产品代谢调控发酵机制在黄色短杆菌中天冬氨酸与乙酰CoA形成的平衡合成PC平衡L-天冬氨酸是酸性氨基酸，属“非必需”氨基酸。可以作为K+、Mg2+离子的载体向心肌输送电解质，从而改善心肌收缩功能，同时降低氧消耗，在冠状动脉循环障碍缺氧时，对心肌有保护作用。参与鸟氨酸循环，促使氨和二氧化碳生成尿素，降低血液中氨和二氧化碳的量，增强肝脏功能，消除疲劳。新型甜味剂的原料。39第四章生物产品代谢调控发酵机制L-天冬氨酸是酸性氨基酸，属“非必需”氨基酸。39第四章生

高产赖氨酸菌的遗传标记位置3.赖氨酸发酵机制（高丝氨酸脱氢酶缺失）AK40第四章生物产品代谢调控发酵机制高产赖氨酸菌的遗传标记位置3.赖氨酸发酵机制（高丝1）切断或减弱支路代谢，选育高丝氨酸缺陷型（Hom－）突变株，或蛋氨酸和苏氨酸或异亮氨酸缺陷型（Met－+Thr－、Ile－）突变株；2）解除Thr和Lys的协同反馈抑制作用，选育结构类似物抗性突变株，使赖氨酸大量积累，如：①S-(2-氨基乙基)-L-半胱氨酸抗性株（AECr）②L-赖氨酸氧肟酸盐抗性株（LysHxr）③苏氨酸氧肟酸盐抗性突变株（ThrHxr）等；3）增加Lys前体物Asp的量：切断生成丙酮酸的支路，同时解除Asp对PEP羧化酶（即PC）的反馈抑制；选育丙氨酸缺陷型（Ala－）或温度敏感突变株（tmps），中断丙酮酸到Ala的反应；选育AspHxr、磺胺类药物抗性突变株；41第四章生物产品代谢调控发酵机制1）切断或减弱支路代谢，选育高丝氨酸缺陷型（Hom－）突变株赖氨酸发酵育种所使用的一些结构类似物42第四章生物产品代谢调控发酵机制赖氨酸发酵育种所使用的一些结构类似物42第四章生物产品代谢4）在乳糖发酵短杆菌中，Lys的生物合成与亮氨酸（Leu）之间存在着“代谢互锁”，即赖氨酸分支途径的初始酶二氢吡啶-2,6-二羧酸（DDP）合成酶受Leu的反馈阻遏（如图）选育Leu－+LeuHxr或Leu温度敏感突变株乳酸发酵短杆菌中Lys与Leu生物合成间的相互关系43第四章生物产品代谢调控发酵机制4）在乳糖发酵短杆菌中，Lys的生物合成与亮氨酸（Leu）之⑴选择亮氨酸缺陷型菌株；⑵选育抗亮氨酸结构类似物突变株；⑶选育对苯醌或喹啉衍生物敏感株——这是一种寻找亮氨酸渗漏缺陷型菌株的育种方法。为解除代谢互锁，可选育：44第四章生物产品代谢调控发酵机制⑴选择亮氨酸缺陷型菌株；为解除代谢互锁，可选育：44第⑴选择丙氨酸缺陷型菌株；⑵选育抗天冬氨酸结构类似物突变株；⑶选育适宜的CO2固定酶/TCA循环酶活性比的菌株。增加前体物的合成和阻塞副产物生成：45第四章生物产品代谢调控发酵机制⑴选择丙氨酸缺陷型菌株；增加前体物的合成和阻塞副产物生添加丰富的生物素，既可以使Glu不排出体外，并使代谢流转向Lys的合成，又能提高PEP羧化酶（PC）的活性，促使PEP生成草酰乙酸，再生成Asp。

选育温度敏感突变株：如，乳糖发酵短杆菌AJ11093AJ1099在发酵前期于29～33℃生长良好，而到34℃以上时则不能生长，发酵积累赖氨酸盐酸盐。其它措施：46第四章生物产品代谢调控发酵机制添加丰富的生物素，既可以使Glu不排出体外，并使代谢选育；+：回复突变。某些赖氨酸产生菌及其产酸能力47第四章生物产品代谢调控发酵机制；+：回复突变。某些赖氨酸产生菌及其产酸能力47第四章生物Lys的结构类似物的作用：起到假反馈抑制作用。Lys的结构类似物的结构与Lys相似为AK所误认，与Thr一起在AK的变构部位上结合，协同抑制酶的活性。但当Lys的结构类似物（AEC）单独存在时，对酶活性没有抑制作用。通过改变AK编码的结构基因，可以使AK对Lys及结构类似物不敏感，即使在过量Thr存在时，该酶也不与Lys或结构类似物结合，但酶的活性中心不变。（具有这一特性的的菌株叫做抗结构类似物突变株或代谢调节突变株。）具有抗性并兼有营养缺陷型的菌株，Lys才能高产。48第四章生物产品代谢调控发酵机制Lys的结构类似物的作用：起到假反馈抑制作用。48第四章赖氨酸工业化生产赖氨酸，Lysine，化学名称2,6-二氨基乙酸化学组成C6H14O2N2CH2NH2CH2CH2CH2CH·NH2COOHL-赖氨酸Lys是人体必需的8种氨基酸之一产量在氨基酸中占第三位，仅次于谷氨酸和蛋氨酸49第四章生物产品代谢调控发酵机制赖氨酸工业化生产赖氨酸，Lysine，化学名称2,6糖蜜配料灭菌发酵罐菌种斜面摇瓶种子种子罐压缩空气总过滤器分过滤器N,P,K,Mg提取、精制LysLys发酵工艺流程：50第四章生物产品代谢调控发酵机制糖蜜菌种斜面压缩空气N,P,K,Mg提取、精制Lys

温度：发酵前期32℃中后期34℃pH：6.5～7.5

种龄和接种量：二级种子接种量约2%，种龄8～12h三级种子···10%，···6～28h

通风供氧：Lys的最大生成量是在供氧充足、细菌呼吸充足的时候51第四章生物产品代谢调控发酵机制温度：发酵前期32℃51第四章生物产品代谢调控发酵机制生物素：要充足，20～30g/L以上维生素B1：有促进作用

