土壤中分解尿素的细菌的分离和计数(1)2022优秀文档VIP

课题2土壤中分解尿素的细菌的分别和计数一、课题背景1、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才干被植物利用。2、细菌利用尿素的缘由土壤中的细菌分解尿素是由于它们能合成脲酶CO(NH2)2脲酶+CO2NH3+H2O3、常见的分解尿素的微生物芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。4、课标题的①从土壤中分别出可以分解尿素的细菌②统计每克土壤样品中终究含有多少这样的细菌一.研讨思绪㈠.挑选菌株㈡.统计菌落数目㈢.设置对照1、实例：启示：寻觅目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻觅。缘由：由于热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物只需Taq细菌被挑选出来。DNA多聚酶链式反响是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求运用耐高温〔930C〕的DNA聚合酶。㈠.挑选菌株要分别一种微生物，必需根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；配置适宜的培育基方法：⑴抑制大多数微生物生长⑵呵斥有利于该菌生长的环境，结果：培育一定时间后，该菌数量上升，再经过稀释涂布平板法等方法对它进展纯化培营养别。2、实验室中微生物的挑选原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先预备好的信封中。当样品的稀释度足够高时，培育基表多少活菌。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁衍，而遭到抑制，所以用此培育基就可以选择出分解尿素的微生物。间接计数法〔活菌计数法〕假设培育物混入其他氮源，那么菌落形状多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。③统计的菌落往往比活菌的实践数目低。◆分别不同的微生物采用不同的稀释度方案二：将A同窗配制的培育基在不加土样的情况下进展培育，作为空白对照，以证明培育基能否遭到污染。能合成脲酶的微生物所需求的碳源和氮源分别是()这些条件是：一种细菌、恒定容积的培育基，液体培育基、定时测定细菌总数。解析：细菌群体生长规律的测定是人们在一定条件下进展的。培育不同微生物往往需求不同培育温度。C．接种一个细菌D．及时补充耗费的营养物质芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先预备好的信封中。15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素的细菌的分别与计数所需培育基：①从物理性质看此培育基属于哪类？从功能上属于哪类培育基？固体培育基②在此培育基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素选择培育基培育基的氮源为尿素，只需能合成脲酶的微生物才干分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁衍，而遭到抑制，所以用此培育基就可以选择出分解尿素的微生物。4、培育基选择分解尿素的微生物的原理选择培育基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培育基。1、显微镜直接计数：利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。㈡.统计菌落数目：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需求相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以察看；缺陷2.间接计数法〔活菌计数法〕〔1〕常用方法：每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。当样品的稀释度足够高时，培育基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，经过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。〔2〕原理：稀释涂布平板法。本卷须知①为了保证结果准确，普通选择菌落数在30——300的平板上进展计数。②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培育计算出菌落平均数。③统计的菌落往往比活菌的实践数目低。④涂布平板法所选择的稀释度很重要，普通以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。设置对照的主要目的是排除实验组中非测试要素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。㈢.设置对照：设置对照的方法：空白对照：不给对照组任何处置要素。条件对照：给对照组施以部分实验要素，但不是所要研讨的处置要素。本身对照：对照组和实验组都在同一研讨对象上进展。相互对照：不单设对照组，而是几个实验组相互对照。A同窗的结果与其他同窗不同，能够的解释有两种。一是由于土样不同；二是由于培育基污染或操作失误。种内斗争反响了种内生物对生存空间和生活资源的争夺。要分别一种微生物，必需根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；霉菌：25～28℃的温度下培育3～4d。恒定容积是给微生物提供一定的生存环境；A．在液体培育基上进展B．至少接种一种细菌液中的一个活菌，经过统计平板上的同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。在这些条件下，才干测定出细菌的生长规律。人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。随着微生物个体数目的添加，每个个体的生存空间越来越少，营养物质也越来越少，每个个体对生存空间和资源的争夺也越来越猛烈，种内斗争就越来越猛烈。3、土壤中分解尿素的细菌的分别与计数所需培育基：②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培育计算出菌落平均数。结论：为获得不同类型的微生物，就需求按不同的稀释度进展分别，同时还该当有针对性地提供选择培育的条件。芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。◆应在火焰旁称取土壤10g。小结：经过这个事例可以看出，实验结果要有压服力，对照的设置是必不可少的。方案一：由其他同窗用与A同窗一样土样进展实验方案二：将A同窗配制的培育基在不加土样的情况下进展培育，作为空白对照，以证明培育基能否遭到污染。结果预测：假设结果与A同窗一致，那么证明A无误；假设结果不同，那么证明A同窗存在操作失误或培育基的配制有问题。二.实验的详细操作㈠.土壤取样从肥沃、潮湿的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先预备好的信封中。◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在运用前都要灭菌。㈡.制备培育基：制备以尿素为独一氮源的选择培育基。◆应在火焰旁称取土壤10g。◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进展◆分别不同的微生物采用不同的稀释度缘由：不同微生物在土壤中含量不同目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板[三]样品的稀释为什么分别不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围一样吗？缘由：土壤中各类微生物的数量〔单位：株/kg〕是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。结论：为获得不同类型的微生物，就需求按不同的稀释度进展分别，同时还该当有针对性地提供选择培育的条件。㈣.取样涂布◆实验时要对培育皿作好标志。注明培育基类型、培育时间、稀释度、培育物等。◆假设得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，那么阐明稀释操作比较胜利，并可以进展菌落的计数，假好像一稀释倍数的三个反复的菌落数相差较大，阐明实验不准确，需求重新实验。㈤.微生物的培育与察看在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培育时间缺乏而导致脱漏菌落的数目。培育不同微生物往往需求不同培育温度。细菌：30～37℃培育1～2d放线菌：25～28℃培育5～7d霉菌：25～28℃的温度下培育3～4d。微生物的培育与察看三.结果分析与评价1.经过对照实验，假设培育物有杂菌污染，菌落数偏高；假设培育物混入其他氮源，那么菌落形状多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。2.提示：选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最适宜。同一稀释倍数的三个反复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不准确。四、操作提示无菌操作做好标志规划时间五.课外延伸在以尿素为独一氮源的培育基中参与酚红指示剂。培育某种细菌后，假设PH升高，指示剂将变红，阐明该细菌可以分解尿素。测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培育基上培育，大肠杆菌菌落呈现黑色，经过记述得出水样中大肠杆菌的数量。大肠杆菌呈黑色中心,有或无金属光泽大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征本课题知识小结:六、例题解析例1．对细菌群体生长规律测定的正确的表述是A．在液体培育基上进展B．至少接种一种细菌C．接种一个细菌D．及时补充耗费的营养物质解析：细菌群体生长规律的测定是人们在一定条件下进展的。这些条件是：一种细菌、恒定容积的培育基，液体培育基、定时测定细菌总数。在这些条件下，才干测定出细菌的生长规律。测定时只能用一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的生长；恒定容积是给微生物提供一定的生存环境；液体培育基才干经过样品推测细菌总数。假设接种多种细菌，那么会发生种间斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证一定的接种量。答案：A例2．在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最猛烈的时期是A．调整期B．对数期C．稳定期D．衰亡期解析：种内斗争是一种生态要素。种内斗争反响了种内生物对生存空间和生活资源的争夺。在生活空间富余，营养充足的时候，种内斗争的程度是比较低的。随着微生物个体数目的添加，每个个体的生存空间越来越少，营养物质也越来越少，每个个体对生存空间和资源的争夺也越来越猛烈，种内斗争就越来越猛烈。由此可知，在稳定期的种内斗争最猛烈。在衰亡期，微生物的数目曾经开场减少，pH曾经极度不适于微生物的生存，次级代谢产物积累到很高的程度，这时的微生物的生存斗争主要是与无机环境的斗争。答案：C1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是〔〕A.在液体培育基上进展B.至少接种一种细菌C.接种一个细菌D.及时补充耗费的营养物质2.运用选择培育基的目的是〔〕A.培育细菌B.培育真菌C.使需求的微生物大量繁衍D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别3.能合成脲酶的微生物所需求的碳源和氮源分别是()A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3C.CO2和尿素D.葡萄糖和尿素实际训练ACD4.以下说法不正确的选项是〔〕A.科学家从70－80度热泉中分别到耐高温的TaqDNA聚合酶B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试要素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。5.为培育和分别出酵母菌并淘汰杂菌，常在培育基中参与〔〕A.较多的氮源物质B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物D.高浓度食盐BC例3．〔2005年江苏〕抗生素作为治疗细菌感染的药物，其高效性和宏大的经济价值使抗生素工业经久不衰。其中青霉素的发现和应器具有划时代的意义。⑴青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型是