药物分析复习总结

药物分析复习总结巴比妥类药物巴比妥类药物基本性质：弱酸性，易水解易与重金属离子反应，具有紫外特征吸收（5,5-取代巴比妥类药物在酸性溶液中无紫外吸收，而硫代巴比妥在酸性和碱性溶液中都有明显的紫外吸收）。

丙二酰脲类反应：与银盐的反应。巴比妥药物在碳酸钠溶液中振摇使溶，滤液中逐滴加入硝酸银试液，即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解，前者的白色沉淀为硝酸银溶液局部过浓，呆滞出现局部巴比妥二银盐浑浊，但振摇后，溶液中为可溶性的一银盐，继续滴加硝酸银过量，则产生难溶性的巴比妥二银盐沉淀，不再溶解。

与铜盐的反应。巴比妥类药物在吡啶溶液中与铜吡啶试液作用，生成配位化合物，显紫色或生成紫色沉淀；硫喷妥钠药物显绿色。

熔点测定：苯巴比妥钠的鉴别。溶于水加稍过量稀盐酸可析出苯巴比妥结晶，105℃干燥后测定熔点应为174～178℃。

司可巴比妥钠的鉴别。加水溶解后加稀醋酸煮沸，放冷，析出结晶，滤过，70℃干燥后测定熔点约为97℃。

巴比妥类药物钠盐的鉴别：焰色反应。火焰鲜黄色。

与醋酸氧铀锌反应。取巴比妥类钠盐药物的重型溶液，加入醋酸氧铀锌试液，即生成黄色沉淀。

取代基或元素的反应：1.芳环取代基的反应

与亚硝酸钠-硫酸的反应。苯巴比妥含有苯环取代基，可与亚硝酸钠-硫酸反应，生成橙黄色产物，并随即转成橙红色。

与甲醛-硫酸的反应。苯巴比妥与甲醛-硫酸反应，生成玫瑰红色环。其它无苯基取代的巴比妥类药物无此反应。

2.不饱和烃取代基的反应。司可巴比妥钠结构中含丙烯基，可与碘试液发生加成反应，使碘试液棕黄色消失。

3.硫元素的反应。硫喷妥钠分子结构中含有硫元素，在氢氧化钠试液中可与铅离子反应，生成白色沉淀；加热后，沉淀转变为黑色硫化铅。

苯巴比妥中特殊杂质：酸度，乙醇溶液的澄清度，中性或碱性物质。

苯巴比妥片溶出度测定用桨法，异戊巴比妥片溶出度测定用转篮法。

苯巴比妥的含量测定：银量法，采用银-玻璃电极系统，硝酸银电位滴定法，每1ml硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于23.22mg的C12H12N2O3。

司可巴比妥钠含量测定：溴量法。分子结构中的丙烯基可与溴发生加成反应。测定原料和胶囊。过量的溴与碘化钾作用生成碘，用硫代硫酸钠液滴定。

每1ml溴滴定液（0.1mol/L）相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。

注射用硫喷妥钠的含量测定：紫外分光光度法。用对照品比较。每1mg的硫喷妥相当于1.091mg的C11H19N2NaO2S（硫喷妥钠）。胺类药物盐酸普鲁卡因的化学性质：

⑴芳伯胺基特性，可显重氮化-偶合反应，与芳醛缩合反应，易氧化变色等。

⑵酯键易水解特性。水解产物主要为对氨基苯甲酸（PABA）。

⑶游离碱难溶于水且碱性弱。

对乙酰氨基酚的化学性质：

⑴水解产物呈芳伯氨基特性。药物结构中有酰胺基，在酸性溶液中易水解得具有芳伯氨基的产物。因此药物的水解产物可具有芳伯氨基特性反应。

⑵水解产物易酯化。对乙酰氨基酚水解后产生醋酸，可在硫酸介质中与乙醇反应，发出醋酸乙酯的香味。

⑶与三氯化铁发生呈色反应。对乙酰氨基酚具酚羟基，可与三氯化铁发生呈色反应。

盐酸普鲁卡因的鉴别：重氮化-偶合反应。颜色：橙红色到猩红色。

水解产物的反应。盐酸普鲁卡因具对氨基苯甲酸酯的结构，遇氢氧化钠试液即析出白色沉淀，加热变为油状物（普鲁卡因），继续加热可水解，产生挥发性二乙氨基乙醇，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色，同时可生成可溶于水的对氨基苯甲酸钠，放冷，加盐酸酸化，即生成对氨基苯甲酸的白色沉淀。

红外吸收光谱。

对乙酰氨基酚鉴别：重氮化-偶合反应。水解后反应，颜色：红色。

三氯化铁反应。对乙酰氨基酚的水溶液加三氯化铁试液，即显蓝紫色。

对乙酰氨基酚的杂质检查：除了检查酸度、氯化物、硫酸盐、重金属、水分和炽灼残渣外，还需检查以下项目：

1.乙醇溶液的澄清度与颜色。

2.有关物质。薄层色谱检查对氯乙酰苯胺。

3.对氨基酚。为芳香第一胺，能与亚硝基铁氰化钠在碱性条件下生成蓝色配位化合物，而药物对乙酰氨基酚无此呈色反。

（对氨基酚对照溶液不稳定，应临用前新鲜配制）

盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查

采用硅胶H-CMC薄层色谱法检查。对氨基苯甲酸的最低检出量为0.01μg。

除主斑点盐酸普鲁卡因和分解产物对氨基苯甲酸外，还有一个杂质斑点，确证为苯胺，最低检出量为0.01μg。

含量测定方法：亚硝酸钠滴定法。具有芳伯氨基的药物（如盐酸普鲁卡因及其片剂）乙基水解后又芳伯氨基的药物（如对乙酰氨基酚）均可用亚硝酸钠滴定法测定含量。

1.原理：芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐。永停法指示终点。2.主要测定条件：

加入适量溴化钾加速反应（加快重氮化反应速度）。

加入强酸加速反应（使重氮化反应速度加快；重氮盐在酸性溶液中稳定；防止偶氮氨基化合物的生成）。一般加入盐酸的量按芳胺与酸的摩尔比1：2.5～6。

室温（10～30℃）条件下滴定。

滴定管尖端插入液面下滴定。为了避免滴定过程中亚硝酸挥发和分解，滴定时将滴定管尖端插入液面下约2/3处，一次将大部分亚硝酸钠滴定液在搅拌下迅速加入，使其尽快反应，任何将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，再缓缓滴定。在最后一滴加入后，搅拌1～5min，再确定终点是否真正到达。这样可以缩短滴定时间，也不影响结果。

3.终点指示方法：永停法。

苯骈二氮卓类药物结构：氮原子具有碱性，可以和某些有机碱沉淀剂反应产生沉淀，还可用非水溶液滴定法测定含量。氯氮卓和地西泮C7上均有氯离子取代。

鉴别：沉淀反应。氯氮卓和地西泮的二氮杂卓环上氮原子有碱性，在盐酸酸性溶液中与碘化铋钾试液反应产生橙色沉淀。药典采用此方法鉴别氯氮卓。

水解后的重氮化-偶合反应。在酸性条件下加热，氯氮卓C2上的甲氨基水解为羰基，进一步水解，生成二苯甲酮衍生物，具有芳伯氨基，与亚硝酸钠溶液和碱性β-萘酚试液发生重氮化-偶合反应，产生橙红色沉淀。药典采用此法鉴别氯氮卓。地西泮无此反应。

硫酸-荧光反应。苯骈二氮卓类药物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，呈现出不同颜色的荧光，地西泮：黄绿色荧光；氯氮卓：黄色荧光。

紫外分光光度法。

氯元素的鉴别。氯氮卓和地西泮C7上均有氯原子取代。首先用氧瓶燃烧法破坏，使有机结合的氯气转化为Cl-，用5%的氢氧化钠溶液吸收，加硝酸酸化后，显氯化物的鉴别反应。

