讲义-分子遗传检测实验室化

常见疾病及检 （DMD/BMD）（X性连锁隐性遗传病，DMD部分色体隐性遗传病，α珠蛋白缺失或突变，β珠蛋白突变）等 常用PCR-多重连接探针扩增技术实时荧光 PCR-时间飞行质谱生 荧光原位杂交临床分 技术发展历程：几个里程1953年:DNA双股螺旋的发1963年:1972~1977年:重组DNA技术、核 方1983年:PCR测定技 2007年--新一代高通 技？分子遗传检 医医

70%以上信来预 监 预

精准医学（PrecisionMedicine新生 计划（BabySeq

NIPT的优越性：对T21T18和T13阳性预测（PPV）从标准筛查的3.4%、14.0%和提高到80.9%、90.0%NortonMEetal.NEJM 国内回 国内1999年4月29-30日：《扩增技术临床应用专先进。（2）暂停临床应用有助于规范管理， 管理。（5）上岗培训。（6）应有室内质控和参。（8）成立咨询 国内 办法》（卫办医政发〔2010〕194号） 导则》（卫办医政发〔2010〕194号）What（必要条件标本是正确的和 环境条件是好的：温湿度、仪器设备状态是好的

释及临床结释及临床

运送和保（分析前

是有能力的：外部 培训用（分析后

制和室间质量评价（ 间比对患者疾病 和治

检验申请单和标 、运送和保存中的关键 用于NIPT的外周血cffDNA 怀孕4能检出，其在血液中的半衰期只有16min，出现2小时后即cffDNA在循环中较稳定，可能与来源于胎盘的微粒能够免受核酸酶降解CffDNA随着妊娠孕龄增加而增多 三个月每周增加21％，在中期上升速度较慢，在孕期的后cffDNA在-20℃下可稳定超过4年，但血浆样本在-20℃下长cffDNA每月以-0.66GE/ml速率降解Who:正常孕妇(产筛高风险≥35岁？孕周<12周？双胎 ？夫 异常When：>12周(-26+6What: 分析物理分区及空气流向试剂准备产前筛查与产 （ 组低拷试剂准备文库扩 文库扩

标本与文 缓冲 缓冲标本与文 文库扩增与检测区植入前胚胎遗传 ( 组低拷 试剂准备 试剂准备 文库检测区空气流空气流空气流空气流空气流空气流空气流缓冲缓冲缓冲缓冲缓冲缓冲缓冲缓冲走 标与文区遗传 +肿 与治疗（杂交捕 技术 验证 标与文区电泳空气流区空气流空气流空气流DNA空气流空气流空气流缓冲间走试剂准关于“分区”、缓冲间和生试剂准

标本与

至少具体需要多少个区，同样是 化”的，以“工作有序、互不干扰、缓冲间的功能是“控制空气的流向”。生物安全柜可考虑“A2通风换试剂方法的可性能验证性能确认精密度（重复性准确性（正确度，方法学比较“性能验证”（“verification”）定“verification”：broadlyas“confirmationthroughtheprovisionofobjectiveevidence,thatspecifiedrequirementshavebeenfulfilled”.（广义为通过提供客观 CLIAusestheterm“verification”：specificallytorelatetoconfirmationthatthelaboratoryusingatestcanreplicatethemanufacturer’sperformanceclaimswhenthe accordingtothepackageinsert.（CLIA性能验证术语特指