醋酸：加入醋酸比单独采用糖质原料Lys产量高

硫酸铵：适当增加，4%～4.5%

Cu2+：一定浓度的CuSO4·5H2O，可提高产量

流加糖和其它生长因子52第四章生物产品代谢调控发酵机制生物素：要充足，20～30g/L以上52第四章生物产品代发酵液→菌体分离→上清液→离子交换→真空浓缩离子分离←重结晶←粗结晶←离子分离←结晶结晶→干燥→Lys成品菌体→水洗→二次菌体分离→上清液饲料←菌体母液二次母液调pH，加入絮凝剂Lys提取与精制工艺：53第四章生物产品代谢调控发酵机制发酵液→菌体分离→上清液→离子交换→真空浓缩1）发酵液的处理：用草酸除去发酵液中的Ca3+，调节pH至2～32）菌体分离：用碟片式自动卸渣高速离心机，分离菌体和草酸钙等3）离子交换吸附及洗脱：铵型阳离子交换树脂，洗脱剂为氨水加氯化铵；用茚三酮检查流出液，pH9.5～12，得率可达90%～95%4）真空浓缩：去除氨，并提高Lys含量，真空时温度65℃，浓度22～23°Bé5）中和结晶：加入工业盐酸，搅拌，pH5.2，自然冷却结晶，至5℃结晶完全（粗结晶，含一分子结晶水的粗L-Lys盐酸盐）6）重结晶：用蒸馏水溶解，11～12°Bé，加入活性炭脱色，压滤，再真空浓缩至22°Bé，再结晶、冷却、离心分离并水洗7）干燥：60℃热风干燥，去结晶水，得到L-Lys盐酸盐，含水0.1%以下54第四章生物产品代谢调控发酵机制1）发酵液的处理：用草酸除去发酵液中的Ca3+，调节pH至4.苏氨酸高产菌

的生化模型特

征（讨论）异亮氨酸反馈控制55第四章生物产品代谢调控发酵机制4.苏氨酸高产菌

的生化模型特

征切断支路代谢，选育Met－、Lys－的突变株；选育抗Thr和Lys结构类似物的突变株，遗传性的解除Thr对高丝氨酸脱氢酶的反馈调节，以及遗传性的解除Thr、Lys对天冬氨酸激酶的协同反馈抑制；切断Thr进一步代谢途径，选育Ile－的突变株，或异亮氨酸渗漏突变株（IleL），或异亮氨酸缺陷回复突变株（Ile+）；增强Asp的生物合成。苏氨酸高产菌的生化模型特征：56第四章生物产品代谢调控发酵机制苏氨酸高产菌的生化模型特征：56第四章生物产品代谢调控发酵利用现代生物技术选育苏氨酸生产菌⑴利用转导和原生质体转化法选育Thr生产菌转导作用就是利用转导噬菌体为媒介，将供体菌的部分基因导入到受体菌中从而使受体均获得供体菌的部分遗传性状的过程。特点：过程容易；易获得优良性状；选育时间短。57第四章生物产品代谢调控发酵机制利用现代生物技术选育苏氨酸生产菌⑴利用转导和原生质体转化法大肠杆菌中天冬氨酸族氨基酸生物合成的调节机制58第四章生物产品代谢调控发酵机制大肠杆菌中天冬氨酸族氨基酸生物合成的调节机制58第四章生大肠杆菌野生型B1双缺突变株B2（TDH－＋TD－）羟缬氨酸抗性标记B3AKⅠ、HDⅠ反馈抑制脱敏株B4AKⅠ、HDⅠ去阻遏突变株B5AECr反馈抑制脱敏株B6B7B84种调节变异组合在一起的转导子B9具有6种调节变异组合的转导子B122次诱变带上Thr－带上Thr－2次转导导入解除AKⅠ和HDⅠ反馈阻遏的B10基因导入解除AKⅠ和HDⅡ反馈阻遏的B11基因发酵Thr达40g/LTDH——Thr脱氢酶TD——Thr脱氨酶AK——Asp激酶HD——Hom脱氢酶带上羟缬氨酸抗性标记木柱等：利用转导和原生质体转化法选育Thr生产菌方法59第四章生物产品代谢调控发酵机制大肠杆菌野生型B1双缺突变株B2（TDH－＋TD－）羟缬⑵利用原生质体融合技术选育Thr生产菌60第四章生物产品代谢调控发酵机制⑵利用原生质体融合技术选育Thr生产菌60第四章生物产品代⑶利用基因工程技术构建Thr工程菌利用重组DNA技术构建Thr工程菌株，即可采用简单的鸟枪法单克隆，也可采用整个Thr操纵子的体外诱变及体外重组。最基本的方法是：将Thr生物合成途径中起限速作用的限速酶AK和HD的基因连续在多拷贝的载体质粒上并克隆化，使该基因进行扩增，通过发挥基因的基因扩增效应，排除生物合成中的“瓶颈”效应，从而使Thr产量得以大大提高。61第四章生物产品代谢调控发酵机制⑶利用基因工程技术构建Thr工程菌利用重组DNA技术构建Th苏氨酸的生物合成及苏氨酸操纵子的结构62第四章生物产品代谢调控发酵机制苏氨酸的生物合成及苏氨酸操纵子的结构62第四章生物产品代谢将Thr合成酶系HD基因、HK基因、thr合成基因组入L-Lys产生菌谷氨酸棒杆菌中，由积累L-Lys62g/L变成积累L-Thr51g/L。据田边制药公司报道，将改良后不再受反馈抑制的苏氨酸合成酶（AK、HD）基因导入改良型粘质沙雷氏菌（Serratiamarcescens），以蔗糖为碳源进行发酵，积累苏氨酸60mgml。63第四章生物产品代谢调控发酵机制将Thr合成酶系HD基因、HK基因、thr合成基因组入L-L高产蛋氨酸菌的遗传标记位置解除反馈抑制；切断支路代谢；切断Met向下反应的通路；增加前体物的合成。5.蛋氨酸发酵机制（讨论）（SAM）64第四章生物产品代谢调控发酵机制高产蛋氨酸菌的遗传标记位置解除反馈抑制；5.蛋氨酸发酵机制三、分支链氨基酸族氨基酸生物合成途径与缬

氨酸、亮氨酸、异亮氨酸发酵机制亮氨酸Leu，C6H13O2N异亮氨酸Ile，C6H13O2N缬氨酸Val，C5H11O2N65第四章生物产品代谢调控发酵机制三、分支链氨基酸族氨基酸生物合成途径与缬

1.分支链氨基酸族氨基酸生物合成途径和代谢调节机制天冬氨酸葡萄糖生物合成途径66第四章生物产品代谢调控发酵机制1.分支链氨基酸族氨基酸生物合成途径和代谢调节机制天冬氨酸分支链氨基酸族氨基酸生物合成途径调节L-苏氨酸脱氨酶L-苏氨酸TDASTD——L-苏氨酸脱氨酶AS——-乙酰乳酸合成酶67第四章生物产品代谢调控发酵机制分支链氨基酸L-苏氨酸L-苏氨酸TDASTD——L-苏氨酸脱1）分枝链氨基酸生物合成的优先顺序为：Ile、Leu、Val2）TD受Ile的强烈反馈抑制；3）AS受Val的反馈抑制；4）-异丙基苹果酸合成酶受Leu的反馈抑制；5）分枝链氨基酸合成酶系的各个酶的生成，受这三种末端氨基酸——Ile+Val+Leu的多价阻遏。分枝链氨基酸生物合成途径和自我调节的特点：68第四章生物产品代谢调控发酵机制1）分枝链氨基酸生物合成的优先顺序为：Ile、Leu、

