DNA片段分析常见实验故障排除

片段分析常见实验故障排除肖怀东FieldApplicationSpecialistTel:8008208982;4008208982E-mail:CNAPMsupport@lifetech.DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第1页!概要提供线索的软件界面实验注意事项DNA提取重要性常见问题DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第2页!提供线索的软件页面DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第3页!信息(Info)DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第4页!电泳参数(EPT)DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第5页!SizeMatchEditorDNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第6页!杂峰出现的可能原因污染的原因电泳系统污染样品污染PCR反应的原因DNA用量DNA质量操作不精确软件设置的原因阈值设置过低试剂的原因试剂、缓冲液、胶保存不当DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第7页!甲酰胺推荐使用Hi-DiFormamide，避免电进样时的离子竞争甲酰胺容易氧化，小管分装，-

20C保存DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第8页!POP胶出现尿素结晶可以不作处理直接使用，不影响数据质量。建议的方法：让瓶子在室温下升温，逐渐溶解。切勿让温度达到或超过50C，这会导致POP胶的变质。尽量减少胶处于室温的时间。DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第9页!DNA提取重要性DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第10页!安全；快速；经济；易于操作；避免交叉污染；可靠和可重复；适用于不同的样本载体；得到高质量、高纯度DNA；可自动化操作。DNA提取技术应该满足下列要求DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第11页!DNA提取过程中常见问题1——

抑制物过多DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第12页!DNA提取过程中常见问题2——交叉污染DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第13页!常见问题DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第14页!2荧光污染DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第15页!4模板过量(Overamplification)DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第16页!6拔起峰(PullUp)DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第17页!8弱扩增(Weakamplification)DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第18页!10出峰延迟DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第19页!11微突变(Microvariation)DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第20页!13OL太多DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第21页!应用MiniFiler试剂盒优势：扩增片段小，可显著提高困难模板的分析成功率。DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第22页!样品图谱(SamplesPlot)DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第23页!AnalysisStartPoint

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Anywhereafter450peak**原始数据（RawData）DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第24页!分子量内标（SizingQuality）DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第25页!实验注意事项DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第26页!杂峰出现的可能原因及解决方案污染的原因电泳系统污染：更换污染的水、缓冲液、试剂……样品污染：避免交叉污染，勤更换用具……

PCR反应的原因DNA用量：避免加入过多DNA模板操作不精DNA质量：使用高纯度DNA，OD260/OD280>1.6操作部正确：对怀疑结果进行重复实验软件设置的原因

-阈值设置过低：建议设置为平均峰高的10%试剂的原因试剂、缓冲液、胶保存不当：按推荐的方法保存试剂DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第27页!BufferBuffer：新鲜配制，不要使用过期的buffer。(3500为预装好的）DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第28页!注意保养毛细管。不能让毛细管的两端长时间暴露在空气中。干燥使毛细管内的胶凝固，胶凝固导致毛细管报废，无法逆转。不走电泳的时候，注意仪器上的缓冲液不要干涸；取下来的时候，毛细管两端浸在水或者缓冲液里。注意样品纯度。DNA越纯，毛细管寿命越长。蛋白质等成分长期进入毛细管，会滞留在管内阻塞管腔，减少毛细管寿命。毛细管DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第29页!DNA纯度对最终结果的质量有重要影响；在给定样品时，良好的提取方案可以最大量地得到高质量DNA；不同的样本类型会影响到DNA提取方案的选择；所有应用于法庭DNA科学的提取方案在使用前都应得到充分的优化和认证。DNA提取在法医DNA工作中的重要性DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第30页!Chelex贮存液的pH值Chelex贮存液的理想pH是10-11如果pH<9PCR结果很差

PCR产率很低建议：现配现用、少量配制，迅速用完DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第31页!无法得到完整的STR分型；可能产生错的STR分型；降低毛细管的寿命；解决方案：选择适合的DNA提取方法纯化DNA使用IDPlus、MiniFiler试剂盒DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第32页!无法得到准确的STR分型可能产生错的STR分型解决方案：经常更换常用试剂如水、chelex、甲酰胺等；避免移液器、镊子等污染；避免台面污染；DNA单向流动。DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第33页!1宽峰(BroadPeak)DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第34页!3钉子峰(Spike)DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第35页!5分裂峰(Splitpeaks)DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第36页!7弱扩增(Weakamplification)DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第37页!9无扩增(Noamplification)DNA片段分析常见实验故障排除共42页，您现在浏览的是第38页!DNA片段分析常见实验故障排除共42页，