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文档简介
胰蛋白酶
Trypsin生物技术EC号和来源胰蛋白酶Trypsin(Parenzyme)为蛋白酶的一种EC3.4.21.4。
牛的胰蛋白酶氨基酸残基223个,分子量为23300,活性部位的丝氨酸残基是不可缺少的丝氨酸蛋白酶。除存在于脊椎动物外,还存在于蚕、海盘车、蝲蛄、放线菌等范围广泛的生物体中。适应条件胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关,在pH为8.0、温度为37℃时,胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。终止消化时,可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。识别序列胰蛋白酶水解精氨酸或赖氨酸的羧基和别的氨基酸形成的肽键蛋白质水解酶,能选择地水解蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链,能消化溶解变性蛋质,对未变性的蛋白质无作用酶活力胰蛋白酶活力单位的定义规定为:以BAEE为底物反应液pH8.0,25℃,反应体积3.0ml,光径1厘米的条件下,测定A253,每分钟使A253增加0.001,反应液中所加入的酶量为一BAEE单位。以N-苯甲酰-L—精氨酸乙酯为底物,用紫外吸收法进行测定的原理是:BAEE在波长253nm下的紫外吸收远远弱于苯甲酰L—精氨酸(英文缩写为BA)。在胰蛋白酶的催化下,随着酯键的水解,苯甲酰L—精氨酸逐渐增多,反应体系的紫外吸收宜随之相应增加。生活应用碱性蛋白酶是目前市场上流行的洗涤添加剂,能大幅度提高洗涤去污能力,特别对血渍、汗渍、奶渍、油渍等蛋白类污垢,具有独特的洗涤效果。使用条件底物浓度10~25%,温度50~60℃,PH值6.0~8.5,反应时间3~6小时(根据要求可长可短)添加酶0.03~0.06%(以水解溶液重量计)保存:5℃保藏,保质期一年;25℃储存,酶活保存期至少3个月以上医学上应用能使脓、痰液、血凝块等分解、变稀,易于引流排除,加速创面净化,促进肉芽组织新生,此外还有抗炎症作用。临床上用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤、瘘管等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等。喷雾吸入,用于呼吸道疾病。也可用于治疗毒蛇咬伤。还常用于动物细胞培养前对组织的处理。工业应用工业上用于皮革制造生丝
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