添加D-苏氨酸、α-溴丁酸、α-氨基丁酸等前提物，绕过反馈调节；添加的D-苏氨酸脱氢酶是诱导酶，不受反馈抑制，并选育Ile结构类似物抗性突变株，从而解除Ile对TD和对AS的反馈调节；由于添加D-苏氨酸，则会使Ile、Val、Leu在菌体内的贮存平衡受到破坏，使Ile大量积累；注意控制培养基中Val和Ｇ亚适量，并选育Leu－突变株；增加前体物质的生成量。2.异亮氨酸代谢调节的解除及育种途径69第四章生物产品代谢调控发酵机制2.异亮氨酸代谢调节的解除及育种途径69第四章生物

切断支路代谢，选育Ile－＋Leu－突变株；解除Ile、Val、Leu对合成酶系（AS）的多价阻遏（筛选结构类似物突变株）；解除Val对α-乙酰乳酸合成酶的反馈抑制。Val生产菌的遗传标记：Ile－＋Leu－＋α-ABr＋2-TAr＋CMr（-氨基丁酸）（2-噻唑丙氨酸）3.缬氨酸育种机制（讨论）（“共系的生物合成途径”——分别为共同的酶所催化）70第四章生物产品代谢调控发酵机制（-氨基丁酸）（2-噻唑丙氨酸）3.缬氨酸育种

首先必须解除Leu对-异丙基苹果酸合成酶的反馈抑制，选育抗Leu结构类似物(如2-TA)突变株；选育抗Val结构类似物(如2-AB)的突变株；切断支路代谢，选育Ile－突变株。4.亮氨酸发酵机制（讨论）71第四章生物产品代谢调控发酵机制4.亮氨酸发酵机制（讨论）71第四章生物产品代谢调控发酵四、芳香族氨基酸生物合成途径与色氨酸、

苯丙氨酸、酪氨酸的发酵机制1.芳香族氨基酸生物合成途径色氨酸Trp苯丙氨酸Phe酪氨酸Tyr分子中都含有苯环72第四章生物产品代谢调控发酵机制四、芳香族氨基酸生物合成途径与色氨酸、

苯丙1.芳香族氨基酸的生物合成途径73第四章生物产品代谢调控发酵机制1.芳香族氨基酸的生物合成途径73第四章生物产品代谢调控发从4-磷酸赤藓糖与磷酸烯醇丙酮酸合成3-脱氧-D-阿拉伯糖型庚酮糖-7-磷酸（DAHP）到分支酸，是Phe、Tyr和Trp的共同途径；从分支酸到预苯酸（PPA），是Phe和Tyr的共同途径；在分枝酸处，倾向于优先合成氨茴酸；在预苯酸处，倾向于优先合成对羟苯丙酮酸。即优先合成顺序是：Trp-Tyr-Phe。合成途径特点：74第四章生物产品代谢调控发酵机制从4-磷酸赤藓糖与磷酸烯醇丙酮酸合成3-脱氧-D-阿拉伯糖型大肠杆菌中有三种DAHP合成酶谷氨酸棒杆菌中，在芳香族氨基酸生物合成途径中受调节控制的关键酶：DAHP合成酶（DS）、分枝酸变位酶（CM）、预苯酸脱氢酶（PD）、预苯酸脱水酶（PT）和氨茴酸合成酶（AS）黄色短杆菌中有一种DAHP合成酶，代谢调节较易控制2.芳香族氨基酸的代谢调控机制75第四章生物产品代谢调控发酵机制大肠杆菌中有三种DAHP合成酶谷氨酸棒杆菌中，在芳香族氨大肠杆菌中芳香族氨基酸生物合成途径与代谢控制①DAHP合成酶②分支酸变位酶③PPA脱氢酶④PPA脱水酶⑤氨茴酸合成酶76第四章生物产品代谢调控发酵机制大肠杆菌中芳香族氨基酸生物合成途径与代谢控制①DAHP合成酶在黄色短杆菌中芳香族氨基酸生物合成的调节机制DS－DAHP合成酶CM－分支酸变位酶PD－预苯酸脱氢酶PT－预苯酸脱水酶AS－氨茴酸合成酶77第四章生物产品代谢调控发酵机制在黄色短杆菌中芳香族氨基酸生物合成的调节机制DS－DAHP合色氨酸生产菌的遗传标记位置3.色氨酸发酵机制（讨论）78第四章生物产品代谢调控发酵机制色氨酸生产菌的遗传标记位置3.色氨酸发酵机制（讨论）78第色氨酸代谢调控机制（大量生成和积累色氨酸）：切断支路代谢，选育苯丙氨酸和酪氨酸双重缺陷型（phe-+tyr-）的突变株；然后遗传性的解除色氨酸自身的反馈抑制和阻遏及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸对DAHP合成酶的反馈调节；选育色氨酸多重结构类似物抗性突变株；在发酵过程中限量添加苯丙氨酸和酪氨酸。79第四章生物产品代谢调控发酵机制色氨酸代谢调控机制（大量生成和积累色氨酸）：切断支路代谢苯丙氨酸生产菌的遗传标记位置4.苯丙氨酸和酪氨酸发酵机制（讨论）80第四章生物产品代谢调控发酵机制苯丙氨酸生产菌的遗传标记位置4.苯丙氨酸和酪氨酸发酵机制（苯丙氨酸代谢调控机制：首先切断芳香族氨基酸生物合成向酪氨酸和色氨酸的代谢支路，选育色氨酸和酪氨酸双重缺陷型（tyr-+trp-）突变株；然后遗传性的解除苯丙氨酸自身对预苯酸脱水酶和分支酸变位酶的反馈抑制和阻遏，及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸对DAHP合成酶的反馈调节；选育苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸多重结构类似物抗性突变株；发酵中限量添加酪氨酸和色氨酸，使苯丙氨酸大量积累。81第四章生物产品代谢调控发酵机制苯丙氨酸代谢调控机制：首先切断芳香族氨基酸生物合成向酪氨§2核酸类物质的代谢调控机制一、核苷酸的生物合成途径核酸发酵是在氨基酸发酵基础上的进一步深化和发展的代谢控制发酵1.嘌呤核苷酸的全合成途径（“从无到有”途径）IMP－肌苷酸SAICAR－5-氨基-(N-琥珀基)代氨甲AMP－腺苷酸酰咪唑核苷酸GMP－鸟苷酸AICAR－5-氨基-4-氨甲酰咪唑核苷酸XMP－黄苷酸PRPP－磷酸核糖焦磷酸SAMP－腺苷琥珀酸PRA－5-磷酸核糖胺（次黄嘌呤核苷一磷酸）（腺嘌呤核苷一磷酸）（黄嘌呤核苷一磷酸）82第四章生物产品代谢调控发酵机制§2核酸类物质的代谢调控机制一、核苷酸的生物合成途径嘌呤核苷酸的全合成途径(1)——5'-IMP的生成（“从无到有”）83第四章生物产品代谢调控发酵机制嘌呤核苷酸的全合成途径(1)——5'-IMP的生成（“84第四章生物产品代谢调控发酵机制84第四章生物产品代谢调控发酵机制嘌呤核苷酸的全合成途径(2)——AMP和GMP的互变（枯草芽孢杆菌）85第四章生物产品代谢调控发酵机制嘌呤核苷酸的全合成途径(2)——AMP和GMP的互变（枯各种微生物合成IMP的途径是一样的,但是从IMP分别生成AMP和GMP的途径是不同的。从IMP开始，