地西泮的有关物质：薄层色谱，检查原料药和片剂中的有关物质，主要杂质为去甲基安定和2-甲氨基-5-氯二苯酮。

注射剂主要检查2-甲氨基-5-氯二苯酮等分解产物。高效液相色谱法。

含量测定：非水溶液滴定法。地西泮：溶剂：冰醋酸和醋酐，指示剂：结晶紫，滴定液：高氯酸。至溶液显绿色。

氯氮卓：溶剂：冰醋酸。至溶液显蓝色为终点。

紫外分光光度法。地西泮片和氯氮卓片均采用紫外分光光度法测定含量。

溶出度：紫外分光光度法。

高效液相色谱法。地西泮注射剂中含有苯甲酸、苯甲酸钠等附加剂，干扰紫外分光光度法测定，所以采用高效液相色谱法。内标为萘。醇醛醚酮乙醇的鉴别：碘仿反应。

甘油的鉴别：丙烯醛反应。甘油数滴与硫酸氢钾0.5g共热，即发生丙烯醛的刺激性臭气。

二巯丙醇的鉴别：丙烯醛反应。二巯丙醇与碳酸钠共热，发生丙烯醛的刺激性臭气。

沉淀反应。二巯丙醇与醋酸铅试液作用，生成硫醇铅盐黄色沉淀。

二巯丙醇的含量测定：二巯丙醇结构中巯基具有强还原性，可采用碘量法直接测定含量。

每1ml的碘滴定液（0.1mol/L）相当于6.211mg的二巯丙醇。

山梨醇的含量测定：高碘酸钠（钾）法。对具有n个相邻羟基的化合物，当以HIO4氧化时，将消耗n-1个摩尔的HIO4。

麻醉乙醚的检查项目：酸度：主要控制乙醚氧化产物醋酸的量。

醛类

过氧化物

异臭

不挥发物

甲醛的鉴别：甲醛能还原氨制硝酸银溶液，使析出金属银。

水合氯醛的鉴别：水合氯醛加水溶解后，加入碱试液，溶液显浑浊，加温后形成澄明的两液

层，并产生氯仿的臭气。

乌洛托品的鉴别：本品加稀酸，即分解生成甲醛和铵盐，放出甲醛的特臭，遇氨制硝酸银试纸生成金属银，显黑色；溶液加碱试液碱化后产生氨臭，能使润湿的红色石蕊试纸变为蓝色。

甲醛的含量测定：氧化后剩余滴定法。

水合氯醛的含量测定：碱水解后银量法（Mohr法）

取本品约4g，精密称定，加水10ml溶解后，精密加氢氧化钠滴定液（1mol/L）30ml，摇匀，静置2min，加酚酞指示液数滴，用硫酸滴定液（0.5mol/L）滴定至红色消失，再加铬酸钾指示液6滴，用硝酸银滴定液（0.1mol/L）滴定。自氢氧化钠滴定液（1mol/L）的体积（ml）中减去消耗硫酸滴定液（0.5mol/L）的体积（ml），再减去消耗硝酸银滴定液（0.1mol/L）体积（ml）的2/15。

每1ml的氢氧化钠滴定液（1mol/L）相当于165.4mg的C2H3Cl3O2。

（30ml-VH2SO4-2/15VAgNO3）×0.1654×100

乌洛托品的含量测定：酸水解后剩余滴定法。

乌洛托品的定量分析是利用本品在过量酸中加热水解后铵盐和甲醛，继续加热将甲醛驱尽后，剩余的酸再以碱滴定的方法。

扑米酮的鉴别：分解产物的反应。本品遇酸分解，生成甲醛，再与变色酸于水浴共热，使溶液显紫色。后者为甲醛专属性较高的显色反应。

本品与无水碳酸钠混合后，加热灼烧，即分解生产氨气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色。

红外吸收光谱。

富马酸酮替芬的含量测定：非水溶液滴定法。溶剂：冰醋酸。指示液：结晶紫。滴定液：高氯酸。滴定至显蓝色。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于42.55mg的C19H19NOS.C4H4O4。

吡喹酮的含量测定：高效液相色谱法。内标：α-细辛醚。复习总结：芳酸及其酯类.酚羟基的鉴别试验：三氯化铁反应。具有酚羟基的药物与三氯化铁试液反应，生成紫堇色铁配位化合物。

芳伯氨基的鉴别试验：重氮化-偶合反应。在酸性溶液中，与亚硝酸钠试液进行重氮化反应，生成的重氮盐与碱性β-萘酚偶合产生橙红色沉淀。

阿司匹林的鉴别：三氯化铁反应。加热水解后与三氯化铁反应，显紫色堇色。

水解反应。阿司匹林与碳酸钠试液加热水解，得水杨酸钠及醋酸钠，加过量的稀硫酸酸化后，水杨酸白色沉淀析出，并产生醋酸的臭气。

红外吸收光谱。

对氨基水杨酸的鉴别：三氯化铁反应。加稀盐酸呈酸性后反应，呈紫红色。

重氮化-偶合反应。见上面。

红外吸收光谱。

阿司匹林的检查项目：除“炽灼残渣”和“重金属”外，还有以下特殊检查项目。

溶液的澄清度：检查碳酸钠试液中不溶物。杂质不溶于碳酸钠溶液，而阿司匹林可溶，可控制杂质。

水杨酸：原料限量0.1%，片剂限量0.3%，肠溶片限量1.5%，栓剂限量1.0%（高效液相色谱法）。

易炭化物

阿司匹林的含量测定：

原料药：直接滴定法。以水为溶剂。指示剂：酚酞。

片剂和肠溶片：两步滴定法。第一步：中和。第二步：水解与测定。

计算：供试品中阿司匹林的含量，由水解时消耗的碱量计算。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于18.02mg的C9H8O4。

栓剂：高效液相色谱法。

对氨基水杨酸钠中的特殊杂质：间氨基酚。

含量测定：亚硝酸钠滴定法（重氮化法）。永停法指示终点。

苯甲酸钠的鉴别：三氯化铁反应。苯甲酸的碱性水溶液或苯甲酸钠的中性溶液，与三氯化铁试液生成碱式苯甲酸铁盐的赭色沉淀。

分解产物的反应。苯甲酸盐可分解成苯甲酸升华物，分解产物可用于鉴别。

苯甲酸钠的含量测定：双相滴定法。指示剂：甲基橙。滴定液：盐酸（0.5mol/L）。有机溶剂：乙醚。

每1ml的盐酸滴定液（0.5mol/L）相当于72.06mg的C7H5NaO2。

氯贝丁酯的鉴别：羟肟酸铁反应。氯贝丁酯分子中具有酯结构，与盐酸羟胺及三氯化铁作用，形成有色的异羟肟酸铁，显紫色。

氯贝丁酯的杂质检查：酸度、对氯酚（限度为0.0025%）、挥发性杂质。

氯贝丁酯的含量测定：两步滴定法。加入过量的氢氧化钠滴定液（0.5mol/L），加热回流水解，生成对氯苯氧异丁酸钠和乙醇，成语的氢氧化钠用盐酸滴定液（0.5mol/L）滴定，并将滴定的结构用空白试验校正。吩噻嗪类药物结构：抗精神病药，具有硫氮杂蒽母核。

鉴别：紫外分光光度法。

氧化反应。盐酸氯丙嗪鉴别：加硝酸显红色，渐变淡黄色。

盐酸异丙嗪鉴别：加硫酸，显樱桃红色，放置，色渐变深。

加硝酸生成红色沉淀，加热，沉淀溶解，变为橙黄色。

Cl-的反应。加硝酸使成酸性后，加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀，分离，沉淀加氨试液即溶解，再加硝酸，沉淀复出现。

加等量二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热，发生的氯气能使湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。

