生化与细胞专题-离心机高效液相色谱

谱基本理吸附色谱组分分离。常用的吸的物质。分配色谱称固定相；另一相为液体或气体，称流动相。常用的载体有硅胶、硅藻土、硅镁型排阻色谱或动相。 般为水或含有法。高效液相色谱(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC)一般指采谱的基础上引入GC的理论和技术并加以改进而发展起植物学家茨维特（t，1872-1919）从年起年月学学会生物学会议上的贡▲（采用吸附色谱）成功分离了叶绿素a和叶绿素▲发明了伟大的色谱希腊语chroma（色彩）graphos（图谱）德语英语ChromatographyChromatographiccolumnStatinaryphase Mobilephaseoreluent 塔板理论，这是在 此外，将一种液体固定在适当的载体上，使第二种液体流过前者而实现分离，也是一个很重要的成就。☆提出了色谱法进一步发展最有远见 ：一是“流动相1958年生物化学家斯坦因（W.H.Stein）和莫（e）研制出氨基酸分析仪（谱仪），并用它确定了核糖核酸的分子结构。此后，氨基酸分析仪一直成为蛋白质和酶结构的重要工具，为此他们获得1972年化学奖。克兰（Kirkland，1969）三个研究小组分别高效液☆高压泵:高精密度流量、高压和耐腐蚀流路通道（克服细填料带来的流速慢的缺点，同时加快了传质过程1975年，Small,Stevens和Baumen“NovelIonExchangeChromatographicMethodUsingConductimetricDetection”一文，采用电导抑制柱-检测器检测离子交三、高效液相色谱法的特1高效液相色谱和气相色谱的比较分析对象（应用）,,超过400。随着气相色谱技术的发展，特别是高温固定对于那些没有足够的挥发度,且热不稳定的物质，特别谱则，的物质可能适合于液相色谱的分离分析。换句话说，只谱的分析对象。通常是气体,它仅起运载样品的作用，一分有一定的亲和力(排阻色谱除外它会与固定相展开对组分的剧烈竞争,因而对分离起很大2）LC的线速度比气相色谱约慢(2~3)个数量级虽然LC的纵向扩散可以忽略,但“柱外效应”的重要性更为突出。3）100倍密度大约大1000倍。LC需液体具有表面张力而气体没有这就成了TLC和PC展LC中样品回收比较容易,可用于规模（色谱柱）2高效液相色谱和经典液相色谱的比填料的差异经典液相色谱的填料颗粒粗（粒径大于从而达到传质阻力小分离效率高的（3~10）m的高效固定 C将柱分离技典液相色谱相比使用时更方便对操作者的依赖3高效液相色谱的特点采用高效色谱柱、高压输液设备和高灵敏度检测器,从而实四、高效液相色谱分析原高效液相色谱分析的流高效液相色谱分析的分离过高效液相色谱1、高效液相色谱仪的输液系洗装置可以将两种或两种以上的不同极性溶剂，按一定程2、高效液相色谱仪的进样系的容积是固定的，因此进样重复性6-portHPLCinjection3、高效液相色谱仪的分离系又出现了全多孔型微粒担体。这种担体粒度为5—10um，度高，检测下限约为10-10g/ml 小检出限约为10-7g/ml，不能做痕量分析。此物。在紫外光激发下，荧光活性物质产生荧光，由光电倍二极管阵列检测器（diode-arraydetector以光电二极管阵列（或CCD阵列，硅靶管等）作为的信号，然后，对二极管阵列快速扫描数据，得到的（4）（elec）chemicaldetector （5）（chemicaliluminescence 势反应或反应产物，当它们从激发态返回基态时，就 五、高效液相色谱的类六、正相色谱与反相色1、正相色硅≈氧化铝柱>氨基柱>二醇基柱>基二、反相色碳十八柱≈碳八柱>苯基柱>碳四柱>碳三柱>碳一 基柱>>非键合硅胶七、高效液相色谱法的应生物活性物质和天然产物；合成和高分子化合物，以及无机和有机离子型化合物。它们涉及到工业产品、农业产品、食品、药物和环境污染物等。据统计，约0%的有机化合物可以用高效液相色谱分析，而气相色谱仅能分析其余%的有机化合物。图给出适合于各种高效液相色谱方法分离的分子量范围。可见高效液相色谱的应用远比气相色谱广泛。目前，高效液相色谱在有机化学、生化、医学、药物临床、化工、食品卫生、环保检测、商检等方面都有广泛的应用。下面就高效液相色谱的一些应用领域进行简单介绍。 效成分的分离、及纯度测定以及临床医学的药,除聚合物外,约80%的药物都能用高效液相食品分析高效液相色谱在食品分析中的应用包括①食品本身组成,特别是营养成分，如糖、有机该法特别使用于分子量大,挥发性低、热稳定性精细化工产品分析对于一些具有教高分子量和较高沸、、、品可C分析。于，于色谱效多。高效液相色谱分离类型选定量方法可分以下三种1、 Fi--被测物校正因子Ai--被测物峰面积WS--内标物重量Fs--内标物校正因子As--内标物峰面