枯草杆菌以IMP为中心分出两条环形路线，由此AMP与GMP可以互相转换；

产黄短杆菌分出的两条路线不是环形，而是单项分枝的，AMP与GMP不能互相转换86第四章生物产品代谢调控发酵机制各种微生物合成IMP的途径是一样的,但是从IMP分别生成AM枯草杆菌的嘌呤核苷酸生物合成途径葡萄糖→→→5-磷酸核糖→（磷酸核糖焦磷酸）（5-磷酸核糖胺）（5-胺基-4-（N-琥珀基）代氨甲酰咪唑核苷酸）（5-胺基-4-氨甲酰咪唑核苷酸）肌苷酸黄苷酸鸟苷酸腺苷酸琥珀酰腺苷酸87第四章生物产品代谢调控发酵机制枯草杆菌的嘌呤核苷酸生物合成途径葡萄糖→→→5-磷酸核糖→（产黄短杆菌的嘌呤核苷酸生物合成途径88第四章生物产品代谢调控发酵机制产黄短杆菌的嘌呤核苷酸生物合成途径88第四章生物产品代谢调2.嘧啶核苷酸的全合成途径（略）89第四章生物产品代谢调控发酵机制2.嘧啶核苷酸的全合成途径（略）89第四章生物产品代谢调3.核苷酸生物合成的补救途径当全合成受阻时，微生物可从培养基中取得完整的嘌呤或嘧啶，和戊糖、磷酸通过酶的作用直接合成单核苷酸所以称为“补救途径”。嘌呤碱基、核苷和核苷酸之间能通过分段合成互相转变其中最重要的反应是：碱基+PRPP5'-核苷酸+PPi核苷酸焦磷酸化酶90第四章生物产品代谢调控发酵机制3.核苷酸生物合成的补救途径当全合成受阻时，微生物可从培养嘌呤核苷酸的补救合成途径——嘌呤碱基、核苷和核苷酸的相互转换91第四章生物产品代谢调控发酵机制嘌呤核苷酸的补救合成途径91第四章生物产品代谢调控发酵机制IMP合成系的代谢控制及嘌呤核苷酸互变的代谢控制二、嘌呤核苷酸的代谢调节机制92第四章生物产品代谢调控发酵机制IMP合成系的代谢控制及嘌呤核苷酸互变的代谢控制二、嘌呤核苷嘌呤核苷酸可以分为GMP、IMP等6-羟基嘌呤核苷酸与ADP、AMP等的6-氨基嘌呤核苷酸两类。如果同时添加这两类嘌呤核苷酸（GMP+AMP或IMP+ADP），抑制作用就会相乘的提高，这种现象叫做“合作终产物抑制”。93第四章生物产品代谢调控发酵机制嘌呤核苷酸可以分为GMP、IMP等6-羟基嘌呤核苷酸与ADP嘌呤核苷酸相互转换系的代谢控制调节位点A①②③④⑤⑥PR-ATP1-（5'-磷酸核糖基）-三磷酸腺苷⑥AMP脱氨酶⑤SAMP裂解酶④SAMP合成酶③XMP氨化酶②GMP还原酶①IMP脱氢酶94第四章生物产品代谢调控发酵机制嘌呤核苷酸相互转换系的代谢控制调节位点A①②③④⑤⑥PR-A以IMP为中心的两个循环，各个反应是不可逆的IMP脱氢酶受GMP的反馈抑制，也被GMP阻遏；GMP还原酶受ATP的反馈抑制。同样的，AMP抑制SAMP合成酶，GTP抑制AMP脱氨酶SAMP→AMP反应的供能体为GTP，XMP→GMP反应的供能体为ATP95第四章生物产品代谢调控发酵机制以IMP为中心的两个循环，各个反应是不可逆的IMP脱氢酶受G根据上述调节机制，当细胞中的GMP水平提高到一定程度时，从IMP的代谢流就自动地转向AMP方面；反之，当细胞的AM水平高到一定程度时，从IMP的代谢流就自动地转向GMP方面。另一方面，核苷酸的代谢也与组氨酸的生物合成有关：AICAR→IMP→AMP→ATP→PR-ATP→AICAR形成一个循环，由PRATP经咪唑甘油磷酸生成组氨酸。假入组氨酸过剩，则不走此途径。96第四章生物产品代谢调控发酵机制根据上述调节机制，当细胞中的GMP水平提高到一定程度时，从I三、肌苷和肌苷酸高产菌的选育模型1）切断两条支路代谢，选育腺嘌呤缺陷型（Ade－）和黄嘌呤缺陷型（Xan－）的双重缺陷型突变株；2）通过限量腺嘌呤和鸟嘌呤来解除腺嘌呤系和鸟嘌呤系化合物对IMP生物合成的酶的反馈抑制；3）进一步选育抗腺嘌呤、鸟嘌呤类似物和（或）抗磺胺剂突变株，从遗传上解除正常代谢控制；（选育抗性突变株时，应采用丧失腺嘌呤脱氢酶（dea－）的菌株为出发菌株）97第四章生物产品代谢调控发酵机制三、肌苷和肌苷酸高产菌的选育模型1）切断两条支路代谢，选育腺4）选育Mn2+脱敏突变株（MnINS），或控制培养基中Mn2+的浓度，解除细胞膜渗透型障碍。5）生产肌苷时，肌苷酸酶活性要强，而肌苷酸化酶要越弱越好，以使生成的肌苷不再分解。模型：Ade－+Xa－+dea－+GMPred－+8AGr（或8AXr、ARr）+SGr+NP－+ARr+Smr（符号见《微生物工程工艺原理》p.116）98第四章生物产品代谢调控发酵机制4）选育Mn2+脱敏突变株（MnINS），或控制培养基中Mn5-IMP发酵应具备的条件：选择肌苷酸酶弱或丧失的出发菌株；切断IMP向下的两条支路，使IMP大量生成和积累；选育结构类似物双重抗性突变株；限量添加Mn2+，解除细胞膜渗透型障碍。肌苷酸发酵机制99第四章生物产品代谢调控发酵机制肌苷酸发酵机制99第四章生物产品代谢调控发酵机制鸟苷酸发酵机制(讨论)100第四章生物产品代谢调控发酵机制鸟苷酸发酵机制(讨论)100第四章生物产品代谢调控发酵机制END101第四章生物产品代谢调控发酵机制END101第四章生物产品代谢调控发酵机制我劝一个草率结婚的朋友离婚。她平静的告诉我，如果说当初鲁莽结婚是个错误。那么，现在草率离婚是一错再错。这位朋友后来还是离婚了，大家一致认为她的行为很理性。