含量测定：非水溶液滴定法。吩噻嗪类药物母核上氮原子的碱性极弱，不能被滴定，侧链上脂氨基碱性较强，可以用非水溶液滴定法滴定。一般用冰醋酸或醋酐为溶剂，用高氯酸滴定液滴定，由于为盐酸盐，所以滴定前应加入一定量醋酸汞试液，使生成难离解的氯气化汞，将盐酸盐转化为醋酸盐，再进行滴定。

盐酸异丙嗪用冰醋酸作溶剂，每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于32.09mg的C17H20N2S.HCl。

盐酸氯丙嗪采用醋酐作溶剂，橙黄Ⅳ作指示剂，用高氯酸滴定液滴定。

紫外分光光度法。本类药物的制剂（如片剂、注射剂）由于辅料有干扰，不能采用非水溶液滴定法滴定，所有一般用紫外分光光度法测定含量。

两个药物的注射剂均加有维生素C作用抗氧化剂，维生素C在243nm处有最大吸收，若在249nm处测定药物含量，则维生素C有干扰。所以盐酸氯丙嗪和盐酸异丙嗪注射液分别在第三个吸收峰，即306nm和299nm的波长处测定，虽然吸收系数略低，但避开了抗氧化剂维生素C的干扰。磺胺类药物结构：具有芳氨基和磺酰胺基，多为两性化合物，药物具有一定酸性。磺胺嘧啶和磺胺甲噁唑的N4上无取代基，为芳伯氨基。磺胺嘧啶和磺胺甲噁唑N1上的含氮杂环，具有碱性，可以和有机碱沉淀剂反应生成沉淀。

鉴别：1.芳伯氨基的反应

重氮化-偶合反应。磺胺嘧啶和磺胺甲噁唑都有此反应。

与芳醛的缩合反应。本类药物的芳伯氨基可和芳醛（如对二甲氨基苯甲醛、香草醛、水杨醛等）在酸性溶液中缩合为有色的希夫氏碱。

如与对二甲氨基苯甲醛在酸性溶液中生成黄色希夫氏碱。

2.与硫酸铜的成盐反应。本类药物磺酰胺基上的氢原子比较活泼，具有酸性，可以和金属离子（如Cu2+、Ag+、Co2+等）生成难溶性沉淀。

磺胺甲噁唑：草绿色。磺胺嘧啶：黄绿色→紫色。

3.N1取代基的反应。磺胺嘧啶和磺胺甲噁唑N1上均为含氮杂环取代，有一定碱性，可以和有机碱沉淀剂生成沉淀。如磺胺嘧啶可和碘化铋钾试液、碘-碘化钾试液生成红棕色沉淀。

4.红外光光光度法。

磺胺甲噁唑的含量测定：亚硝酸钠滴定法。滴定前加溴化钾2g作为催化剂，可加快滴定反应速度。为避免亚硝酸钠在酸性条件下形成的亚硝酸挥发和分解，滴定时应将滴定管尖端插入液面下2/3处。永停法指示终点。

磺胺嘧啶片、磺胺二甲嘧啶片的片剂要检查溶出度，用紫外分光光度法。

复方磺胺甲噁唑片的含量测定：双波长分光光度法。关键是选择测定波长（λ2）和参比波长（λ1）。波长选择的原则是：干扰组分在λ2和λ1处的吸收度应相等。测定组分在两波长的ΔA尽量大。.

复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑的含量测定：测

定波长（λ2）：257nm，在304nm波长附近（每间隔0.5nm）选择等吸收点波长作为参比波长（λ1），要求

ΔA=Aλ1—Aλ2=0。

含量测定结果的计算公式为：

TMP的测定是以盐酸-氯化钾溶液为溶剂，以239nm作为测定波长（λ2），用SMZ对照液的稀释液在295nm附近选择等吸收波长作为参比波长（λ1）。

复方磺胺嘧啶片的含量测定：磺胺嘧啶(SD)的最大吸收波长为308nm，此波长处TMP无吸收，所以可直接测定SD的含量。

SD对TMP的测定有干扰，所以采用双波长分光光度法测定TMP含量。

美国药典用高效液相色谱法测定。生物碱类药物（重点在鉴别，N的位置，有哪些电效应）

苯烃胺类（盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱）

氮原子在侧链上，碱性较一般生物碱强，易与酸成盐。

托烷类（硫酸阿托品和氢溴酸山莨菪碱）

阿托品和山莨菪碱是由托烷衍生的醇（莨菪醇）和莨菪酸缩合而成，具有酯结构。分子结构中，氮原子位于五元酯环上，故碱性也较强，易与酸成盐。

喹啉类（硫酸奎宁和硫酸奎尼丁）

奎宁和奎尼丁为喹啉衍生物，其结构分为喹啉环和喹啉碱两个部分，各含一个氮原子，喹啉环含芳香族氮，碱性较弱；喹啉碱微脂环氮，碱性强。

异喹啉类（盐酸吗啡和磷酸可待因）

吗啡分子中含有酚羟基和叔胺基团，故属两性化合物，但碱性略强；可待因分子中无酚羟基，仅存在叔胺基团，碱性较吗啡强。

吲哚类（硝酸士的宁和利血平）

士的宁和利血平分子中含有两个碱性强弱不同的氮原子，N1处于脂肪族碳链上，碱性较N2强，故士的宁碱基与一分子硝酸成盐。

黄嘌呤类（咖啡因和茶碱）

咖啡因和茶碱分子结构中含有四和氮原子，但受邻位羰基吸电子的影响，碱性弱，不易与酸结合成盐，其游离碱即供药用。

鉴别试验：特征鉴别反应。

1.双缩脲反应

系芳环侧链具有氨基醇结构的特征反应。

盐酸麻黄碱和伪麻黄碱在碱性溶液中与硫酸铜反应，Cu2+与仲胺基形成紫堇色配位化合物，加入乙醚后，无水铜配位化合物及其有2个结晶水的铜配位化合物进入醚层，呈紫红色，具有4个结晶水的铜配位化合物则溶于水层呈蓝色。

2.Vitali反应

系托烷生物碱的特征反应。

硫酸阿托品和氢溴酸山莨菪碱等托烷类药物均显莨菪酸结构反应，与发烟硝酸共热，即得黄色的三硝基（或二硝基）衍生物，冷后，加醇制氢氧化钾少许，即显深紫色。

3.绿奎宁反应

系含氧喹啉（喹啉环上含氧）衍生物的特征反应

硫酸奎宁和硫酸奎尼丁都显绿奎宁反应，在药物微酸性水溶液中，滴加微过量的溴水或氯水，再加入过量的氨水溶液，即显翠绿色。

4.Marquis反应

系吗啡生物碱的特征反应。

取得盐酸吗啡，加甲醛试液，即显紫堇色。灵敏度为0.05μg。

5.Frohde反应

系吗啡生物碱的特征反应。

盐酸吗啡加钼硫酸试液0.5ml,即显紫色,继变为蓝色,最后变为棕绿色.灵敏度为0.05μg。

6.官能团反应

系吲哚生物碱的特征反应。

利血平结构中吲哚环上的β位氢原子较活泼，能与芳醛缩合显色。

与香草醛反应。利血平与香草醛试液反应，显玫瑰红色。

与对-二甲氨基苯甲醛反应。利血平加对-二氨基苯甲醛，冰醋酸与硫酸，显绿色，再加冰醋酸，转变为红色。

7.紫脲酸反应

系黄嘌呤类生物碱的特征反应。

咖啡因和茶碱中加盐酸与氯酸钾，在水浴上蒸干，遇氨气即生成四甲基紫脲酸铵，显紫色，加氢氧化钠试液，紫色即消失。

8.还原反应

系盐酸吗啡与磷酸可待因的区分反应。

吗啡具弱还原性。本品水溶液加稀铁氰化钾试液，吗啡被氧化生成伪吗啡，而铁氰化钾被还原为亚铁氰化钾，再与试液中的三氯化铁反应生成普鲁士蓝。

可待因无还原性，不能还原铁氰化钾，故此反应为吗啡与磷酸可待因的区分反应。

特殊杂质检查：

利用药物和杂质在物理性质上的差异。

硫酸奎宁中“氯仿-乙醇中不溶物”的检查

盐酸吗啡中“其它生物碱”的检查

旋光性的差异：用于硫酸阿托品中“莨菪碱”的检查

对光选择性吸收的差异：利血平生产或储存过程中，光照和有氧存在下均易氧化变质，氧化产物发出荧光。因此规定：供试品置紫外光灯（365nm）下检视，不得显明显荧光。

吸附性质的差异：硫酸奎宁制备过程中可能存在“其它金鸡纳碱”。利用吸附性质的差异，采用硅胶G薄层进行检查。规定限度为0.5%。

利用药物和杂质和化学性质上的差异。

与一定试剂反应产生沉淀

硫酸阿托品制备过程中可能带入（如莨菪碱、颠茄碱）杂质，因此需要检查“其它生物碱”。利用其它生物碱碱性弱于阿托品的性质，取供试品的盐酸水溶液，加入氨试液，立即游离，发生浑浊。规定0.25g药物中不得发生浑浊。

