高中生物核心概念高考复习课件-微生物培养与应用B

微生物培养与应用B主要内容：大肠杆菌的纯化培养分解尿素的细菌的计数分解纤维素微生物的分离微生物培养与应用B主要内容：类型具体内容微生物的培养利用微生物的培养与分离某种微生物数量的测定培养基对微生物的选择作用利用微生物进行发酵来生产特定的产物发酵过程中亚硝酸盐含量的测定技术方法利用考纲要求：微生物的培养和利用大肠杆菌的纯化培养类型具体内容微生微生物的培养与分离某种微生物数量的测定培养基大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：培养基、培养皿分散成单个细胞,形成单个菌落大肠杆菌的纯化培养1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至10倒平板约50℃防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基大肠杆菌的纯化培养倒平板约50℃防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：⑴平板划线法：菌种划3个平板1个不划线1.接种：接种环防止划破培养基（重复实验）（空白对照）大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆平板划线法大肠杆菌的纯化培养平板划线法大肠杆菌的纯化培养问题讨论为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。大肠杆菌的纯化培养问题讨论为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：菌液微量移液器大肠杆菌的纯化培养6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：b.涂布平板：不超过0.1ml各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照滴灼试涂稀释103倍稀释104倍稀释105倍大肠杆菌的纯化培养⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：b.涂布平板：不超过0.⑴平板划线法：大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：1.接种：⑵稀释涂布平板法：2.培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37℃恒温箱中培养12h～24h后，观察并记录大肠杆菌的纯化培养⑴平板划线法：大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养菌种的保藏：1.临时保藏：试管固体斜面培养基上4℃2.长期保存：菌种易被污染、变异甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃大肠杆菌的纯化培养菌种的保藏：1.临时保藏：试管固体斜面培养基上4℃2.长期保分解尿素的细菌的计数分解尿素的细菌的计数尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3细菌脲酶分离产生脲酶的细菌分解尿素的细菌的计数尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。细菌脲酶分离产生筛选菌株提出的问题

—如何寻找耐高温的酶？解决问题的思路—寻找耐高温环境；原理—高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌，耐高温菌种提取耐高温酶。分解尿素的细菌的计数筛选菌株分解尿素的细菌的计数筛选菌株

KH2PO41.4gNaHPO42.1gMgSO4

H2O0.2g

葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？

此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？?碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。分解尿素的细菌的计数筛选菌株

KH2PO41.4g该培筛选菌株

1、选择培养基：

允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。2、菌株：

纯且活状态所保存的菌种。分解尿素的细菌的计数筛选菌株

1、选择培养基：分解尿素的细菌的计数统计菌落数目：

1、活体计数法（稀释涂布平板）（1）操作方法：

稀释涂布平板→统计菌落数（2）原理：1个菌落→1个活菌（3）统计原则

①选30∼300个菌落的平板统计

②每个稀释度取3个平板取其平均值为什么？分解尿素的细菌的计数统计菌落数目：为什么？分解尿素的细菌的计数例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。

2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。

你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）

乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值?分解尿素的细菌的计数例：两位同学用稀释涂布平板法测定同甲：没统计菌落数目

1、活菌计数法（4）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此统计结果一般用菌落数表示。每克样品中的菌株数=（C/V)*MC:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V:所用稀释液的体积；M:稀释倍数。为什么？分解尿素的细菌的计数统计菌落数目为什么？分解尿素的细菌的计数2、显微观察法：比例计数或直接计数（血球计数板）计数室（中央大方格）的长、宽和高分别为：1mm

、1mm和0.1mm计数室的容积：0.1mm3

（万分之一毫升）取样：稀释一定倍数的菌液分解尿素的细菌的计数2、显微观察法：比例计数或直接计数（血球计数板）计数室（中央分解尿素的细菌的计数分解尿素的细菌的计数酵母细胞数/ml＝80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数计数顺序：左上→右上→右下→左下压在格线的，只统计左线和上线3.称重法：一个细胞（细菌）一般重约10－12～10－13g分解尿素的细菌的计数酵母细胞数/ml＝80小格内酵母细胞个数/80×400×104.比浊法记数

当细菌浓度达到107个/ml时,培养基会浑浊4.比浊法记数当细菌浓度达到107个/ml时,培养基会浑浊利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别得到以下两种统计结果。1、A同学筛选出150个菌落。

2、B同学筛选出50个菌落。B认为A的培养基被杂菌污染了，或培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中生长。A确认自己的操作无误，但也拿不出能令人信服的证据。

请你帮助A同学改进实验，提供具有说明了的证据。设置对照—同等条件下，培养空白培养基?分解尿素的细菌的计数利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对应稀设置对照