同样的故事正在互联网搜索巨头谷歌身上发生，但是谷歌选择了草率“离婚”。

饮鸩止渴

由于急于抑制苹果iphone手机翻天覆地的产业冲击，谷歌采取急功近利的粗糙型开放策略。饮鸩止渴的策略一时取得了成果。市场研究公司尼尔森最近公布的数据显示，在通过VerizonWireless、AT&T和SprintNextel三大运营商经销后，谷歌Android手机在美国市场上的销售量已经超过iPhone。另一家市场研究公司iSuppli甚至认为，全球范围内使用Android操作系统的手机数量将在2012年超过苹果iPhone。

表面繁华的背后，是Android生态系统的一团糟，谷歌正在为自己的粗放型开放策略买单。

用户对谷歌手机的态度从开始的好奇、后来的犹豫，变成强烈的批评。“大多Android手机程序都是垃圾，乱七八糟的”，一位手机发烧友迅速投奔了iphone的阵营：“同样的植物人大战僵尸游戏，在谷歌手机和iphone手机上的体验简直没法比”

混乱，还是混乱。一切一切的乱象，折射出谷歌已经失去对Android生态系统的控制。这一切的根源，我的判断是开放策略初期过于宽松，导致失去控制权。混乱的生态系统表现在用户手机上，就是应用程序的混乱和粗燥。

一错再错

为此，谷歌开始采取对策。最近，有国内厂商称新的Android3.0开始关闭应用程序的API(应用程序编程接口)，统一Android界面。这意味着，谷歌将放弃其初始开放策略，开始封闭管理。

粗看之下，谷歌认识到自己的错误。既然是过度开放导致的错误，那么收紧开放尺度是很自然的逻辑，无懈可击。但我认为，谷歌仓促收紧开放策略仍然是个错误。打个比喻。如果过度开放的政策是草率结婚，那么草率的封闭就是草率离婚。这么判断的原因很简单，谷歌把Android开放出去的那一天，Android已经不属于谷歌。谷歌没有认识到这一点，还以为Android只是自己的。

合作伙伴对谷歌封闭政策的反应加强了我的判断结论。经济观察报报道，国内第一家生产基于Android平台手机的设计公司创杨通信，近日已经被迫出售。创杨通信负责人给出的出售理由是，“因为不愿意甘当炮灰而选择放弃。”

按照目前Android3.0将统一界面的想法，未来的手机市场将出现毫无差异化的产品。这对于企业来说，几乎意味着不可避免的价格战。利润空间的微薄，导致合作伙伴生存环境恶劣。于是大量退出几乎是一种必然。

除了为合作伙伴找到新的利益空间，谷歌还将面临开放阵营精神层面的声讨，这对谷歌的挑战会更大。如果说谷歌为了自己竞争的私利利用了开放，赢得了名声。那么，谷歌不能一脚把开放踢开，他现在还需要为这种名声买单。

如果只顾自己收网，谷歌会被面临铺天盖地的道德谴责。谷歌，希望你准备好了，三思而行。

木桶效应就是指一个水桶无论有多高，它盛水的高度取决于其中最低的那块木板。这在选购手机的时候也同样适用。尤其是很多用户在购买手机的时候，都会专注于某一个参数，比如要求处理器主频要高达1GHz，但一部手机的整机表现是由多个因素组成，所以在购买手机的时候一定要从整体的角度上来看一部手机的性除了处理器主频以外，其实还有很多影响整机表现的元素，比如运行内存(RAM)、机身内存(ROM)、操作系统、厂商对系统的优化都会有所影响。不过在很多用户眼中，这几项却远没有处理器主频重要。而如果忽略这几项的话，可能买到一个主频很高，但整机性能却仍然不令人满意的机型。

用户在选机过程中切勿只关注一个硬件参数，这样很可能并不能买到一款理想的机型，就算买的手机主频再高，运行内存低的话仍然无法同时运行数个程序、机身内存小的话则无法把太多的软件安装到机器上，这对整机耗电和运行速度方面都有所影响、而厂商优化更是决定着一部手机的稳定性和部分运行速度。综上所述，大家在选购手机的时候一定要综合考虑一款手机的硬件规格。除此之外，也不要把硬件看的太过重要，就比如苹果iPhone3GS在硬件配置上并不出众，但却在操控手感以及软件资源上目前难有机型企及。更高分辨率能获得更为逼真细腻的显示效果，所以对于屏幕的分辨率绝大多数人都会偏向于分辨率更高的机型。但对于笔者所说的高分辨率未必是好事会有所怀疑。其实这里说的高分辨率“不好”更多是指采用非主流的高分辨率机型。在此前，就有几款“悲情”机型在分辨率上吃了不小的亏。

大名鼎鼎的HTCDiamond就是一款颇具代表意义的机型，Diamond上市的手机市场还处于QVGA时代、只有少数旗舰机皇采用WVGA这样级别的屏幕，由于HTCDiamond却采用了VGA这一过渡型的分辨率，而也正是因为这一点，Diamond很多软件都未有支持或无法完美运行，可谓是一个不小的遗憾。除此之外，曾经非常经典的

102第四章生物产品代谢调控发酵机制我劝一个草率结婚的朋友离婚。她平静的告诉我，如果说当初鲁莽结附赠人生心语人生太短，聪明太晚人生太短，聪明太晚(1)

我们都老得太快

却聪明得太迟把钱省下来，等待退休后再去享受结果退休后，因为年纪大，身体差，行动不方便，哪里也去不成。钱存下来等养老，结果孩子长大了，要出国留学，要创业做生意，要花钱娶老婆，自己的退休金都被拗走了。人生太短，聪明太晚(2)