与一定试剂产生颜色反应

①盐酸吗啡中阿扑吗啡的检查

②盐酸吗啡中罂粟碱的检查

③磷酸可待因中吗啡的检查

④硝酸士的宁中马钱子碱的检查

含量测定

非水溶液滴定法：

生物碱类药物一般具有弱碱性，通常可在冰醋酸或醋酐等酸性溶液中，用高氯酸滴定液直接滴定，以指示剂或电位法确定终点。

⑴氢卤酸盐的滴定

在滴定生物碱的氢卤酸盐时，一般均预先在冰醋酸中加入醋酸汞的冰醋酸溶液，使氢卤酸生成在冰醋酸中难解离的卤化汞，从而消除氢卤酸对滴定反应的不良影响。

加入的醋酸汞量不足时，可影响滴定终点而使结果偏低，过量的醋酸汞（理论量的1～3倍）并不影响测定的结果。

⑵硫酸盐的测定

硫酸为二元酸，在水溶液中能完成二级电离，生成SO42-，但在冰醋酸介质中，只能离解为HSO4-，不再发生二级离解。因此，生物碱的硫酸盐，在冰醋酸的介质中只能被滴定至生物碱的硫酸氢盐。

硫酸阿托品的含量测定。溶剂：冰醋酸和醋酐，指示剂：结晶紫，滴定液：高氯酸。至溶液显纯蓝色。

硫酸奎宁的含量测定。1摩尔的硫酸奎宁可消耗3摩尔的高氯酸。

硫酸奎宁片的含量测定。硫酸奎宁经强碱溶液碱化，生成奎宁游离碱，在与高氯酸反应，因此1摩尔的硫酸奎宁可消耗4摩尔的高氯酸。

⑶硝酸盐的测定：

硝酸在冰醋酸介质中虽为弱酸，但是他具有氧化性，可以使指示剂变色，所有采用非水溶液滴定法测定生物碱硝酸盐时，一般不用指示剂而用电位法指示终点。

如硝酸士的宁。

⑷磷酸盐的测定：

磷酸在冰醋酸介质中的酸性极弱，不影响滴定反应的定量完成，可按常法测定。

磷酸可待因。

提取中和法

提取中和法是根据生物碱盐类能溶于水而生物碱不溶于水的特性，可以采用有机溶剂提取后测定。

碱化、提取、滴定。按下列任何一种方法处理后测定：

①将有机溶剂蒸干，于残渣中加定量过量的酸滴定液使溶解，再用碱滴定液回滴剩余的酸；若生物碱易挥发或分解，应在蒸至近干时，先加入酸滴定液“固定”生物碱，再继续加热除去残余的有机溶剂，放冷后完成滴定。

②将有机溶剂蒸干，于残渣中加少量中性乙醇使溶解，任何用酸滴定液直接滴定。

③不蒸去有机溶剂，而直接于其中加定量过量的酸滴定液，振摇，将生物碱转提入酸液中，分出酸液置另一锥形瓶中，有机溶剂层再用水分次振摇提取，合并水提取液和酸液，最后用碱滴定液回滴定。

测定条件的选择

能使生物碱游离的碱化试剂有氨水、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、氢氧化钙和氧化镁等。但强碱不适用于下列生物碱类药物的游离：

①含酯结构的药物，如阿托品和利血平等，与强碱接触，易引起分解。

②含酚结构的药物，如吗啡，可与强碱形成酚盐而溶于水，难以被有机溶剂提取。

③含脂肪性共存物的药物，当有脂肪性物质与生物碱共存时，碱化后易发生乳化，使提取不完全。因此氨水为最常用的碱化试剂。

提取溶剂

应具备下列条件：

①与水不相混溶，沸点低，对生物碱的溶解度大，而对其它物质的溶解度应尽可能最小。

②与生物碱或碱化试剂不起任何反应。

常用者为乙醚和氯仿，其中氯仿应用更为广泛。

提取溶剂的用量

通常应提取4次，第一次用量至少应为水液体积的一半，以后几次所用溶剂的体积应各为第一次的一半。如果水液体积很小时，第一次提取溶剂的用量则应与水液相等。

提取终点的确定

取最后一次的提取液约0.5ml，置小试管中，加盐酸或硫酸（0.1mol/L）1ml，放水浴上将有机溶剂蒸去，放冷，滴加生物碱沉淀剂（如碘化铋钾试液等）1滴，无沉淀产生，即为提取已完全。

指示剂的选择

磷酸可待因片剂分析：

酸性染料比色法

原理：在适当的pH介质中，生物碱类药物（B）可与氢离子结合成盐（BH+），一些酸性染料（如磺酸酞类的指示剂：溴麝香草酚蓝、溴甲酚绿等）在此介质中能解离为阴离子（In-），同时，阳离子和阴离子又能定量地结合成有色的离子对化合物，即离子对。

离子对被合适的有机溶剂提取后，形成有色溶液，可供比色测定。

影响定量分析的因素

1.水相的最适pH值

2.酸性染料的影响

提取完全是提取常数和酸性染料阴离子的浓度密切相关的，而提取常数的大小由是与B-的种类和有机溶剂的选择密切相关的。一般用的有甲基橙、溴麝香草酚蓝（BTB）和溴甲酚绿等。

3.有机溶剂的影响

离子对提取常数的大小还与有机溶剂的性质有关。通常有机溶剂与离子对形成氢键的能力强，则提取效率高，如氯仿和二氯甲烷等具有中等程度的提取率，并且提取的选择性也较好，为最常用的有机溶剂。

4.水分的影响

有有机溶剂提取有色的离子对时，应严防水分的混入。

5.共存物的影响：一般赋形剂，重型、酸性乙基弱碱性的物质均不干扰测定，强酸可改变染料溶液或缓冲液的pH，因而对测定有干扰。

以上五种影响因素中，水相的最适pH和有机溶剂对离子对的提取完全是酸性染料比色法的试验关键。

应用与实例

硫酸阿托品片剂

紫外分光光度法

利血平含量测定，注意避光操作。

糖类和苷类药物

单糖和双糖分子中有不对称碳原子，均具有一定的比旋度。

鉴别试验

1.灼烧试验：糖类用直火加热，先熔融膨胀，后燃烧并发生焦糖臭，遗留多量的炭。蔗糖的鉴别可应用本试验。

2.Fehling反应

单糖或含有半缩醛基的双糖分子结构中，均有醛基或酮基，都具有还原性。Fehling反应是在碱性酒石酸铜试液（Fehling试液）中，糖将铜离子还原，生成红色的氧化亚铜沉淀。

