Cha4 药物的含量测定方法与验证课件

药物分析

PharmaceuticalAnalysis

第四章药物的含量测定方法与验证§4.2药品分析方法的验证

§4.3定量分析样品的前处理方法

§4.1定量分析方法的特点

12/7/2022常用的定量分析方法：滴定分析法、光谱分析法、色谱分析法。、滴定分析法用于常量组分测定；准确度高（RSD<0.2%）、精密度好；仪器设备简单、试验成本低及操作简便、快速。（一）特点定量分析方法的特点§4.1定量分析方法的特点

12/7/2022（二）滴定分析法的计算例：原料药异烟肼的含量计算称取供试品0.2003g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取20ml，加水40ml、盐酸16ml与甲基橙指示液1滴，用溴酸钾滴定液（0.01671mol/L）缓缓滴定（温度保持在18～25℃）至粉红色消失，消耗溴酸钾滴定液11.57ml。每1ml溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O。计算异烟肼中异烟肼的百分含量。定量分析方法的特点12/7/2022（二）滴定分析法的计算例：异烟肼片的含量计算取异烟肼片20片，称重1.3882g（标示量60mg/片），研细，精密称取0.2281g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取20ml，加水40ml、盐酸16ml与甲基橙指示液1滴，用溴酸钾滴定液（0.01671mol/L）缓缓滴定（温度保持在18～25℃）至粉红色消失，消耗溴酸钾滴定液11.57ml。每1ml溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O。计算异烟肼片中异烟肼的百分含量，并计算其含量为标示量的多少（%）。定量分析方法的特点12/7/2022二、光谱分析法1、原理：根据Lambert-Beer定律物质对单色光吸收强弱与吸光物质浓度、液层厚度都有关系（一）紫外-可见分光光度法定量分析方法的特点百分吸收系数：当溶液浓度为1%（g/100ml）溶液厚度为1cm时的吸光度每100ml溶液中所含被测物质的重量12/7/20222、定量方法：吸收系数法、对照品比较法、标准曲线法吸收系数法例：维生素B2的测定取本品0.0752g，置烧杯中，加冰醋酸1ml与水75ml，加热溶解后，加水稀释，放冷，移置500ml量瓶中，加水稀释至刻度，混匀；精密量取10ml，置100ml量瓶中，加4%氢氧化钠溶液7ml，并用水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法在444nm的波长处测吸收度，按维生素B2的吸收系数为323计算含量。定量分析方法的特点12/7/20222、定量方法：吸收系数法、对照品比较法、标准曲线法对照品比较法供试品中被测成分的浓度原料药制剂定量分析方法的特点12/7/20223、仪器的校正

4、特点灵敏度高，可达10-4g/ml～10-7g/ml；准确度高，RSD（%）为2%～5%；仪器价格低廉，操作简单，易普及；应用范围广

定量分析方法的特点12/7/2022S2S1S0T1吸收发射荧光发射磷光系间跨越内转换振动弛豫能量l2l1l

3

外转换l

2T2内转换振动弛豫定量分析方法的特点12/7/20222、荧光激发光谱与荧光发射光谱Stokes位移发射光谱的形状与激发波长无关镜像规则定量分析方法的特点12/7/20223、分子产生荧光必须具备的条件具有一定的荧光量子产率（荧光效率）；荧光效率：具有合适的结构；跃迁类型：*→有利于荧光的产生；共轭效应：提高共轭度有利于增加荧光效率并产生红移刚性平面结构：分子刚性平面越大，荧光效率越大取代基效应：芳环上有供电基，能增加电子共轭程度，使荧光增强。定量分析方法的特点12/7/20224、影响荧光强度的外部因素溶剂的影响溶剂极性↑，荧光效率↑。温度的影响温度↑，荧光效率↓，荧光强度↓。溶液pH当荧光物质为弱酸或弱碱时，溶液pH的改变对荧光强度有很大影响。荧光熄灭剂的影响散射光的干扰瑞利散射和拉曼散射定量分析方法的特点12/7/20225、荧光光度计组成：光源、单色器、样品池、检测器。定量分析方法的特点12/7/20227、特点定量分析方法的特点灵敏度高，可达10-10g/ml～10-12g/ml；选择性好；适用于低浓度的溶液，浓度太大会有“自熄灭”作用；干扰因素多，须做空白试验。