当自己有足够的能力善待自己时，就立刻去做，老年人有时候是无法做中年人或是青少年人可以做的事，年纪和健康就是一大因素。小孩子从小就告诉他，养你到高中，大学以后就要自立更生，要留学，创业，娶老婆，自己想办法，自己要留多一点钱，不要为了小孩子而活我们都老得太快却聪明得太迟，我的学长去年丧妻。这突如其来的事故，实在叫人难以接受，但是死亡的到来不总是如此。学长说他太太最希望他能送鲜花给他，但是他觉得太浪费，总推说等到下次再买，结果却是在她死后，用鲜花布置她的灵堂。这不是太蠢愚了吗？！等到......、等到.....，似乎我们所有的生命，都用在等待。人生太短，聪明太晚(3)

「等到我大学毕业以后，我就会如何如何」我们对自己说「等到我买房子以后！」「等我最小的孩子结婚之后！」「等我把这笔生意谈成之后！」「等到我死了以后」人人都很愿意牺牲当下，去换取未知的等待；牺牲今生今世的辛苦钱，去购买后世的安逸在台湾只要往有山的道路上走一走，就随处都可看到「农舍」变「精舍」，山坡地变灵塔，无非也是为了等到死后，能图个保障，不必再受苦。许多人认为必须等到某时或某事完成之后再采取行动。明天我就开始运动，明天我就会对他好一点，下星期我们就找时间出去走走；退休后，我们就要好好享受一下。人生太短，聪明太晚(4)

然而，生活总是一直变动，环境总是不可预知，现实生活中，各种突发状况总是层出不穷。身为一个医生，我所见过的死人，比一般人要来得多。这些人早上醒来时，原本预期过的是另一个平凡无奇的日子，没想到一个意料之外的事；交通意外、脑溢血、心脏病发作等等。剎那间生命的巨轮倾覆离轨，突然闯进一片黑暗之中。那么我们要如何面对生命呢？我们毋需等到生活完美无瑕，也毋需等到一切都平稳，想做什么，现在就可以开始做起。

一个人永远也无法预料未来，所以不要延缓想过的生活，不要吝于表达心中的话，

因为生命只在一瞬间。人生太短，聪明太晚(5)

记住！给活人送一朵鲜花，强过给死人送贵重的花圈，每个人的生命都有尽头，许多人经常在生命即将结束时，才发现自己还有很多事没有做，有许多话来不及说，这实在是人生最大的遗憾。别让自己徒留「为时已晚」的空余恨。逝者不可追，来者犹未卜，最珍贵、最需要实时掌握的「当下」，往往在这两者蹉跎间，转眼错失。人生太短，聪明太晚(6)

人生短暂飘忽，包得有一首小诗这样写：高天与原地，悠悠人生路；行行向何方，转眼即长暮。正是道尽了人生如寄，转眼即逝的惶恐。有许多事，在你还不懂得珍惜之前已成旧事；有许多人，在你还来不及用心之前

已成旧人。

遗憾的事一再发生，但过后再追悔「早知道如何如何」是没有用的，「那时候」已经过去，你追念的人也已走过了你。人生太短，聪明太晚(7)

一句瑞典格言说：「我们老得太快，却聪明得太迟。」不管你是否察觉，生命都一直在前进。人生并未售来回票，失去的便永远不再得到。将希望寄予「等到方便的时间才享受」人生太短，聪明太晚(8)

我们不知失去了多少可能的幸福不要再等待有一天你「可以松口气」，或是「麻烦都过去了」。生命中大部分的美好事物都是短暂易逝的，享受它们、品尝它们，

善待你周围的每一个人，别把时间浪费在等待所有难题的「完满结局」上。­找回迷失的生命­死亡也许是免费的─但是，却要付出生命的代价。­劝大家一句话：把握当下，莫等待。成功人生的十堂课

人生成功第1课

做一个终生学习的人，离开学校并不意味着学习就结束了。

学习可以成为一种生活方式，帮助你发挥最大的潜能。

我们从未停止学习，总会有新的，有趣的东西等待我们去发现。

学习新的技能可能让人感到有一点恐惧，但每当我们在个人学习上停滞不前时，我们都需要去学习新的东西。

积极地寻求支援和建议，突破停滞期。

103第四章生物产品代谢调控发酵机制附赠人生心语103第四章生物产品代谢调控发酵机制【大学课件】出品

版权归原作者所有!参加一些培训，进修，夜校－任何新的兴趣都将会有助于发展你的优势。

多看，多听，让你的头脑保持活跃。活到老，学到老。人生成功第2课

令自己感到沮丧的秘诀就是用空闲时间去烦恼自己是否快乐。所以不要费事去想它！摩拳擦掌干起来吧。你将热血沸腾，你会头脑清醒。很快，在你身体中的这种高涨的积极人生观将把烦恼从你的头脑中赶出去。

行动起来，忙碌起来。这是世界上最便宜的一种药，也是最好的一种。

人生成功第3课

在困境中寻找成功的希望

逆境是一所最好的学校。每一次失败，每一次打击，每一次损失，都蕴育着成功的萌芽，都教会我在下一次有更出色的表现。我再也不会逃避现实，也不会拒绝从以往的错误中获取经验，我不再因此而促成自己的失败。因为我知道，宝玉不经磨砺就不能发光，没有，我也不能完善自我。

现在我知道，灵魂倍受煎熬的时刻，也正是生命中最多选择与机会的时刻。任何事情的成败取决于我在寻求帮助时是抬起头还是低下头。无论何时，当我被可怕的失败击倒，在最初的阵痛过去之后，我都要想方设法将苦难变成好事。伟大的机遇就在这一刻闪现－这苦涩的根必将迎来满园芬芳！我将一直在困境中寻找成功的希望。人生成功第4课

没有人可以使你感到自卑

我选择自我感觉良好，这样我能更加开放地学习。如果人们给我负面的回应或是批评我做的事情，我不会认为他们所说的就表明我是一个“差劲的”人。我坚信自尊由我掌控，这让我毫无戒心地去听取别人的反馈，想看看是否有我可以学习的东西。

我们每天都有两种选择。我们可以感到自己很棒，也可以感到自己很差劲。难道有人会选择后者吗？

人生成功第5课

紧紧抓住梦想

我们每个人都有梦想。我们每个人都希望能发自内心地相信自已有一种特殊的天赋，相信自己能发挥重要的作用，相信自己能以一种特殊的方式感动他人，相信自己能够把世界变得更加美好。

在一生中，我们都曾经对自己渴望并追求的生活品质抱有憧憬。然而，对我们大多数人来说，这些憧憬在日常生活的成规和挫败中已经变得如此渺茫，以到于我们甚至不再努力去实现它们。对太多人来说，梦想已经远离，随之远离的还有塑造我们命运的意愿。很多人已经推动了坚定的信念，而正是坚定的信念为胜利者创造了优势。

我们所要做的就是重拴梦想，并实现梦想，让我们每个人都记住，并去运用深藏在自己身上的无限潜能。

人生成功第6课

毅力无法替代

世界上没有任何东西可以替代毅力。才干不可以，无所作为的能人十分普遍；天分不可以，碌碌无为的天才尽人皆知;教育不可以，受过良好教育的没落者更是随处可见。只要有毅力和决心，就是无所不能的。