葡萄糖的鉴别可用此反应（无水葡萄糖、葡萄糖注射液、葡萄糖氯化钠注射液和莪术油葡萄糖均用Fehling反应）

蔗糖的鉴别：加硫酸煮沸，用氢氧化钠中和，再加碱性酒石酸铜试液，加热，生成氧化亚铜的红色沉淀。

葡萄糖和乳糖的杂质检查

葡萄糖的一般检查项目：酸度、氯化物和硫酸盐；溶液的澄清度与颜色；乙醇溶液的澄清度；亚硫酸盐与可溶性淀粉。

葡萄糖注射液中5-羟基糠醛的测定：紫外分光光度法。

乳糖的杂质检查：利用蛋白质类杂质遇硝酸汞试液产生的白色絮状沉淀，进行特殊杂质“蛋白质”的检查。

原料药的含量测定：葡萄糖、乳糖和蔗糖不规定含量测定，规定比旋度的范围。

制剂：葡萄糖注射液的含量测定：旋光度法。

测定中加入氨试液的作用：由于药用葡萄糖是D-葡萄糖，而D-葡萄糖有α和β两种互变异构体，因而药用葡萄糖是他们的混合物，比旋度相差甚远，而在水溶液中逐渐平衡，称作变旋。加热、加酸或加弱碱可加速平衡。

计算因素1.0426的由来：

换算为含税葡萄糖浓度（c’）时，则应为：

葡萄糖氯化钠注射液含量测定：硝酸银滴定法，每1ml硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于5.844mg的NaCl。

加糊精溶液以形成保护，使氯化银沉淀呈胶体状态，则具有较大的表面，有利于对指示剂的吸附，有利于滴定终点的观察。

加硼砂溶液是为了增加pH值，因为本品pH值过低，而pH值低于3.5时，则五沉淀出现。加入2.5%硼砂溶液2ml后，溶液pH值为7,可促使荧光黄电离，以增大荧光黄阴离子的有效浓度，使重点变化敏锐。

苷类药物

苷类为糖的衍生物（如氨基糖、糖醛酸等）与另一非糖有机化合物通过糖的端基碳原子连接而成的化合物。

鉴别试验：

1.Keller-Kiliani反应

α-去氧甲基五碳糖的反应

α-去氧糖类，如洋地黄毒糖和磁麻糖，是由糖类分子中与羰基相邻近的“CHOH”基失去氧，转变为“CH2”后的结构。具有较大的活泼性，由α-去氧糖与苷元结合的生成物（即苷类）容易水解。

将甾体强心苷溶于含有微量FeCl3（1滴9%FeCl3）的冰醋酸1～2ml中，沿管壁缓缓加入浓硫酸1～2ml，使成两液层。两液层交界面处显棕色（甲地高辛显紫色）；醋酸层显蓝色或蓝绿色，放置1h后显靛蓝色。

2.Kedde反应

苷元的不饱和内酯侧链反应。

甾体强心苷元的C17上常有α-β或β-γ的不饱和内酯，即丁烯内酯，在碱性水溶液中易与芳香硝基化合物形成有色的络合阴离子。

Kedde反应用于去乙酰毛花苷的鉴别。

加乙醇溶解后加二硝基苯甲酸试液与乙醇制氢氧化钾试液各10滴，摇匀后，溶液即显红紫色。

3.色谱法

①纸色谱法：用于地高辛的鉴别

②薄层色谱法：用于去乙酰毛花苷及其注射液的鉴别，采用硅藻土G薄层板.

③高效液相色谱法：用于甲地高辛及其片剂的鉴别

特殊杂质的检查

药物特殊杂质允许限量检查方法

洋地黄毒苷洋地黄皂苷本品10mg溶于2ml乙醇后，加胆甾醇的醇溶液，10min内，不得发生沉淀

地高辛洋地黄毒苷6%纸色谱法

甲地高辛有关物质5%高效液相色谱法

去乙酰毛花苷有关物质10%薄层色谱法

含量测定

1.比色法：甾体强心苷元C17上的丁烯内酯部分是非常活泼的，很容易和芳香硝基化合物（如碱性三硝基苯酚试液）形成络合阴离子。所得络合物在可见光去具有特征的最大吸收峰（λmax为485～495nm）。

本法用于地高辛、去乙酰毛花苷及其注射液的含量测定

2.荧光法：利用L-抗坏血酸与过氧化氢等实际可使地高辛或洋地黄毒苷产生荧光的原理，提高了定量分析的灵敏度，从而可用于每片含主药量分别仅为0.25mg和0.1mg的片剂的含量测定。

地高辛片含量，含量均匀度（限度为20%），溶出度（限度为65%，转篮，100r/min,60min）

甲地高辛溶出度测定与地高辛一样，限度规定相同。

3.色谱法：

①柱色谱法：用于洋地黄毒苷原料药测定的纯化处理

②肾上腺素类药物的结构特点本类药物具烃氨基侧链，显弱酸性，游离碱溶于有机溶剂，其盐可溶于水；分子中具有邻苯二酚（或苯酚）结构的药物可与重金属离子络合呈色，露置空气中或遇光易氧化，色渐变深，在碱性溶液中更易变色；多数药物分子中有手性碳原子，具有光学活性；苯环上的取代基也各具特性均可供分析用。有紫外及红外吸收特性。

鉴别：三氯化铁反应。肾上腺素：翠绿色，加氨试液，显紫色→紫红色。

重酒石酸去甲肾上腺素：翠绿色，加碳酸氢钠试液，显蓝色→红色。

盐酸去氧肾上腺素：紫色。

盐酸异丙肾上腺素：深绿色，滴加新制的5%碳酸氢钠试液，显蓝色→红色。

氧化反应：盐酸异丙肾上腺素：在偏酸性条件下被碘迅速氧化，生成异丙基肾上腺素红，加硫代硫酸钠使碘的棕色消退，溶液显淡红色。

重酒石酸去甲肾上腺素：在上述条件下比较稳定，几乎不被碘氧化，需在酒石酸氢钾的饱和溶液（pH为3.56）中被碘氧化，溶液为五色或仅显微红色或淡紫色。

肾上腺素：在酸性条件下，被过氧化氢氧化后，溶液显血红色。

甲醛-硫酸反应：重酒石酸去甲肾上腺素：橙色→暗紫色。

异丙肾上腺素：污紫色。

去氧肾上腺素：污紫色。

紫外特征吸收与红外吸收光谱。

肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸去氧肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素均需检查酮体。紫外吸收分光光度法。酮体在310nm处有最大吸收，而药物本身在此波长处几乎没有吸收。规定：在310nm波长处测定吸收度不得大于0.05，即相当于含酮体的量低于0.06%。

含量测定：非水溶液滴定法。冰醋酸为溶剂，加入醋酸汞试液消除氢卤酸的干扰，结晶紫为指示液。

溴量法：盐酸去氧肾上腺素及其注射液采用此方法测定含量。利用药物中的苯酚结构，在酸性溶液中酚羟基邻、对位活泼氢能与过量的溴定量地发生溴代反应，再以碘量法测定剩余的溴，根据消耗的溴及硫代硫酸钠两种滴定液的量即可计算各供试品的含量。

操作要点：⑴游离溴及碘极易挥散，操作过程中必须防止逸失。

⑵不能加入太过量的溴，否则在溴代反应中会引起酚羟基的氧化或溴化，一般加入的溴液以过量2%为宜。

⑶为了校正操作中溴及碘的可能逸失，应按平行条件进行空白试验。

氨基醚衍生物类药物分析

盐酸苯海拉明的鉴别：与硫酸反应显色。初显黄色，随即变成橙红色；滴加水，即成白色乳浊液。

水解反应。本品水溶液遇酸易水解，生成水溶性很小的二苯基甲醇，分散在水层，呈白色乳浊，加热煮沸数分钟，聚集呈油状液体，放冷，凝成白色蜡状。

与硝酸银反应形成沉淀。

紫外特吸收和红外特征吸收光谱。

盐酸苯海拉明的含量测定：非水溶液滴定法。盐酸苯海拉明原料药为盐酸盐，在冰醋酸中加醋酸汞后，可定量地与高氯酸生成苯海拉明该氯酸盐。

酸性染料比色法。主要用于盐酸苯海拉明片剂的含量测定及片剂溶出度的测定。

阴离子表面活性剂滴定法。用于盐酸苯海拉明注射液的含量测定。

此方法还可测定生物碱、含氮杂环、季铵盐类。

溶剂：水、氯仿、稀硫酸，指示液：二甲基黄-溶剂蓝19混合指示液，滴定液：磺基丁二酸钠二辛酯试液。

注意：盐酸苯海拉明含量测定：原料：非水溶液滴定法。片剂含量及溶出度：酸性染料比色法。注射液：阴离子表面活性剂滴定法。维生素A醋酸酯等吸收法：在λ1的左右各选一点为λ2和λ3,使Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1。维生素A醇。

