土壤中分解尿素的细菌的分离与计数- 高二生物人教版选修1

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数尿素肥料尿素分解菌硝酸盐巴氏芽孢杆菌尿素小球菌幽门螺旋杆菌尿素分解菌1、直接原因：能合成脲酶。CO(NH2)2脲酶+H2O+CO2NH33、代谢类型：异养需氧型2、根本原因：具有合成脲酶相关的基因（一）筛选菌株：

DNA多聚酶链式反应（PCR）是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，而此项技术的实施必须使用耐高温（93℃）的DNA聚合酶。or?水生栖热菌TaqTaq酶

因为热泉温度为70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。2、实验室中微生物的筛选原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。1.启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境要求，到相应的环境中去寻找。石油分解菌尿素分解菌纤维素分解菌3.选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4.7H2O2.1gNa2HPO41.4gKH2PO4是否接种

结果

4.怎样证明此培养基具有选择性呢？以尿素为唯一氮源的培养基牛肉膏蛋白胨培养基

是分离尿素细菌判断该培养基有无选择性实验组对照组培养基类型

目的只生长尿素细菌生长多种微生物

是1、显微镜直接计数法：工具：血细胞计数板㈡.统计菌株数目：不能区分死菌与活菌；缺点：误差：统计的菌落数一般比活菌的实际数目高2、稀释涂布平板法。

原理：

1个菌落←1个活菌①选择菌落数在30～300的平板上计数。②需培养计算出三个或三个以上的平板菌落,求平均数。③统计的菌株数往往比活菌的实际数目低。注意事项：㈡.统计菌株数目：某同学在稀释倍数为106

的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每毫升样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B每克样品中的菌株数=（C÷V）×MC代表某一稀释度下平板上生长的______,V代表涂布平板时所用的_____________,M代表_________。平均菌落数稀释液的体积稀释倍数计算公式：样品稀释涂布平板微生物的培养与观察

菌落计数二、实验设计土壤取样制备培养基（一）土壤取样从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。“微生物的天然培养基”数量最大、种类最多大约70%—90%是细菌（二）制备培养基制备选择培养基（尿素为唯一氮源）制备牛肉膏蛋白胨培养基

作为对照，用来判断是否起到了选择作用。思考？为什么还要制备牛肉膏蛋白胨培养基？1.应在火焰旁称取土壤10g。2.在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行（三）样品的稀释◆分离不同的微生物采用不同的稀释度稀释倍数目的细菌104、105、106保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板放线菌103、104、105真菌102、103、104不同微生物在土壤中含量不同原因：（四）微生物的培养与观察每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌：30～37℃培养1～2d放线菌：25～28℃培养5～7d霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。菌落的特征：形状、大小、隆起程度和颜色等。菌落1.原理：

NH3使培养基碱性增强，PH升高，指示剂变红（五）尿素分解菌的鉴定2.鉴别培养基：根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同类别的微生物。实例：在做本课题实验时，A同学平板上菌落数与其他同学明显不同，试分析A同学的实验结果出现的原因？150A同学50B同学53C同学56D同学原因：1.培养基被杂菌污染；2.操作有问题；3.选择的土样不同。？取A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为对照。以证明培养基是否受到污染。如无菌落，说明培养基没有污染，如有菌落，说明培养基受到污染。实例：在做本课题实验时，A同学平板上菌落数与其他同学明显不同，试分析A同学的实验结果出现的原因？150A同学50B同学53C同学56D同学原因：1.2.操作有问题；3.选择的土样不同。？取与A同学相同的土样进行实验，与A的实验结果进行对照。如与A同学的菌落数相似，说明土样的