1、设置对照的目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。对照实验是指除了

被测试

的条件外，其他条件都

相同

的实验。满足该条件的称为

对照组，未满足该条件的称为

实验

组。分解尿素的细菌的计数设置对照分解尿素的细菌的计数尿素培养基未接种的尿素培养基10-510-4分解尿素的细菌的计数尿素培养基未接种的尿素培养基10-510-4分解尿素的细菌的实验过程

（一）土壤取样

1、取样的位置：土壤，天然培养基，含有大量的微生物，其中70∼90％是细菌。在富含有机质的土壤层的3∼8cm处中分布着绝大多数的细菌。

2、取样要求：铲去表层土。

菌落计数配制土壤溶液系列稀释涂布平板与培养分解尿素的细菌的计数实验过程（一）土壤取样

菌落计数配制土壤溶液系列稀释（二）样品稀释（1）测细菌数：一般用104、105、106稀释液（2）测放线菌：一般用103、104、105稀释液（3）测真菌数：一般用102、103、104稀释液原则：确保平板上的菌落数在30∼300之间。（三）微生物的培养与观察

1、接种：用适当的稀释液作涂布平板

2、培养：细菌：30∼37℃，1∼2d;

放线菌:25∼28℃,5∼7d;

霉菌:25∼28℃,3∼4d.3、观察：a.每24h统计一次菌落数目

b.以“稳定菌落”为观察对象

分解尿素的细菌的计数（二）样品稀释分解尿素的细菌的计数分解尿素的细菌的计数分解尿素的细菌的计数（四）鉴定鉴别培养基：不影响微生物的生存酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性分解尿素的细菌的计数（四）鉴定分解尿素的细菌的计数分解纤维素微生物的分离分解纤维素微生物的分离纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素纤维二糖葡萄糖C1酶Cx酶葡萄糖苷酶分解纤维素微生物的分离背景知识纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种滤纸崩溃法纤维素酶活性的测定实验：分解纤维素微生物的分离背景知识滤纸崩溃法纤维素酶活性的测定实验：分解纤维素微生物的分离背景刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。分解纤维素微生物的分离背景知识刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤实验流程示意图实验流程示意图37一、实验目的二、实验原理三、所需仪器、材料、用具和药品四、实验的方法和步骤五、分析结果实验设计分解纤维素微生物的分离一、实验目的二、实验原理三、所需仪器、材料、用具和药品四、实一、实验目的1、利用特定的选择培养基和鉴别培养基从土壤中分离分解纤维素的微生物。2、掌握刚果红染色的机理和操作。分解纤维素微生物的分离实验设计一、实验目的1、利用特定的选择培养基和鉴别培养基从土壤中分离1、以纤维素为碳源的选择培养基能选择出分解纤维素的微生物。2、刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。二、实验原理分解纤维素微生物的分离实验设计1、以纤维素为碳源的选择培养基能选择出分解纤维素的微生物。2三、所需仪器、材料、用具和药品1、实验仪器与用具除了分离分解尿素的细菌中用到的有关仪器用具外，还需要恒温振荡培养箱。2、材料与药品分解纤维素微生物的分离实验设计三、所需仪器、材料、用具和药品1、实验仪器与用具除了四、实验的方法和步骤1、配制培养基2、灭菌3、土壤取样5、样品稀释6、涂布接种4、选择培养7、筛选菌落分解纤维素微生物的分离实验设计四、实验的方法和步骤1、配制培养基2、灭菌3、土壤取样5、样配制培养基分解纤维素微生物的分离实验设计灭菌配制培养基分解纤维素微生物的分离实验设计灭菌酵母膏：实际上是膏状的酵母抽提物，酵母抽提物是国家行业标准的规定名称。酵母抽提物以酵母为原料，采用自溶法或加酶水解法工艺，经分离、脱色而成的，含氨基酸、肽、多肽及酵母细胞水溶性成分的产品。水解酪素：微生物培养基的氨基酸氮源，由酪蛋白水解得到，常见商品名称为水解酪素或酶解酪素。酪蛋白水解后富含21种氨基酸，氨基酸种类齐全。因此常用于制备培养基。CMC-Na：羧甲基纤维素钠，是天然纤维素经化学改性后得到的纤维素衍生物，是纤维素的羧甲基醚化物。分解纤维素微生物的分离实验设计酵母膏：实际上是膏状的酵母抽提物，酵母抽提物是国家行业标准的44思考：1.为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？2.将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？土壤取样将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般将纸埋于深约10cm左右腐殖土壤中。分解纤维素微生物的分离实验设计思考：土壤取样将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚“浓缩”作用将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下振荡培养1-2d，直至培养液变混浊。吸取一定量的培养液，转移至另一瓶新鲜的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变混浊。（富集培养）选择培养根据样品中目的菌株数量来确定是否需要。分解纤维素微生物的分离实验设计“浓缩”作用将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥样品稀释分解纤维素微生物的分离实验设计涂布接种鉴别纤维素分解菌的培养基样品稀释分解纤维素微生物的分离实验设计涂布接种鉴别纤维素分解挑选产生透明圈的菌落。挑取产生明显的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C－370C培养，可获得纯培养。筛选菌落分解纤维素微生物的分离实验设计挑选产生透明圈的菌落。挑取产生明显的透明圈的菌落，一刚果红染色法方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应。方法二：在倒平板时就加入刚果红。分解纤维素微生物的分离实验设计刚果红染色法方法一：方法二：分解纤维素微生物的分离实验设计微生物培养的基本程序培养基的配制—称量→溶化→调pH→分装→包扎灭菌（高压蒸汽灭菌）接种固体培养基—平板划线（接种环）、稀释涂布（玻璃刮刀）液体培养基—用接种环蘸取菌液（扩大培养）培养固体培养基—倒置，37℃恒温培养箱，24h左右液体培养基—空气浴或水浴培养箱（摇床），震荡培养固体培养基—划线的末端出现单菌落液体培养基—培养液变浑浊观察