③杂质吸收：对维生素A的测定有影响的杂质主要有：

维生素A2和维生素A3；维生素A的氧化产物（环氧化物、维生素A醛和维生素A酸）；维生素A在光照下产生的无生物活性的聚合物鲸醇；维生素A的异构体；合成时产生的中间体。

④测定方法：第一法（使用于维生素A醋酸酯）

取维生素A醋酸酯，精密称定，加环己烷制成每1ml中含9～15单位的溶液。然后在300、316、328、340、360nm五个波长处分别测定吸收值，确定最大吸收波长（应为328nm）。计算各波长下的吸收度与328nm波长下的吸收度的比值。

计算：

a.求吸收系数，吸收系数＝A/cl。

b.求效价（U/g），U/g＝吸收系数×1900

1900为维生素A醋酸酯在环己烷溶液中测定的换算因数。

3.求维生素A醋酸酯胶丸为标示量的百分含量。

标示量%＝（A×D×1900×W）/（W×100×l×标示量）

1U=0.344μg维生素A醋酸酯

1U=0.300μg维生素A醇

4.A值的选择法

第二法（适用于维生素A醇）

说明：

⑴维生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程法（即代数法）推导出来的；维生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（几何法或成6/7定位法）推倒出来。

⑵在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧上升或下降陡部的波长处进行测定。

维生素E

维生素E（消旋-α-生育酚醋酸酯）有天然片和合成品之分，天然品为右旋体（d-α）；合成品为消旋体（dl-α）。

结构：维生素E为苯丙二氢吡喃醇衍生物，苯环上又一个乙酰化的酚羟基，故又称生育酚。他主要有α、β、γ、δ四种异构体，其中以α异构体的生理作用最强。

性质：

溶解性：微黄色或黄色透明的粘稠液体，易溶于乙醇、丙酮、乙醚、石油醚，不溶于水。

具有紫外吸收。

在无氧或其它氧化剂存在时，在酸性或碱性溶液中，加热可水解生成游离生育酚；在有氧或其它氧化剂存在时，则进一步氧化生成醌型化合物。在碱性条件下加热，这种氧化作用更易发生。

鉴别试验：

⑴硝酸反应：取本品约30mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在75℃加热约15min，溶液应显橙红色。

⑵水解后氧化反应：取本品约10mg，加醇制氢氧化钾试液2ml，煮沸5min，放冷，加水4ml与乙醚10ml，振摇、静置使分层，取乙醚液2ml，加2,2’-联吡啶的乙醇溶液（0.5→100）数滴和三氯化铁的乙醇溶液（0.2→100）数滴，应显血红色。

⑶紫外光谱法。

⑷薄层色谱法。

特殊杂质：

游离维生素E。利用游离维生素E的还原性，用硫酸铈滴定液（0.01mol/L）滴定，以二苯胺为指示剂，限量为2.15%。

含量测定：

⑴气相色谱法：载气：氮气；固定相：硅酮（OV-17），涂布于经酸洗并硅烷化处理的硅藻土或高分子小球上；检测器：氢火焰离子化检测器；理论板数：按维生素E峰计算应不低于500；维生素E与内标物质的分离度应大于2。

内标：正三十二烷。

⑵高效液相色谱法：C18柱；流动相为甲醇：水（49：1）；紫外检测器；波长292nm。

维生素B1

结构：维生素B1（盐酸硫胺）是由氨基嘧啶环和噻唑环通过央甲基连接而成的季铵化合物，噻唑环上季铵及嘧啶环上氨基，为两个碱性基团，可与酸成盐。

性质：

溶解性：本品在水中易溶，水溶液显酸性反应。在乙醇中微溶，在乙醚中不溶。

具有紫外吸收。

在碱性中遇氧化剂，如铁氰化钾，可被氧化为具有荧光的硫色素，后者溶液正丁醇中呈蓝色荧光。

分子中含有两个杂环，故可与某些生物碱沉淀试剂反应生成组成恒定的沉淀。

鉴别试验

⑴硫色素反应

方法：取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml溶解后，加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2min，放置使分层，上面的醇层显强烈的蓝色荧光。加酸使成酸性，荧光即消失。再加碱使成碱性，荧光又显出。

