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文档简介

实验名称：血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳（一）实验目的：1.学习醋酸纤维薄膜电泳原理。2.掌握血清醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的技术。3.熟悉血清蛋白组分定量方法，并确定血清中蛋白与球蛋白的比值。（二）实验原理：血清绝大多数蛋白质的等电点在～。在的巴比妥缓冲液中，血清蛋白全部带负电荷，在直流电场中向正电极移动，移动的速度与带电蛋白质颗粒所带电荷成正比，与蛋白质颗粒的大小成反比。如果样品点在醋酸纤维薄膜的同一条线上，电泳相同的时间，不同的蛋白质颗粒移动的距离不同，通过染色，薄膜条上的血清的蛋白质被分离成不同的条带。将此薄膜条透明，可以进行扫描，或将色带剪下，将颜色洗脱，进行比色，都能获得各色带所含蛋白质占血清总蛋白的百分比，并可计算血清中清蛋白／球蛋白比值，正常值为～。（三）实验材料与仪器：1．实验仪器材料：（1）醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）（2）人血清；（3）烧杯及培养皿数只；（4）x光片；（5）镊子；（6）试管六只；（7）电泳槽；（8）直流稳压电泳仪；（9）7220型分光光度计；（10）剪刀2．实验试剂：（1）巴比妥-巴比妥钠缓冲液：取两个大烧杯，分别称取巴比妥钠和巴比妥溶解于500ml蒸馏水中；（2）染色液，可反复使用；（3）漂洗液：取乙醇45ml，冰醋酸10ml，混匀；（4）浸出液：LNaOH溶液；（四）实验步骤：1．准备和点样取一条醋酸纤维薄膜，侵入缓冲液中，完全侵泡后，用镊子轻轻取出，将薄膜无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，再放一张干净滤纸吸取多余的缓冲液。用X光片蘸取少量血清，然后轻轻于距离薄膜端处接触，样品即成一条线突于纤维膜上。待血清透入膜内，将薄膜放在电泳槽上。2．电泳接通电源，设定电泳电压为100V，通电50min.3．染色漂洗电泳完毕后，将薄膜侵泡在染色液中5min～10min.取出，用漂洗液漂至背景无色。4．定量取出六只试管，将漂净的薄膜用滤纸吸干，剪下薄膜上各条蛋白质色带，另取一条与各区带相近似宽的无蛋白质附着的空白薄膜，分别侵泡于溶液中，然后用7200型分光光度计在650nm处比色，以空白条薄膜洗出液为空白调零，测定各管的吸光度。(五)实验数据记录：设各部分吸光率为、、、、白蛋白比率＝＝;球蛋白比率＝＝球蛋白比率＝＝;球蛋白比率＝＝球蛋白比率＝＝(六)实验讨论：1.以血清为样品，和滤纸相比，用醋酸纤维薄膜电泳的优点是用时少，效果较明显。2.为什么用pH为的巴比妥缓冲溶液来侵泡醋酸纤维薄膜，是因为人体正常血液的pH值为7..35～，血清蛋白在碱性条件下带负电荷，在直流电场中向正极流动。3.本次试验结果中，球蛋白测得的含量偏低，原因可能是在剪裁电泳带时遗漏了一条薄膜没有剪下或剪裁时剪到其他蛋

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