可 developedtests,“性能确认”（“validation”）定TheFDAandISObothdefinetheterm“validation”as“confirmationbyexaminationandprovisionofobjectiveevidencethattheparticularrequirementsforaspecificintendedusecanbeconsistentlyfulfilled”. TheFDAandISOtermsforverificationandaresimilar,withthedistinctionhavingtodowithintendeduse.（性能验证和性能确认Theterm“intendeduse”inthese sisestablishedbythemanufacturerordevelo laboratoryatthetimeofassaydevelopmentandhastodowiththepurposeandpopulationforwhichthetestwasintended(e.g.,diagnosis,followingtreatment,etc.).Relevantperformancecharacteristicsarethendeterminedbasedontheintendeduseofthetest.Somepeopleinterpret“intendeduse”asreferringtotherelevantclinicallaboratoryinwhichthe performed,ratherthanthemanufactureror laboratorythuscausingconfusionTheWorldHealthOrganization(WHOdefinesvalidationas“theaction(orprocess)ofprovingthataprocedure,process,systemequipmentormethodusedworksasexpectedandachievestheintendedresult”.（WHO将validation定义为，证明所“validation”通俗一点的定theterm“validation”willbeusedtorefertoyticperformancecharacteristicsthatneedtobeinitiallyestablishedatthetimeofassaydevelopment.（指在测定方法研发时，最结果报告的内容遗传检测报告至少要包括的将报告与特定患者联系在一起的惟咨 检验项目及所使用的方法（包括检测范围及检测局限性标本类标本检 名称，地点，包括咨检验结

MM20-A.(vol.32.QualitymanagementforApprovedguideline根据检测特性和其它提供 的信息对结果的解报告批准人的签报告日适当时，还应包括：建议的有资质的遗传咨 ；对其他家庭成的意义；进一步的检测建报 *样本编*临

*送检科

*送检医生*采样日*采样时*样本类型 *样本的处理*检测方法主要检测仪器*结果报告*检测项*检测结 参考值/参考范式供参考的标准式

*结果解释（结果的总体描述及临床意义*检测方法的主要性能指标(至少含检测范围及检测下限*检测局限性进一步检测的建议 其它(对其他可能对检测结果产生影响的问题描述*收件日期 *检测日期 *报告日期*检测者 *审核者备注 X号第页，共页BrownsteinBrownsteinGA,etal.GenomeBiologyTheCLARITY结果解释及与临床基本概念的重 基本

FP(假阳性TN（ ）

（假阳性TP(真阳性

TP（真阳性）FP（假阳性FN( TP（真阳性）FN（ TN( 预测值TN（ ）FN（ ）概念不清造成 NicolaidesKH.PrenatDiagnWrightD,etal.FetalDiagnTher2014;35:NortonME,etal.NEnglJMed.2015;372(17):1589-NIPT拷贝数变异（copy-number嵌合（maternal限制性胎盘嵌合（confinedplacental 综合征（the in孕妇患 原游离DNA浓度（Fetal ☆孕妇体重指数（maternalbodymassindex，BMI）：体重高的孕妇， 0.1%。 ，每周增加约1% 非整倍体（fetalaneuploidy）类型：21三体 单胎和多胎妊娠（singletonandmultiplegestations）：如果双胞胎是同种基 一些，因为每 ：GC含量中等 使用MPS检测结果最好，例如21和 GC含量低，因此需要校正GC偏倚，才能提高13三体检测的对于常见的非整倍体，虽然所有患者不管其风险状态，均可以选择游离作为一个筛查策略，但选择该检测的患者应该了解在所有可选择的筛查和方法中这种筛量方法的益处和局限性。ObstetGynecol.2015Jun29.[Epubaheadofprint]NIPT结果应如何报

ObstetGynecol.2015Jun29.aheadof 没有最好只有更好?硬件：（分区、环境条件等）、仪器设备及试剂、（持证上岗） ：质量保证体系（包括标本运送和保存及质检、仪器设备校准、试剂性SOP编写、培训、室内质量控制和 概念的重要性尊敬 ABI7300，用的是 在三楼，现在即使加样操作放在同一幢楼房的一楼进行，其余如混匀、温育、离心 ，扩增也在 对照孔所加对在空气中的时间很短）， 26左右。请问这是什么原因，怎么刘

此外，在出现严重污尊敬

在污染已经完全清质量管理的 标准操作程序（SOP） 的“最高标准SOP等于试剂盒说明书吗 因此高于相关标有可操作性的SOP是质量管理的 有一个S