废弃菌种和培养基灭菌后丢弃

总结微生物培养的基本程序培养基的配制—称量→溶化→调pH→分装→本节课内容结束本节课内容结束51微生物培养与应用B主要内容：大肠杆菌的纯化培养分解尿素的细菌的计数分解纤维素微生物的分离微生物培养与应用B主要内容：类型具体内容微生物的培养利用微生物的培养与分离某种微生物数量的测定培养基对微生物的选择作用利用微生物进行发酵来生产特定的产物发酵过程中亚硝酸盐含量的测定技术方法利用考纲要求：微生物的培养和利用大肠杆菌的纯化培养类型具体内容微生微生物的培养与分离某种微生物数量的测定培养基大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：培养基、培养皿分散成单个细胞,形成单个菌落大肠杆菌的纯化培养1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至10倒平板约50℃防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基大肠杆菌的纯化培养倒平板约50℃防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染灼烧灭菌，大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：⑴平板划线法：菌种划3个平板1个不划线1.接种：接种环防止划破培养基（重复实验）（空白对照）大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆平板划线法大肠杆菌的纯化培养平板划线法大肠杆菌的纯化培养问题讨论为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。大肠杆菌的纯化培养问题讨论为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：菌液微量移液器大肠杆菌的纯化培养6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：b.涂布平板：不超过0.1ml各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照滴灼试涂稀释103倍稀释104倍稀释105倍大肠杆菌的纯化培养⑵稀释涂布平板法：a.梯度稀释菌液：b.涂布平板：不超过0.⑴平板划线法：大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡纯化大肠杆菌：1.接种：⑵稀释涂布平板法：2.培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37℃恒温箱中培养12h～24h后，观察并记录大肠杆菌的纯化培养⑴平板划线法：大肠杆菌的纯化培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养菌种的保藏：1.临时保藏：试管固体斜面培养基上4℃2.长期保存：菌种易被污染、变异甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃大肠杆菌的纯化培养菌种的保藏：1.临时保藏：试管固体斜面培养基上4℃2.长期保分解尿素的细菌的计数分解尿素的细菌的计数尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3细菌脲酶分离产生脲酶的细菌分解尿素的细菌的计数尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。细菌脲酶分离产生筛选菌株提出的问题

—如何寻找耐高温的酶？解决问题的思路—寻找耐高温环境；原理—高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌，耐高温菌种提取耐高温酶。分解尿素的细菌的计数筛选菌株分解尿素的细菌的计数筛选菌株

KH2PO41.4gNaHPO42.1gMgSO4

H2O0.2g

葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？

此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？?碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。分解尿素的细菌的计数筛选菌株

KH2PO41.4g该培筛选菌株

1、选择培养基：

允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。2、菌株：

纯且活状态所保存的菌种。分解尿素的细菌的计数筛选菌株

1、选择培养基：分解尿素的细菌的计数统计菌落数目：

1、活体计数法（稀释涂布平板）（1）操作方法：

稀释涂布平板→统计菌落数（2）原理：1个菌落→1个活菌（3）统计原则

①选30∼300个菌落的平板统计

②每个稀释度取3个平板取其平均值为什么？分解尿素的细菌的计数统计菌落数目：为什么？分解尿素的细菌的计数例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。

2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。

你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）

乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值?分解尿素的细菌的计数例：两位同学用稀释涂布平板法测定同甲：没统计菌落数目

