肿瘤相关巨噬细胞表达miRNA-122对肝癌患者的作用

肿瘤相关巨噬细胞表达miRNA—122对肝癌患者的作用目的分析肿瘤相关巨噬细胞表达miRNA-122对肝癌患者的作用方法选取2015年1月～2018年1月于我院进行诊断的20例肝癌患者作为HCC-1组，另选取20例健康者作为C-1组，分别提取两组患者的外周血单核细胞采用q-PCR法检测两组患者的血清miRNA-122水平选取40只健康SD裸鼠，将其随机分为HCC组（n=2）与Scamble组（n=2。其中，HCC组采用皮下注射0.5ml肝癌Hep-2细胞悬液而Scamble组则皮下注射0.5ml生理盐水造模后，连续5d采用腹股动脉取血法收集两组裸鼠模型动脉血，分离获取外周单核细胞，以q-PCR定量分析技术检测TMA中miRNA-122水平。结果HCC-1组患者的miRNA-122水平显著低于C-1组，差异有统计学意义P＜0.05。造模2d后，HCC组裸鼠模型TAM中的miRNA-122水平显著低于Scamble组，差异有统计学意义（P＜0.05。结论肝癌患者及肝癌裸鼠模型 TAM中miRNA-122水平偏低，miRNA-122具有调控肝肿瘤生长的作用。[Abstract]ObjectiveToanalyzetheeffectofmiRNA-122expressionintumorassociatedmacrophagesonhepatocellularcarcinomapatients.MethodsAtotalof20casesofpatientswithhepatocellularcarcinomadianosedinourhospitalfromJanuary2015toJanuary2018wereselectedastheHCC-1group，andanother20healthypeoplewereselectedastheC-1group.TheperipheralbloodmonocytesinthetwogroupswerecollectedandthelevelofserummiRNA-122wastestedbyq-PCRtechnology.FortyhealthySDnudemicewereselectedandrandomlydividedintotheHCCgroup （n=20）andScamblegroup （n=20）.TheHCCgroupwasinjectedsubcutaneouslywith0.5mlHep-2cellsuspensionoflivercancer，whileScamblegroupwasgiven0.5mlnormalsaline.Aftermodeling，arterialbloodwascollectedfromtwogroupsofnudemicebyabdominalfemoralarterybloodsamplingfor5consecutivedays，andperipheralmononuclearcellswereisolatedandobtained.ThelevelofmiRNA-122inTMAwastestedbyq-PCR quantitativeanalysistechnique.ResultsThelevelofmiRNA-122intheHCC-1groupwassignificantlylowerthanthatintheC-1group，andthedifferencewasstatisticallysignificant（PTwodaysafterthelevelofmiRNA-122inTAMofnudemiceintheHCCgroupwassignificantlylowerthanthatintheScamblegroup，andthedifferencewasstatisticallysignificant（P＜0.05）.ConclusionThelevelofmiRNA-122inTAMoflivercancerpatientsandlivercancernudemiceislower.ThemiRNA-122playsaroleinregulatingthegrowthoflivertumors.[Keywords]Hepatocellularcarcinoma；Macrophages；MiRNA-122肝細胞癌（HepatocellularCarcinoma，HCC）的发病率在世界范围内位列第53[1-2]。有研究表明，在HCC展过程中，肿瘤相关巨噬细胞（tumorassociatedmacrophage，TAM）HCC相互影响、相互作用，促进肝癌发生和发展[3-4]。miRNA在免疫调控中起到重要miRNA-122TAMmiRNA-122表达对肝癌的影响，现报道如下。资料与方法20151月～2018120例肝癌患HCC-111938～64岁，平均岁；患20C-1155例；年龄3～61（41.87.140SD裸鼠，雄性，平均体重心提供[合格证号：SCXK（赣）2007-0005]HCCScamble20只。实时定量检测试剂盒、内切酶、荧光定量PCR粒提取试剂盒、人外周血淋巴细胞分离液于南昌长城生物公司购买。方法TAM10ml3000r/min10min，保留分层液及以上部分于-24q-PCRmiRNA-122水平。构建肝癌裸鼠模型HCC200.5mlHep-21×105个/mlScamble20只裸鼠于皮下0.5mlHCCScamble53000r/min10min，保留分层液及以上部分于-245d的外周血单核细胞。q-PCRmiRNA-122HCC-1C-1HCCScambleTAM6孔板中，经短暂孵育后提取RNAmiRNA-122U6CTmiRAN-122q-PCR定量分析[5-6]。统计学方法SPSS13.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数标准差tP＜0.05为差异有统计学意义。