12/7/2022三、色谱分析法1、原理（一）高效液相色谱法适用范围广、分离性能好、分析速度快、灵敏度高、分离分析同时进行。根据样品组分在固定相与流动相中的分配系数的不同而分离。2、特点定量分析方法的特点12/7/20224、在含量测定中的应用（1）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量方法：内标物+对照品→对照溶液，进样，测定，计算校正因子内标物+供试品→供试品溶液，进样，测定，计算含量（2）外标法测定供试品主成分含量供试品→供试品溶液对照品→对照品溶液进样，测定，计算定量分析方法的特点12/7/2022三、色谱分析法（二）气相色谱法载气为氮气；色谱柱为填充或毛细管柱。GC用于样品本身具挥发性，含有杂质等干扰的品种，如维生素E。定量分析方法的特点12/7/2022三、需验证的分析项目鉴别试验；杂质定量检查或限度检查；原料药或制剂中有效成分含量测定；制剂中其它成分（如降解物、防腐剂等）的测定；药品制剂溶出度、均匀度等检查中的溶出量等的测定方法。药品分析方法的验证

12/7/2022四、验证内容准确度精密度专属性检测限定量限线性范围耐用性

药品分析方法的验证

12/7/2022准确度（accuracy）

指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。（1）原料药空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测得值为M。（n=5）or用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较：药品分析方法的验证

12/7/2022规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。应报告已知加入量的回收率，或测定结果平均值与真实值之差及其相对标准偏差。准确度验证应用于：杂质定量、主成分的含量测定。数据要求：UV、HPLC、GC法98.0%-102.0%滴定分析法99.7%-100.3%体内药物分析85.0%-115.0%药品分析方法的验证

12/7/2022精密度（precision）指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。

重复性：在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度。中间精密度：同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。重现性：不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。精密度包括：重复性、中间精密度、重现性药品分析方法的验证

12/7/2022精密度表示方法

偏差(deviation,d)标准偏差（standarddeviation,S）相对标准差(relativestandarddeviation,RSD)药品分析方法的验证

12/7/2022精密度试验结果的RSD允许值RSD滴定分析法≤0.2%重量分析法≤0.5%氧瓶燃烧法、凯氏定氮法≤0.5%仪器分析法≤2%精密度验证应用于：杂质限量、主成分的含量测定。药品分析方法的验证

12/7/2022专属性（specificity）指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下，采用的方法能准确测定出被测物的特性

。

专属性验证应用于：鉴别反应、杂质检查、含量测定

。药物分析中考虑：杂质、降解产物、相关物质、制剂辅料。生物药物分析中考虑：内源性物质的干扰，代谢产物的干扰，同时服药时的干扰。药品分析方法的验证

12/7/2022检测限（limitofdetection，LOD）指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量。反映方法与仪器的灵敏度和噪音的大小；表明样品经处理后空白(本底)值的高低；常用%、ppm、ppb表示。

检测限的确定非仪器分析用目视法仪器分析用信噪比法：以能达到S/N≥2或S/N≥3(信噪比)时样品的最低浓度为检测限。检测限应用于：杂质的限量检查。药品分析方法的验证

12/7/2022定量限（1imitofquantitation，LOQ）指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度，常用%、ppm、ppb表示。定量限的确定仪器分析用信噪比法：以信噪比（S/N）为10∶1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。定量限应用于：杂质定量、降解产物定量。药品分析方法的验证

12/7/2022线性指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。

相关系数yxr=1xyr=-1xyr=0药品分析方法的验证

12/7/2022范围指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。原料药和制剂含量测定范围应为测试浓度的80%-120%制剂含量均匀度检查范围应为测试浓度的70%-130%溶出度或释放度中的溶出量测定范围应为限度的±20%线性和范围应用于：杂质定量、降解物定量、主成分含量测定。

药品分析方法的验证

12/7/2022耐用性指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度。耐用性验证应用于：鉴别、检查、含量测定。

体现耐用性的典型的变动因素有：被测溶液的稳定性样品提取次数时间试剂来源等药品分析方法的验证

12/7/2022验证项目鉴别杂质检查含量测定限量定量准确度--++精密度--++专属性++++检测限-+--定量限--+-线性--++范围--++耐用性++++药品分析方法的验证