原理：维生素B1在碱性溶液中，可被铁氰化钾氧化生成硫色素。硫色素溶于正丁醇（或异丁醇等）中，显蓝色荧光。

⑵沉淀反应

维生素B1与碘化汞生成淡黄色沉淀

维生素B1与碘生成红色沉淀

维生素B1与硅钨酸生成白色沉淀

含量测定

方法有：硅钨酸重量法、硫色素荧光法、非水溶液滴定法和紫外分光光度法。

中国药典收载紫外分光光度法

维生素C

结构：维生素C分子结构中具有二烯醇结构和内酯环，且有二个手性碳原子（C4、C5），因此不仅使维生素C性质极为活泼，且具旋光性。

性质：

溶解性：维生素C在水中易溶，水溶液呈酸性，在乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。

结构遇糖类相似，也具糖的性质。

分子中二烯醇基具极强的还原性，易被氧化为二酮基而成为去氢抗维生素C,加氢又可还原为维生素C.在碱性溶液或强酸性溶液中能进一步水解为二酮古罗糖酸。

C3-OH由于受共轭效应的影响，酸性较强；C2-OH的酸性极弱，故维生素C一般表现为一元酸，能与碳酸氢钠作用生成钠盐。

分子中有两个手性碳原子，故有四个光学异构体，其中L（+）-维生素C活性最强。

维生素C和碳酸钠作用可生成单钠盐，不致发生水解，因双键使内酯环变得较稳定；但在强碱中，内酯环可水解，生成酮酸盐。

维生素C有共轭双键，在稀矿酸溶液中，在245nm波长处有最大吸收；若在中性或碱性条件下，则红移至265nm处。

鉴别试验：

⑴与硝酸反应

方法：取本品0.2g，加水10ml溶解。取该溶液5ml，加硝酸银试液0.5ml，即生成银的黑色沉淀。

原理：维生素C分子中有二烯醇基，具强还原性，可被硝酸银氧化为去氢维生素C,同时可产生黑色银沉淀。

⑵与2,6-二氯靛酚反应

方法：取本品0.2g，加水10ml溶解。取该溶液5ml，加2,6-二氯靛酚试液1～2滴，试液的颜色即消失。

原理：2.6-二氯靛酚为一染料，其氧化型在酸性介质中为玫瑰红色，碱性介质中微蓝色。与抗坏血酸作用后生成还原型的物色的酚亚胺。

⑶与其它氧化剂反应

维生素C还可被亚甲蓝、高锰酸钾、碱性酒石酸铜试液、磷钼酸等氧化剂氧化为去氢维生素C,同时，维生素C可使这些试剂褪色，产生沉淀或显色。

⑷利用维生素C具糖类性质的反应

维生素C可在三氯醋酸或盐酸存在下水解、脱羧，生成戊糖，再失水，转变为糠醛，加入吡咯，加热至50℃产生蓝色。

⑸紫外分光光度法

维生素C在0.01mol/L盐酸液中，在243nm波长处有唯一的最大吸收，利用此特征进行鉴别。

含量测定：

碘量法：溶剂：水和稀醋酸，指示剂：淀粉。

操作中加入稀醋酸10ml使滴定在酸性溶液中进行。在酸性介质中维生素C受空气中氧的氧化作用减慢，但样品溶于稀酸后仍需立即进行滴定。

加新沸过的冷水液是为了减少水中溶解氧对测定的影响。

如片剂，溶解后应滤过，取续滤液测定；注射液测定时要加2ml丙酮，以消除注射液内含有的抗氧剂亚硫酸氢钠对测定的影响。

抗生素类药物

β-内酰胺类抗生素

本类抗生素包括青霉素族和头孢菌素族，他们的分子结构中均含有β-内酰胺环。

基本结构：

分子中都有一个游离羧基和酰胺侧链。

青霉素：β-内酰胺环和氢化噻唑环

头孢菌素：β-内酰胺环和氢化噻嗪环

性质：

溶解度：青霉素和头孢菌素分子中的游离羧基具有相当强的酸性，能与无机碱或某些有机碱形成盐。其碱金属盐易溶于水，而有机碱盐难溶于水，易溶于甲醇等有机溶剂。

旋光性：青霉素族分子中含有三个手性碳原子，头孢菌素族含有两个手性碳原子，都具有旋光性。

紫外吸收特性

青霉素分子中的母核部分无紫外吸收，但出侧链酰胺基上R如具苯环共轭系统，则有紫外吸收特性。

头孢菌素由于母核部分具有O-C=N-C=C结构，故有紫外吸收。

β-内酰胺环的不稳定性

β-内酰胺环是青霉素族结构最不稳定的地方，如与酸、碱、青霉素酶、羟胺及某些金属离子（铜、铅、汞和银）等作用时，易发生水解和分子重排，导致β-内酰胺环的破坏而失去活性。

鉴别试验：

⑴钾、钠盐的火焰反应

⑵呈色反应

①羟肟酸铁反应：青霉素及头孢菌素在碱性中与羟胺作用，β-内酰胺环破裂生成羟肟酸，在稀酸中与高铁离子呈色。

头孢哌酮：红棕色；氨苄西林：紫红色；头孢氨苄：红褐～褐色；头孢噻吩钠：红褐色；普鲁卡因青霉素：紫红色；头孢唑啉钠：红棕色。

②硫酸—硝酸呈色反应：头孢菌素能与硫酸—硝酸反应后成色。

头孢噻吩钠：红棕色；头孢氨苄：黄色；头孢噻肟钠：亮黄色。

③茚三酮反应：某些具有α-氨基的本类药物（如氨苄西林）遇茚三酮即显蓝紫色。

④与斐林试剂反应：本类药物具有类似肽键结构，可产生双缩脲反应。开环分解，使碱性酒石酸铜盐还原显紫色。阿莫西林、氨苄西林钠可采用本法鉴别。

⑤变色酸—硫酸呈色反应：阿莫西林加变色酸-硫酸实际混合后，于150℃加热2～3min，因分解除甲醛与变色酸缩合而呈深褐色。

⑥与重氮苯磺酸呈色反应：头孢菌素族7位侧链含有酚羟基基团时，能与重氮苯磺酸试液产生偶合反应，显橙黄色。

⑦与铜盐呈色：头孢氨苄加醋酸、硫酸铜、氢氧化钠试液后，生成铜配位盐，显橄榄绿色。

⑶沉淀反应

①在稀酸中生成白色沉淀：青霉素钾和青霉素钠加水溶解后，加稀盐酸2滴，即析出难溶于水的游离基白色沉淀。此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或过量的盐酸中成盐。

②有机胺盐的特殊反应

重氮化-偶合反应：普鲁卡因青霉素水溶液酸化后，显普鲁卡因芳伯氨基的重氮化-偶合反应，生成偶氮染料红色沉淀。

与三硝基苯酚的反应：苄星青霉素经氢氧化钠碱化后，用乙醚提取，蒸去乙醚后的残渣含有二苄基乙二胺，加稀乙醇使残渣溶解，加三硝基苯酚的饱和溶液，加热后放冷，即析出二苄基乙二胺苦味酸结晶。

⑷光谱法

①紫外分光光度法

最大吸收波长鉴定法

水解产物的最大吸收波长鉴定法

②红外吸收光谱

③核磁共振光谱

⑸色谱法

①薄层色谱法

②高效液相色谱法

含量测定

⑴碘量法（苄星青霉素）

青霉素或头孢菌素分子不消耗碘，其降解产物消耗碘。

反应分两步进行：第一步反应是按化学计算量进行；第二步青霉噻唑烷酸在酸性条件下被碘氧化的反应受温度、pH、时间等诸多因素影响，故耗碘量没有固定的量关系。因此试验过程中要严格控制温度，同时采用与青霉素标准品平行对照测定，则可抵消上述可变因素的影响。

碘与青霉噻唑酸的作用以Ph4.5，温度在24～26℃为最好。1摩尔青霉素能吸收8摩尔的碘,故本法的灵敏度较高。

注意：在滴定终点时放慢滴定速度，并强力振摇；如果滴定至终点又返现蓝色，说明真正的终点尚未到达。

⑵汞量法（青霉素钠、青霉素钾）

青霉素分子不与汞盐反应，而其碱性水解产物青霉噻唑酸及继续水解生成的青霉胺都能与汞盐定量反应，根据消耗的汞盐量可以计算青霉素的含量。

电位滴定法：指示电极：铂电极；参比电极：汞-硫酸亚汞电极。滴定液：硝酸汞。

每1ml的硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当于7.128mg的总青霉素。

总青霉素的百分含量与降解产物的百分含量之差值即为青霉素的含量。

注意：青霉素含量计算以第二次滴定终点为依据；水解必须完全；空白试验也要称取供试品，但不经氢氧化钠水解；与碘量法比较，汞量法测定青霉素的主要优点是不需要青霉素标准品作对照，汞盐滴定液用EDTA标定即可。

⑶酸碱滴定法（苯唑西林钠）

⑷紫外-可见分光光度法

⑸高效液相色谱法

氨基糖苷类抗生素杂环药物

吡啶类药物

异烟肼的鉴别试验：还原反应。异烟肼的酰肼基有还原性，可还原硝酸银中的Ag+成单质银，肼基则被氧化生成氮气。加氨制硝酸银试液1ml，即产生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。

缩合反应。异烟肼的酰肼基可以和含羰基的试剂（如芳醛）发生缩合反应。异烟肼与香草醛反应，生成异烟腙，测定熔点供鉴别。

沉淀反应。异烟肼分子中的吡啶环具有碱性，可以和重金属盐类（如氯化汞、硫酸铜、碘化铋钾）乙基苦味酸形成沉淀。异烟肼和氯化汞可生成白色沉淀。和硫酸铜-枸橼酸试液反应，先产生绿色沉淀，加热，沉淀变为红棕色。

尼克刹米的鉴别：戊烯二醛反应。属吡啶环的开环反应。尼克刹米分子中的吡啶环与溴化氰反应，开环形成戊烯二醛的衍生物，再与苯胺缩合，形成黄色的希夫氏碱。

异烟肼也可发生戊烯二醛反应，但需先用高锰酸钾或溴水氧化为异烟酸，再与溴化氰作用。

与苯胺缩合形成黄色至棕黄色产物，与联苯胺紫外分光光度法形成淡红至红色产物。

水解反应。尼克刹米分子中的酰胺基在碱性条件下可水解，加氢氧化钠试液，加热，即有二乙胺臭味逸出，能使湿润的红色石蕊试纸变成蓝色。

沉淀反应。尼克刹米分子中的吡啶环也可以和重金属离子反应。尼克刹米和硫酸铜及硫氰酸铵作用，生成草绿色配位化合物的沉淀。

异烟肼中游离肼的检查：薄层色谱法。肼的检测限为0.1μg，控制限量为0.02%。

异烟肼的含量测定：异烟肼分子中的酰肼基具有还原性，可采用氧化还原滴定法测定其含量。溴酸钾法。甲基橙作指示剂，溴酸钾滴定止粉红色消失。每1ml的溴酸钾滴定液（0.1667mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O。