结果HCC-1C-1TAMmiRNA-122水平的比较HCC-1组患者的miRAN-122水平[（0.52±0.21）ng/ml]显著低于C-1组[0.840.43）ng/ml]，差异有统计学意义P＜0.05。HCCScambleTAMmiRNA-122水平的比较2d组裸鼠TAMmiRNA-122Scamble差异有统计学意义（P＜0.05（1。讨论M1）和Ⅱ型巨噬细胞（M2，二者均具有显著的可塑性、多功能性、极化性等特点[7-8]。但M1M2巨噬细胞生理功能是绝然不同的。M1是一种典型的活化巨噬细胞，疫监视功能。而M2巨噬细胞为替代性活化巨噬细胞，其功能与M1巨噬细胞相IL-10TGF-βM2巨噬细胞还具有清除异物、促进伤口愈合、血管再生等作用[9-10]。因此，M2T细胞增殖等方式降低肿瘤细胞免疫应答。TAM与肿瘤之间存在密切联系。一方面，肿瘤环境可影响单核巨噬细胞分TAMIL-6与IL-10因子可通过招募巨噬细胞聚集，产生PEG2，从而诱导并促进巨噬细胞分化为近M2TAMEGF、IL-6、CXCL-8等因子维持肿瘤细胞增殖，促进血管生成和抑制获得性免疫[12-13]。此外，TAM具有[14]，其水平与肿瘤生长和转移的下降率成负相关，且较多的临床研究表明，TAM增高与肿瘤患者预后不良成正相关[15-17]。（EG、FGF家族因子、TGF-β、血管内皮生长因子、趋化因子和细胞因子。IL-1β可促进肿瘤转移。在IL-1β基因的敲除鼠中黑色素瘤细胞或乳腺、前列腺肿瘤均不会转移，表明了IL-1β在肿瘤微环境中的重要性。在与肿瘤细胞共培养的实验中，通过在巨噬细TNF-αMMP[18]通过促进基质和血管生长因子的生成，TAM可促进肿瘤的发展。TAM产生和释放一些免疫调控因子，如 TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10和IL-12[19-20]。据报道，这些因子可以直接或间接抑制抗肿瘤免疫反应，大量的实验与临床研究表明，TAM与癌症的发展密切相关。TAM产生上皮生长因子血管内皮细胞、炎症细胞因子及趋化因子，促进肿瘤的存活、增殖和入侵[20]。此外局部炎症或肿瘤细胞释放的免疫抑制介质削弱了宿主的抗肿瘤反应并且促进肿瘤进展。miRNAsmiRNA-122在肝脏中是miR-122肝癌分化越差，暗示着不良预后。综上所述，肝癌患者及肝癌裸鼠模型TAM中的miRNA-122水平偏低，miRNA-122[]闫东，曾辉英，史仲华，等.甲磺酸阿帕替尼治疗中晚期肝细胞癌伴发乙型肝炎后肝硬化患者的临床疗效及安全性研究[J].2（2：129-131..2[J].2018，25（2：105-110..CD163[J].郑州大学学报（医学版，2017，52（4：438-442.LiH，HuangN，ZhuW，etal.Modulationthecrosstalkbetweentumor-associatedmacrophagesandnon-smallcelllungcancertoinhibitmigrationandinvasionbyginsenosideRh2[J].BmcCance，2018，18（1：579.MaugerF，KernaleguenM，LallemandC，etal.Enrichmentofmethylatedmoleculesusingenhanced-ice-co-amplificationatlowertemperature-PCR（E-ice-COLD-PCR）forthesensitivedetectionofdisease-relatedhypermethylation[J].Epigenomic，2018，10（5：525-537.Zhangal.Effectsof1-octyl-3-methylimidazoliumnitrateonthemicrobesinbrownsoil[J].JEnvironSci（Chin，2018，67：249-259..T水平和病情的相关性[J].中国临床保健杂志，2018，21（2：172-175.黄竹媛，甄俊平.“参与者”[J].2018，18（1：45-46..M2型肿瘤相关巨噬细胞与子宫内膜癌相关性研究[J].2018，34（5：555-558..IL-2IL-6及免疫功能的影响[J].中国老年学杂志，201，38（7：1609-1612..D-LPAIL-6水平影响研究[J].中华保健医学杂志，201，20（1：69-70.ZhangYL，LiQ，Yangal.SPON2promotesM1-likemacrophagerecruitmentandinhibitshepatocellularcarcinomametastasisbydistinctintegrin-RhoGTPase-hippopathways[J].CancerRes，2018，78（9：2305-2317.Fangal.Theheterogenictumormicroenvironmenthepatocellularcarcinomaandprognosticanalysisbasedontumorneo-vessels，sdα-SMA[J].OncolLett，2018，15（4：4805-4812.KakoschkyB，PleliT，SchmithalsC，etal.Selectivetargetingoftumorassociatedmacrophagesindifferenttumormodels[J].PLoSe8e0193015.Mengal.Monocytes/MacrophagespromotevascularCXCR4expressionviatheERKpathwayinhepatocellularcarcinoma[J].Oncoimmunolog，2017，7（3：e1408745.FujisakaY，IwataT，TamaiK，etal.Longnon-codingRNAHOTAIRup-regulateschemokine（C-C