12/7/2022一、概述定量分析样品的前处理方法

§4.3定量分析样品的前处理方法含卤素的药物

含金属的药物

含P、S、Se等的药物与脂肪链的碳原子直接相连与芳环直接相连三氯叔丁醇泛影酸

含金属的有机药物

有机金属药物

富马酸亚铁醋酸苯汞12/7/2022不经有机破坏经有机破坏直接测定配位滴定法氧化还原滴定法水解后测定碱水解酸水解经氧化还原分解后测定湿法破坏——凯氏定氮法干法破坏高温灼烧法氧瓶燃烧法二、定量分析样品的前处理方法前处理方法定量分析样品的前处理方法

12/7/2022（一）不经有机破坏的分析方法

直接测定法适用范围：

金属原子不直接与碳原子相连的含金属药物或某些C－M键结合不牢固的有机金属药物。

富马酸亚铁硫酸铈滴定富马酸亚铁溶于热H2SO4例：Fe2+邻二氮菲指示红色→浅蓝色

定量分析样品的前处理方法

12/7/2022（一）不经有机破坏的分析方法

经水解后测定法适用范围：

本法适用于含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物。三氯叔丁醇的测定例：碱水解后测定法

三氯叔丁醇定量分析样品的前处理方法

12/7/2022（一）不经有机破坏的分析方法

经水解后测定法适用范围：

本法适用于分子结构中的金属原子结合不够牢固的含金属的有机药物。

十一烯酸锌的测定例：酸水解后测定法

定量分析样品的前处理方法

EBTEDTA紫红色→纯蓝色12/7/2022（一）不经有机破坏的分析方法

经氧化还原后测定法碱性还原后测定

酸性还原后测定

利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量

定量分析样品的前处理方法

12/7/2022（一）不经有机破坏的分析方法

适用范围：

本法适用于碘原子直接与芳环连接的含碘有机化合物。泛影酸的测定例：经氧化还原后测定法1.碱性还原后测定

泛影酸

定量分析样品的前处理方法

12/7/2022（一）不经有机破坏的分析方法

泛影酸的测定例：经氧化还原后测定法1.碱性还原后测定

曙红钠为吸附指示剂黄色→玫瑰红色定量分析样品的前处理方法

12/7/2022（一）不经有机破坏的分析方法

碘番酸的测定JP（13）例：经氧化还原后测定法2.酸性还原后测定

碘番酸定量分析样品的前处理方法

12/7/2022（一）不经有机破坏的分析方法

葡萄糖酸锑钠的测定

例：经氧化还原后测定法3.利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量定量分析样品的前处理方法

12/7/2022（二）经有机破坏的分析方法

有机破坏方法：湿法破坏、干法破坏有机破坏目的：有机结合状态的金属及卤素→可测定的无机化合物

定量分析样品的前处理方法

12/7/2022（二）经有机破坏的分析方法

湿法破坏硝酸-高氯酸法硝酸-硫酸法硫酸-硫酸盐法其它湿法本法适用于血、尿、组织等生物样品的破坏；有机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一般呈高价态；本法不能用于含氮杂环药物的破坏。本法常用于含砷或锑有机药物的破坏分解；破坏得到的无机金属离子多为低价态。加入硫酸盐的目的：提高硫酸的沸点，以使样品破坏完全。防止硫酸分解损失。本法适用于大多数有机物质的破坏；破坏分解所得的无机金属离子均为高价态。本法不适用于含碱土金属有机药物的破坏。定量分析样品的前处理方法

12/7/2022湿法破坏蒸馏：吸收：测定:常量凯氏定氮消化蒸馏装置图凯氏定氮法定量分析样品的前处理方法

12/7/2022湿法破坏凯氏烧瓶K2SO4(提高消解温度)CuSO4(加快消解速度)硫酸碱液硼酸(吸收液)甲基红-溴甲酚绿指示剂硫酸滴定空白校正凯氏定氮法半微量凯氏定氮消化蒸馏装置图定量分析样品的前处理方法

12/7/2022（二）经有机破坏的分析方法

湿法破坏湿法破坏的注意事项：凯氏烧瓶空白试验通风橱中进行定量分析样品的前处理方法

12/7/2022（二）经有机破坏的分析方法

干法破坏干法破坏可分为高温炽灼法和氧瓶燃烧法

高温炽灼法用于含卤素、含磷药物和药物中砷盐的检查。加入无水Na2CO3、Mg(NO3)2、Ca(OH)2、ZnO等辅助灰化氧瓶燃烧法适用于含卤素及硫、磷、硒等药物的鉴别、检查和含量测定，特别适用于