1、活菌计数法（4）统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此统计结果一般用菌落数表示。每克样品中的菌株数=（C/V)*MC:某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V:所用稀释液的体积；M:稀释倍数。为什么？分解尿素的细菌的计数统计菌落数目为什么？分解尿素的细菌的计数2、显微观察法：比例计数或直接计数（血球计数板）计数室（中央大方格）的长、宽和高分别为：1mm

、1mm和0.1mm计数室的容积：0.1mm3

（万分之一毫升）取样：稀释一定倍数的菌液分解尿素的细菌的计数2、显微观察法：比例计数或直接计数（血球计数板）计数室（中央分解尿素的细菌的计数分解尿素的细菌的计数酵母细胞数/ml＝80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数计数顺序：左上→右上→右下→左下压在格线的，只统计左线和上线3.称重法：一个细胞（细菌）一般重约10－12～10－13g分解尿素的细菌的计数酵母细胞数/ml＝80小格内酵母细胞个数/80×400×104.比浊法记数

当细菌浓度达到107个/ml时,培养基会浑浊4.比浊法记数当细菌浓度达到107个/ml时,培养基会浑浊利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别得到以下两种统计结果。1、A同学筛选出150个菌落。

2、B同学筛选出50个菌落。B认为A的培养基被杂菌污染了，或培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中生长。A确认自己的操作无误，但也拿不出能令人信服的证据。

请你帮助A同学改进实验，提供具有说明了的证据。设置对照—同等条件下，培养空白培养基?分解尿素的细菌的计数利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对应稀设置对照

1、设置对照的目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。对照实验是指除了

被测试

的条件外，其他条件都

相同

的实验。满足该条件的称为

对照组，未满足该条件的称为

实验

组。分解尿素的细菌的计数设置对照分解尿素的细菌的计数尿素培养基未接种的尿素培养基10-510-4分解尿素的细菌的计数尿素培养基未接种的尿素培养基10-510-4分解尿素的细菌的实验过程

（一）土壤取样

1、取样的位置：土壤，天然培养基，含有大量的微生物，其中70∼90％是细菌。在富含有机质的土壤层的3∼8cm处中分布着绝大多数的细菌。

2、取样要求：铲去表层土。

菌落计数配制土壤溶液系列稀释涂布平板与培养分解尿素的细菌的计数实验过程（一）土壤取样

菌落计数配制土壤溶液系列稀释（二）样品稀释（1）测细菌数：一般用104、105、106稀释液（2）测放线菌：一般用103、104、105稀释液（3）测真菌数：一般用102、103、104稀释液原则：确保平板上的菌落数在30∼300之间。（三）微生物的培养与观察

1、接种：用适当的稀释液作涂布平板

2、培养：细菌：30∼37℃，1∼2d;

放线菌:25∼28℃,5∼7d;

霉菌:25∼28℃,3∼4d.3、观察：a.每24h统计一次菌落数目

b.以“稳定菌落”为观察对象

分解尿素的细菌的计数（二）样品稀释分解尿素的细菌的计数分解尿素的细菌的计数分解尿素的细菌的计数（四）鉴定鉴别培养基：不影响微生物的生存酚红培养基：鉴定分解尿素的细菌原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性分解尿素的细菌的计数（四）鉴定分解尿素的细菌的计数分解纤维素微生物的分离分解纤维素微生物的分离纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素纤维二糖葡萄糖C1酶Cx酶葡萄糖苷酶分解纤维素微生物的分离背景知识纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种滤纸崩溃法纤维素酶活性的测定实验：分解纤维素微生物的分离背景知识滤纸崩溃法纤维素酶活性的测定实验：分解纤维素微生物的分离背景刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。分解纤维素微生物的分离背景知识刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤实验流程示意图实验流程示意图88一、实验目的二、实验原理三、所需仪器、材料、用具和药品四、实验的方法和步骤五、分析结果实验设计分解纤维素微生物的分离一、实验目的二、实验原理三、所需仪器、材料、用具和药品四、实一、实验目的1、利用特定的选择培养基和鉴别培养基从土壤中分离分解纤维素的微生物。2、掌握刚果红染色的机理和操作。分解纤维素微生物的分离实验设计一、实验目的1、利用特定的选择培养基和鉴别培养基从土壤中分离1、以纤维素为碳源的选择培养基能选择出分解纤维素的微生物。2、刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。二、实验原理分解纤维素微生物的分离实验设计1、以纤维素为碳源的选择培养基能选择出分解纤维素的微生物。2三、所需仪器、材料、用具和药品1、实验仪器与用具除了分离分解尿素的细菌中用到的有关仪器用具外，还需要恒温振荡培养箱。2、材料与药品分解纤维素微生物的分离实验设计三、所需仪器、材料、用具和药品1、实验仪器与用具除了四、实验的