异烟肼的片剂、注射剂均采用溴酸钾法测定含量。

还可使用溴量法、剩余碘量法测定含量，也可用非水溶液滴定法。

尼克刹米含量测定：非水溶液滴定法。溶剂：冰醋酸，指示剂：结晶紫，滴定液：高氯酸。至溶液蓝绿色。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于17.82mg的C10H14N2O。

紫外分光光度法。测定尼克刹米注射剂含量。注射剂的溶剂对非水溶液滴定法有干扰，所以采用本法。使用0.5%硫酸溶液溶解样品，是为了使药物呈离解状态，易溶于水。甾体激素类药物

基本结构：均具有环戊烷骈多氢菲母核。

分类：

1.肾上腺皮质激素：皮质酮衍生物，如可的松、泼尼松、地塞米松等。

本类药物多为C21-羟基所形成的酯类。

结构特点是具有21个C原子：A环：具有Δ4-3-酮基；C17：具有α-醇酮基并多数有α-羟基；C10、C13：具有角甲基；C11：具有羟基或酮基；其它：有些皮质激素具有Δ1,6α、9α卤素，16α羟基，6α、12α、16α、16β甲基等。

2.雄性激素及蛋白同化激素：甲睾酮、丙酸睾酮、十一酸睾酮等；蛋白同化激素有苯丙酸诺龙。

结构特点：雄性激素具有19个C原子；蛋白同化激素具有18个C原子（C10上无角甲基）；A环：具有Δ4-3-酮基；C17：无侧链，多数是一个β-羟基，有些是由他形成的酯，有些具有α-甲基。

3.孕激素：也称为黄体酮激素或孕酮。典型药物为黄体酮。

中国药典收载有：黄体酮、醋酸甲羟孕酮、己酸羟孕酮、醋酸甲地孕酮原料及制剂；醋酸氯地孕酮原料等。

结构特点：具有21个C原子；A环：具有Δ4-3-酮基；C17：具有甲酮基，有些具有α-羟基，与醋酸、已酸等形成酯（如醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、己酸羟孕酮等）；其它：有些具有Δ6、6β-甲基、6α-甲基、6β-氯。

4.雌激素：又称卵泡激素。雌二醇、炔雌醚、苯甲酸雌二醇、戊酸雌二醇、炔雌醇原料及制剂等。

结构特点：具有18个C原子；A环：为苯环，C3上具有酚羟基且有些形成了酯或醚；C10：无角甲基；C17：具有β-羟基或酮基，有些羟基形成了酯，还有些具有乙炔基。

口服避孕药：炔诺酮、炔诺孕酮、炔孕酮。多数在A环上具有Δ4-3-酮基，与黄体酮和睾酮一致；有的在C17上具有β-羟基、α-乙炔基或甲酮基；有的在C10上无角甲基，与雌激素相同。

鉴别试验：

呈色反应

1.与强酸的呈色反应：许多甾体激素能与硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸等呈色，其中与与硫酸的呈色反应应用较广。

药品名称颜色荧光加水稀释后的变化

醋酸可的松黄或微带橙无颜色消失溶液澄清

氢化可的松棕黄至红绿色黄至橙黄微带绿色荧光，少量絮状沉淀

泼尼松橙无黄至蓝绿

泼尼松龙深红无红色消失，灰色絮状沉淀

炔雌醇深红黄绿

地塞米松磷酸钠黄或红棕无

某些甾体激素药物与硫酸-乙醇或硫酸-甲醇作用而呈色。如甲睾酮：取本品数毫克，加硫酸-乙醇（2：1）1ml使溶解，即显黄色并带有黄绿色荧光。

2.官能团的呈色反应：

①C17-α-醇酮基的呈色反应：皮质激素类药物分子结构中C17位上的α-醇酮基具有还原性，能与氧化剂四氮唑盐反应而呈色。如醋酸泼尼松在碱性条件下与氯化三苯四氮唑试液反应生成红色。

②酮基的呈色反应：甾体激素分子结构中含有酮基，如C3-酮基和C20-酮基,均能与2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼等羰基试剂呈色。例如，醋酸可的松、氢化可的松等，其甲醇或乙醇溶液加新制的硫酸苯肼试液，加热即显黄色。

③甲酮基的呈色反应：甾体激素分子结构中含有甲酮基乙基活泼亚甲基时，能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛类反应呈色。其中亚硝基铁氰化钠反应可认为是黄体酮的灵敏、专属的鉴别方法，在一定的条件下，黄体酮显蓝紫色，其他常用甾体激素均不显蓝紫色，而呈现淡橙色或不显色。

④有机氟的呈色反应：一些含氟的甾体激素药物（如醋酸氟轻松、醋酸地塞米松等），经氧瓶燃烧法后生成无机氟化物，在12%醋酸钠的稀醋酸中与茜素氟蓝及硝基亚铈起反应，即显蓝紫色。

⑤酚羟基的呈色反应：C3为酚羟基的雌激素，能与重氮苯磺酸反应生成红色偶氮染料。如JP(13)收载的苯甲酸雌二醇利用该法进行鉴别。

沉淀反应

1.与斐林试剂的沉淀反应

皮质激素的C17-α-醇酮基具强还原作用，与斐林试剂反应生成橙红色氧化亚铜沉淀。

2.与氨制硝酸银的沉淀反应

皮质激素的C17-α-醇酮基具强还原性，与氨制硝酸银反应，生成黑色金属银沉淀。

3.与硝酸银的沉淀反应

含炔基的甾体激素，如炔雌醇、炔诺酮，遇硝酸银奖试液，即生成白色的炔雌醇银盐沉淀及白色炔诺酮银沉淀。

4.与硝酸—硝酸银的沉淀反应

甾体激素（如丙酸氯贝他索、丙酸贝氯米松）中有机结合的氯，经加热或进行有机破坏生成无机氯化物，再在硝酸酸性条件下与硝酸银作用，生成氯化银的白色沉淀。

制备衍生物测定其熔点

利用甾醇、甾酮类药物与一些试剂反应生成酯、肟、缩氨脲，或利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体，然后测定其熔点进行鉴别。

1.酯的生成：如炔雌醇制成苯甲酸酯。

2.酮肟的生成：如黄体酮与盐酸羟胺作用生成黄体酮双酮肟为例。

3.缩氨基脲的生成：ChP收载苯丙酸诺龙生成其缩氨基脲衍生物。

4.酯的水解：如丙酸睾酮用醇制氢氧化钾水解为例。

水解产物的反应

戊酸雌二醇、已酸羟孕酮等药物，先在碱液中水解，经酸化加热分别产生戊酸、己酸特臭，用此法可鉴别这两种药物。

紫外分光光度法

丙酸倍氯米松的乙醇溶液（20μg/ml）在239nm波长处有最大吸收。

红外分光光度法

薄层色谱法

中国药典收载的炔诺酮、炔雌醚片、丙酸睾酮注射液、倍他米松磷酸钠、醋酸氯地孕酮片、醋酸甲羟孕酮片、醋酸泼尼松片、苯丙酸诺龙注射液、戊酸雌二醇注射液、苯甲酸雌二醇注射液、复方己酸孕酮注射液、复方炔诺酮片、复方炔诺酮膜、复方炔诺孕酮片、复方炔诺孕酮滴丸、哈西奈德软膏等甾体激素药物均采用了薄层色谱（标准品对照法）进行鉴别。

高效液相色谱法：

中国药典中醋酸氟轻松软膏、醋酸氟氢可的松软膏、醋酸曲安奈德软膏、丙酸倍氯米松软膏、地塞米松磷酸钠滴眼液、哈西奈德乳膏等的鉴别试验。

特殊杂质的检查

1.游离磷酸：地塞米松磷酸钠（中国药典收载）、氢化可的松磷酸钠中检查游