细胞培养中的黑胶虫问题

Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercial细胞培养中的黑胶虫问题1.我实验室最近一次的情:我们前后从上海细胞中心买了三批细胞细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮也有见小黑点但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点时候在一夜之间暴长给养液加庆大素也济于事对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后见减少但是随后几天出现刚始怀疑操作有问题但由有经验的老师操作也出现这种问题，陆续对培养液，血清及胰酶进行培养也没发现问题。同时培养箱也有本实验室保存的3t3胞进行培养生快很快铺满仔细观察也可以见到少量的黑点。后来还有从军科院过来的Hela细，没有使用我们的血清，直接吸出多余的培养液后，进行培养，传代后用原来吸出的培养液进行培养，同样发现了问题。可以发现如下的特点：（）与胞共生，细胞长好或密度大的话，小黑点就少，反之则多（）对生素无效；（）可通过培养箱空气行污染；（）单培养液及血清培没发现问题。（）换冲洗后也无效。以下是论坛里我找来的相关帖子内容“黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物，“黑胶虫”的分类目前尚无鉴定确认。“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代“黑胶虫与细胞竞争性生长始时对细胞并没有什么影响当黑胶虫的数量多到一定程度的时候，细胞长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行所以“黑胶虫的污染常在培养条件改变胞接种密度降低细胞状态不佳时显现并使实验中断，尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。目前比较公认的观点认为“黑胶虫”是一种微生物殖缓慢但对细胞有损害量到一定程度可引起细胞死亡来源可能是细胞本身的污染或从动物取材时污染造成的污在全世界细胞实验室中普遍存在，解决该问题是一个世界性难题关于是什么的问题的讨论A.玻培养瓶中的类似氧化的东西（曾经有文献报道过）B.据这是黑胶虫，又有人是原生动物，好象也没个统一的说法C.据毒所和军科院鉴定是种寄生于牛血清内的一种原虫和履虫和变形虫有类似之处，然而由于课题经费不够而不能继续进行下去。D.有说纳级细菌其他的特点（）态上有些像细菌，直径约在0.5~1微米（）在400X倒置显微镜小，典型的布朗运动（不规则的原地小距离抖动）。（）细内好像也有存在，（）但不引起培养液混浊（）时稍长，细胞状态明显化，并最后死亡

大家的处理：1.换一点的血清（我觉着和血的关系不大）。2.如是贴壁细胞的话可无的PBS洗几次可一定程度上缓解若悬浮的话就太好处理拉以其中少加一滋养细小鼠腹腔内取的巨噬细胞种胞不分裂，过一阵就死掉了做抗体杂交瘤合的同志肯定知道加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效！还有就是实验环境要注意好，保持细胞间整个环境的洁净度。3.换进口的一次性塑料培养瓶4.建清理无菌室所有物品，重灭菌KMnO4熏按首次使用无菌室做，细胞重新复苏，。5.在液前先加入生理盐水并轻轻拍打，冲洗干净后再加入培养液，坚持天天洗，传代时加生理盐水再离心一次接密稍大一些一段时间后，虫子就会大大减少，对细胞的生长也不会有大的影响。6.有料称minocycline具一的作用，可以和换液结合起来使用。杀灭虫的一种估计养细胞，很多人到过所谓“黑胶虫”。最近养细胞，不幸的，也中奖，看到培养瓶里仿一夜之间出来的密麻麻的小黑东西真是有苦难言为曾在园里看过有“黑胶虫”帖子，不对付，没有效的杀灭方法，据说有专杀培养，但又有么好的方可以消除实室和培养内的污染？紫外照射、甲醛高锰酸钾熏蒸------些方法不其对“黑胶虫”确切效果有些对人毒害，有没有一种方法，即能杀死黑胶虫”人毒性又较小呢？想到了试新尔（扎溴）是否以，新洁灭是外用肤消毒剂，我们实验室常规来擦洗手工作台面。首先说明这东西在低下呈黑色状在高倍下呈状确实是不停地运动有些战友不相信它动也有人不相有这种所谓的“黑胶虫”只静下心来仔盯住一点你就会能注意到它实在运动我也录了段相，足以可以证明，太大，160多M题：杀灭处理黑胶的一种新法目：找到种高效且或无毒的灭处理“黑胶虫”的方法。方取有黑胶虫污染的六孔板内有2ml培养液污染的孔内别加入0.5ml、1ml、2ml、3ml的新洁灭原液，边边在倒置微镜下观。结加入洁尔灭时培养液内渐变得有些混浊且有絮状的东西形成（肉看是白色的），这际上是由黑胶虫”集而成（见下面的图），约2-3分钟后“黑胶虫”慢慢停止了运动。了进一步察其效果把六孔板放入37度培养继续培养第二天观察发现：有些仍成团絮但不会动有贴在瓶壁也不会动有些已由杆变成了圆球象是生了水肿一样，更会动了，计“黑胶”已死亡。这几种剂量的新洁尔灭果是一样。结：新洁灭与水或养基的比为1：时即杀死“黑虫”（更的浓度没有试，当时杀虫心，就想多点，反正不贵，一瓶新洁尔灭才7多钱）。以喷洒或洗用于实验室或培养内消毒若胞不珍贵不想要了也以用来杀灭其中的“黑虫”若细珍贵，不要轻尝试，除你不想要；你试了，本人概不负责

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