毅力并不总是意味着永远坚持做同一件事。它意味着无论你做任何事情，你都要立刻全心投入，竭尽全力；它意味着先做艰苦的工作，再去期待随之而来的满足和回报。它意味着开心地工作，渴望更多的知识和进步。它意味着多打几个电话，多夏装几里路，多除草，早起床，意味着总是寻求更好的方式去做你在做的事情。毅力就是经历考验和过失的成功。人生成功第7课

驻足片刻闻花香

在现代生活的忙忙碌碌中，人们很少会停下来欣赏自然的美。

问问自己，你有多少次倾听过鸟儿的歌唱。你最近一次抬头仰望闪耀的星空又是在什么时候？

时光飞逝，人生苦短。不要忘记驻足闻闻花香。我们在急于谋生的过程中，往往忽视了我们生活的品质。多少次，你听见人们为这为那说“我忙死了。”多可惜啊！有一天，当他们真的找到时间能够驻足片刻闻花香时，可能已经太迟了。人生成功第8课

加入到微笑者和赞美者的行列来

当你对别人，别人也会对你报以，你自然会感觉很棒。即使他有对你报以，你也会感觉很棒，因为你认识到世界上最贫穷的人就是从不微笑的人，当你对那个人微笑，你立刻变得更加富有。

赞美也是这个道理。当你真诚地毛病抑或恭维一个人时，他将立刻受益，更喜欢自己。当你让别人感觉更好时，你自己也会感觉更好。

人生成功第9课让自己快乐。

调查表明，我们当中70%的人在生活中时间有临床性的抑郁现象。

如今我们有这么多的机遇，为什么我们还这么不快乐呢？

人们尝试各种东西：金钱，权利，事业，婚姻，离婚，酒精，摇滚甚至毒品，但我们大多数人只是想要得到一样东西－快乐。

快乐是人的一种自然的身心状态；我们只要去相信快乐，让自己感受快乐。

要宣称：我应当得到快乐。说出来，唱出来，喊出来。

优先考虑快乐，让快乐成为你最重要的事情。

对你所拥有的一切抱以感激之情吧。人生成功第10课我拥有无与伦比的想象力

现在我将通过这种神奇的力量得到我想要的。如果我害怕发表演讲，我就想象自己在公众场合无所畏惧，充满信心；如果我在病魔的煎熬，我就想象我以前健康的样子；如果我感到贫穷，我就想象我将要富有。

现在我明白了：人类惟一的限制就是想象力。我之所以没有成功，原因就在于我不知道如何使用我的想象力。现在，我精通这个技巧，我将从中受益。最大的回报将是成功和愈加快乐。你会管理时间吗?

如何让自己一天的时间不止24小时呢?这里有一些总结:你会管理时间吗?

（1）1.对目标、任务、会议等事件分别按优先级进行排序；2.从优先级最高的事物着手；3.和拖延做斗争，如果事情重要，从现在开始做；4.把大的、艰难的任务细分为小的、容易的部分；5.为自己创造一小时的宁静，哪怕这需要很强的意志力，或者有时不起作用；你会管理时间吗?

（2）6.找到一个隐蔽的地方，如图书馆或空闲的办公室；7.当你有重要的事情要处理时，学会对别人说“不”；8.学会委派别人做事；9.归纳相似的事情，把它们放在一起处理；10.减少例行事务：它们不值得花费过多时间。缩短低价值的事件。抛开没有价值的信件和文书工作。委派别人完成、减少或推迟优先级很低的任务；你会管理时间吗?

（3）11.避免完美主义。记住80/20定律；12.避免做出过多许诺。对你在有限时间内能完成的工作持现实态度；13.不要把时间表排得满满的，为自己留下一定机动时间应付突发事件；14.设置时间限制。例如，做某些决定时，不应超过3分钟；15.聚精会神地做手头的事情；你会管理时间吗?

（4）16.处理重要事情时，使用大块的时间；17.迅速处理困难的事情，等待和拖延不会使它们变容易；18.文书工作争取只处理一次；19.在行动以前，彻底地思索整件工作；20.第一次就做好。成功是一种习惯，习惯是需要培养的

成功是一种习惯，习惯是需要培养的（1）

1：找方法，不找借口。2：遇到挫折时，对自己说“太棒了”。3：不说消极的话，不落入消极的情绪，一旦出现立即正面处理。4：随时用零碎时间做零碎的事。5：写下来，不要太依靠脑袋记忆。6：随时记录灵感。7：守时8：把重要的观念方法写下来，并随时提醒自己。9：走路时，比平时快30%，肢体语言要健康，有力，不懒惰，不萎靡。10：每天自我反省一次。11：每天坚持一次运动。12：开会坐在前排。13：微笑。14：说话时，声音有力。15：说话之前，先考虑对方的感受16：每天有意识或真诚地赞美别人3次17:不要用训斥指责的口吻跟别人说话.18:每天做一件分外事.19:节俭.20:恪守诚信,说到做到.成功是一种习惯，习惯是需要培养的（2）“好的习惯让人立于不败之地，坏的习惯则让人从成功的宝座上跌下来”。拿破仑希尔认为，

104第四章生物产品代谢调控发酵机制【大学课件】出品

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联系QQ：910670854保罗·盖蒂的这句话很有道理。有一段时期，盖蒂抽烟抽得很凶。一天，他去法国度假的途中，在一个小旅馆投宿。晚上下起了大雨，地面特别泥泞，开了好几个钟头的车之后，盖蒂实在是累极了。吃过晚饭，他就回到自己的房间里，睡着了。但是清晨时分盖蒂突然醒了过来，他很想抽支烟，于是他就打开了灯，很自然的伸手去摸他一般都会放在床头的烟，但是没有。他下了床，到衣服的口袋里去找，也没有。于是他又在行李袋里找，结果他又一次失望了。他知道这个时候旅馆的酒吧和餐厅早就关门了。他想，这个时候把不耐烦的门房叫过来，实在是不可能。现在他唯一能得到香烟的方法就是穿好衣服，到火车站去，但是那还在6条街之外呢。成功是一种习惯，习惯是需要培养的（3）看来情形并不乐观，外面还下着雨。他的汽车也停在离旅馆还有一段距离的车房里。而且，在他住店的时候，别人也提醒过他了。车房的门是午夜关，第二天早上6点才开门，现在能叫到出租车的机率也相当于零。显然，要是他真的迫切地需要一支烟，那么他只能在雨里走到黑暗中。抽烟的欲望不断地折磨着他。于是，他下了床，脱下睡衣，穿好衣服，准备出去。正在他伸手拿雨衣的时候，他突然笑了起来，笑自己傻。他突然觉得，自己的行为多荒唐可笑。盖蒂站在那里，心里不停地想着，一个所谓的知识分子，一个商人，一个认为自己有足够的智慧可以对别人下命令的人，居然在三更半夜要离开舒适的旅馆，冒着大雨走上好几条街去买香烟。盖蒂也是生平第一次注意到，他现在早就养成了一个坏习惯，那就是为了一个不好的习惯，他可以放弃极大的舒适。看来，这个习惯对他并没有什么好处，于是，他的头脑立刻就清醒了过来，很快他就做出了决定。成功是一种习惯，习惯是需要培养的（4）他已经决定好了，就走到桌子旁边把那个烟盒团起来扔出去，然后重新换上睡衣，回到舒服的床上。心里怀着一种解脱，甚至是一种胜利的感觉，很满足地关上灯，合上了眼睛。在窗外的雨声里，他进入了一个从来没有过的深沉的睡眠。自从那个晚上之后，他再也没抽过一根烟，也再没有想过要抽烟。盖蒂说，他并不是想用这件事来指责那些有抽烟习惯的人。但是他经常回忆那天晚上的情形，他只是为了表示，按照他当时的情况，他差点被一种恶习俘虏。经常做一件事就会形成习惯，而习惯的力量是难以抗拒的。但是人类还有一种潜藏的缓冲能力，也不容小觑。既然人有可能养成一种习惯，那肯定他也有能力改掉这种习惯。还有些人说，奇怪的是，养成好习惯很难，但是一个坏习惯却在不知不觉中就已经形成了。但是，事实并非如此，这还要看一个人的毅力。不管怎么说，习惯终归是习惯，并没有合理的理论说坏习惯要比好习惯更容易养成。成功是一种习惯，习惯是需要培养的（5）动作敏捷或迟缓只是个时间的问题，一个人要么习惯了准时，要么他就会习惯迟到。一个准时的人，总会体会到这种习惯给他带来的好处，无论是约会，会议，还是什么别的方面的承诺。如果别人请你吃饭，你迟到了，那就会给主人和其他的客人造成不便。你可能会因此而变得很不受欢迎，以后人家都不会再请你吃饭了。拿破仑希尔认为，对商人来说，准时是一项特别宝贵的资产。俗话说得好，“时间就是金钱”，这句话永远是正确的，现在这个时代里，这个原则比以前更加重要。现代企业的步调是一日千里，分秒必争。主管和高级职员的每日安排都是满满的，因为他们可没有多余的时间可以浪费，就像生产线不能耽搁一样。守信对生意人来说，是个难得的品德，最有希望成功的商人和公司，他们一定是准时接受定单，准时回复并交货，提供服务，准时付款，准时还债。如果等时间已过去了，订货还没到，那顾客下次可能就不找你了。成功是一种习惯，习惯是需要培养的（6）节俭是另外一种可以养成的习惯，对天生节俭的人来说，这个习惯给他带来的成功的机会要比别人多。而习惯了节俭的人，他只知道在乎时就要注意节减开支和成本。受用一生的教诲：职场10只魔戒N条箴言

第１只魔戒第一条箴言：习惯仿佛像一根缆绳，我们每天给它缠上一股新索，要不了多久，它就会变得牢不可破。第二条箴言：人类所有优点都要变成习惯才有价值，即使"爱"这样一个永恒的主题，你也必须通过不断的修炼，变成你的习惯，才真正会化为你的行动。第三条箴言：很多好的观念、原则，我们"知道"是一回事，但知道了是否能"做到"是另一码事。这中间必须架起一座桥，这桥便是习惯。第四条箴言：科学家研究发现，一个习惯的养成需要２１天的时间，这２１天是个平均数，但习惯一旦养成就将终生受用。第五条箴言：任何一个习惯的培养都不会是轻而易举的，因此一定要遵循循序渐进、由浅入深、由近及远、由渐变到突变的原则。第２只魔戒第一条箴言：人生来是简单的，和文明打交道之后变得复杂了，陷入了某种复杂的旋涡中无法自拔，这些羁绊使人忘记人性的最终追求是平静、简单、自由。

第二条箴言：不经过复杂的简单是一种苍白，我曾经很人为地把金钱放在一边它却不安分，但今天当我驾驭了金钱，它就能很安分地呆在一边。第三条箴言：要锻炼一个人的财商，让他具有富人心态，首先他确实要学会放弃，同时也要学会克服，要学会走出很多障碍和阴影。第四条箴言：财商教育的根本目的是让人们获得自由，增加收入、减少财务问题的初衷是减少人们在金钱上的虚荣心和攀比风。第五条箴言：财商教育要解决人类面对金钱的两大问题：恐惧与贪婪。而为了生活稳定这个假象，人们常常沦为金钱的奴隶。第六条箴言：对于金钱，不是说你要成为它的主人，而是要做到与之和谐、平等，因为它反映的是你自己，所以对它要多一分宽容。第３只魔戒第一条箴言：成功的实质就是获得自由度，就是当你想当的人，做你想做的事，去你想去的地方，说你想说的话。第二条箴言：世上没有懒惰的人，只有没有目标的人。世界上最贫穷的人就是没有目标的人，因为连"梦想"都没有，还会拥有什么？第三条箴言：只有明确而具体的目标才可衡量，而只有可衡量的目标才可能达到。第四条箴言：付出就表示富有，索取就是贫穷，快行动起来，用行动表现你的"富有"。第五条箴言：心态、目标、时间管理三者的集中点就是在行动上，三者的表现特征也是"行动"。它们共同形成"知行合一"的统一体。第４只魔戒第一条箴言：人的一生就是不断地闯入一个又一个圈子并不断争取承认的过程。第二条箴言：在西方社会，特别是在北美，只有那些树立自我推销和成功意识的人，才有可能赢得机会与成功。第三条箴言：国际化人才不是一个地理意义上的概念，而是文化、心理层面的概念。是否是国际化人才取决于一个人的涵养、知识构成和思维模式。第四条箴言：创业的失败率是非常高的，在美国，每年有几十万人开公司，每年也有几十万家公司倒闭，所以创业只适合一部分人。第五条箴言：我时常摸着跳动的心口，数着那一下一下的脉搏，计算着我的生命长河究竟能卷起多少浪花。我要让短暂的生命，爆发出火花。第六条箴言：命运不是机遇，而是一种选择。命运从来都不是一种可以等到的东西，而是一件需要去完成的事情。第５只魔戒第一条箴言：不管你对成功如何定义，积极总是有价值的。积极不一定成功，但消极肯定失败。第二条箴言：成功学的最大的特征就是强调标准化和量化，把认为说不清楚、不可琢磨的东西都变成可琢磨、可操作的东西。第三条箴言：成功绝对有捷径，当然它的捷径绝对不是整个过程，这个捷径告诉我们的是必须按照最